早产儿游离肉碱和酰基肉碱代谢变化特点*

杨宇奇，韩小亚，周红，龙伟，虞斌

（江苏省常州市妇幼保健院，江苏 常州 213003）

早产儿是导致新生儿发病和死亡的重要原因之一。真正了解该阶段小儿的代谢特征和营养素需要的特殊性，是临床实施正确营养管理过程中不可忽视的问题[1]。本研究采用串联质谱技术检测早产儿游离肉碱和酰基肉碱的代谢水平，分析其特点，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2015年4月-2016年12月该院出生的活产早产儿1 992例，男1 104例，女888例。按是否合并低出生体重将其分为两大组：单纯早产组（孕周＜37周且体重＞2 500 g）765例，早产合并低体重组（孕周＜37周且体重＜2 500 g）1 227例。选择同期4 035例正常活产新生儿作为正常对照组（孕周＞37周且体重＞2 500 g）。其中，男性2 088例（51.7%），女性1 947例（48.3%）。排除孕妇发生不良妊娠情况。见表1。

1.2 器材和试剂

采用Waters AcquityTMTQD串联质谱仪，Waters 2777C自动进样器，Waters 1525 μ HPLC泵，非衍生化多种氨基酸、肉碱及琥珀酰丙酮测定试剂盒（neo base non-derivatized MSMS Kit，美国Perkin Elmer公司）进行筛查检测。

表1 3组临床资料比较

1.3 样本采集

按照新生儿疾病筛查技术规范（2010版）出生72 h后、充分哺乳6次后足跟采集4个血斑（滤纸片Schleicher & Schuell 903）。低出生体重者待2 500 g或出生后20 d采血。血片采集后悬空平置自然干燥成深褐色，塑料袋内封口，在规定时间内送至新生儿疾病筛查中心实验室，置入4℃冰箱保存备检。

1.4 实验操作

按本实验室串联质谱新生儿疾病筛查方法进行实验。首先从滤纸片上打下3.2 mm左右的血斑放入V底微孔板，每孔加入100 μl内标工作液，黏贴膜封板，孵育振荡45 min，温度45℃，转速4 100～4 700 r/m，然后转移75 μl至V型无包被洁净微孔板，静止2 h后上机检测样本肉碱水平[包括游离肉碱（C0）、乙酰基肉碱（C2）、丙酰基肉碱（C3）、丙二酰肉碱/3-羟基-丁酰基肉碱（C3DC/C4OH）、丁酰肉碱（C4）、肉碱（C4DC/CSOH）、异戊酰肉碱（C5）、异戊酰肉碱（C5∶1）、戊二酰肉碱/3-羟基-异戊酰肉碱（C5DC/C6OH）、甲基丙二酰肉碱/3-羟基-异戊酰肉碱（C5DC/C6OH）、已二酰肉碱（C6DC）、辛酰肉碱（C8）、辛烯酰肉碱（C8∶1）、癸酰肉碱（C10）、癸烯酰肉碱（C10∶1）、癸二烯酰肉碱（C10∶2）、十二碳酰肉碱（C12）、十二碳烯酰肉碱（C12∶1）、十四碳酰肉碱（C14）、十四碳烯酰肉碱（C14∶1）、十四碳二烯酰基肉碱（C14∶2）、3-羟基-十四碳酰肉碱（C14OH）、十六碳酰肉碱（C16）、十六碳烯酰肉碱（C16∶1）、3-羟基-十六碳酰肉碱（C16OH）、3-羟基-十六碳烯酰肉碱（C16∶1OH）、18碳酰肉碱（C18）、18碳烯酰肉碱（C18∶1）、18碳二烯酰肉碱（C18∶2）、3-羟基-十八碳酰肉碱（C18OH）及3-羟基-十八碳烯酰肉碱（C18∶1OH）]。

1.5 统计学方法

数据分析采用易侕Empowerstats软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，偏态分布以中位数（Median）、第25百分位数和第75百分位数（P25，P75）表示。根据资料分布类型，采用单因素方差分析和Kruskal Wallis秩和检验比较多组间差异。多组比较差异有统计学意义后，采用LSD-t检验和Mann-WhitneyU检验比较两组变量的差异，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般结果

1 992例活产早产儿中61.6%合并有低出生体重，38.4%出生时体重＞2 500 g。与正常对照组比较（2 843.97g vs 3 413.39 g），差异有统计学意义（P＜0.05）。所有早产病例中，104例（5.2%）分娩孕周＜30周、30～＜34周563例（28.3%）、34～ ＜37周 1 325例（66.5%）。

2.2 早产儿酰基肉碱代谢水平特点

采用单因素方差分析和Kruskal Wallis秩和检验比较多组间差异，除C10与C10∶2以外，其余的29种肉碱在早产组与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。早产组与正常组比较，其中C0、C3、C4、C5、C5DC+C6OH、C6、C8及 C18∶ 2指标 升 高；C2、C3DC+C4OH、C4DC+C5OH、C6DC、 C8∶ 1、C10∶ 1、C12、C12：1、C14，C14∶ 1、C14∶ 2、C14OH、C16、C16∶ 1、C16∶ 1OH、C18、C18∶1、C18∶1OH及C18∶OH指标降低（P＜0.05）。当早产合并低体重时，大多上述肉碱与正常新生儿的差异将进一步扩大。见表2。

表2 早产儿全血肉碱代谢水平 （μmol/L）

表3 胎龄分组 （μmol/L）

2.3 早产儿酰基肉碱与孕周的关系

将765例单纯早产儿按出生胎龄进行分组分析发现，血片中检测到的C0、C3、C5及C18∶2的值随胎龄的增长而递减，而C10、C10∶1、C14∶1随胎龄的增加也递减。见表3。

3 讨论

3.1 游离肉碱

肉碱的功能在20世纪50年代已经被阐明[2]，人体内的肉碱分为两类（即游离肉碱和酰基肉碱），其分布在能量供应需求高的组织中，是细胞内能量代谢的必须物质。其中游离肉碱作为长链脂肪酸进入线粒体的载体，在脂肪酸氧化代谢过程中起着重要的作用。本研究发现，早产儿组与正常新生儿组比较，血片中的游离肉碱浓度有差异，早产儿组游离肉碱高于正常对照组，且当合并低体重时差异增大；同时按胎龄统计765例早产儿发现，血浆游离肉碱随着胎龄的增加逐渐降低。有文献报道[3]，孕后期胎儿体内肉碱主动向组织内转运，因此血浆肉碱逐渐下降而组织中肉碱逐渐上升。而早产儿尚未完成体内游离肉碱向组织转运，血浆游离肉碱下降的过程，因此早产儿血浆游离肉碱高于足月儿，本研究结果与此相符。EMAMINAINI等[4]认为，出生低体重儿血浆游离肉碱水平的增高还可能预示着组织摄入肉碱不足，出生后转运到肝脏、骨骼肌和脑组织的肉碱增加。

3.2 酰基肉碱

酰基肉碱是肉碱是与氨基酸或脂肪酸代谢物结合的一类酯类物质。本研究将早产儿组酰基肉碱与正常对照组比较，除C10与C10∶2外，其他均有差异。早产儿组中大部分短链、中链酰基肉碱指标高于正常对照组，绝大不部分长链酰基肉碱早产组低于正常对照组。有报道认为[5]，早产组血液中中链脂肪酸的浓度高于足月儿反应机体的一种自我调节状态，而长链脂肪酸在血液中的浓度反应机体的生理和营养状态，早产组血浆长链酰基肉碱大部分低于足月组。人体中肝和肌肉是进行脂肪酸氧化最活跃的组织，围产期新生儿脂肪分解迅速利用的是皮下棕色脂肪组织而并非像营养不良患儿一样利用的肌肉组织，因此围产期新生儿肝细胞内中链酰基辅酶相对充足，而粒体内膜的肉碱棕榈酰基转移酶Ⅱ（CPTⅡ）相对不足[6]。由此笔者推断分析，早产儿由于中链酰基辅酶相对充足，因此中链酰基C10变化差异并不大。

本研究与国内外许多文献报道的情况大致相符但也有部分指标存在差异。如董丽萍等[7]发现，山东鲁中地区早产儿C0、C3、C4、C5、C5∶ 1、C5DC+C6OH、C8、C18∶2高于足月儿，而C3DC+C4OH、C4DC+C5OH、C6DC、C10、C10∶ 1、C12、C12∶ 1、C14∶ 1、C14OH、C16、C16∶ 1、C16∶ 1OH、C16OH、C18、C18∶1OH及C18OH低于足月儿；而本研究发现单纯早产儿C3高于正常组且随胎龄增加而逐渐降低，但当合并低体重时均值反而会低于正常组，这与山东鲁中地区统计的C3低体重儿高于正常组相反。吴鹰军等[8]研究101例新生儿发现C0、C4DC、C14、C16、C16∶ 1、C18及 C18∶ 1随 着妊娠时间的增加而升高，结果中C0指标与本研究结果相反。而IMAN MANDOUR等[9]统计131例早产儿出生后第5天和第14天以及足月第5天后的发现早产儿中血浆肉碱中大部分在过早组（第5天）中提高（C0，C4，C5，C6，C8，C10∶1，C18∶1-OH），其中C10∶1和C18∶1-OH的结果又与本研究及董丽萍、吴鹰军等相悖。该差异可能是因为生物样本的复杂性（人群、种族及地区差异等），加上分析技术和方法学的差异造成。由于代谢组学分析技术和操作条件的多样化，使得大量产生的数据和结果缺乏规范性，这给代谢组学数据的采集、存储、查询、比较、共享及整合等带来诸多不便[10]。因此如果想比较或共享早产儿代谢组学数据就必须构建一个完善的早产儿代谢产物数据库，同时需标准化代谢数据的处理和研究。

本研究的样本均来自常州地区2015年-2016年出生的早产儿，样本量有限，且由于标本数量少尚未采取本地化的参考值，因此研究结果存在一定的局限性。如要为临床医生提供更为可靠的早产儿肉碱代谢变化的特点，需要收集更多的临床数据并通过长期随访来进行验证。