血清HGF、PDGF、CysC与急性冠脉综合征相关性研究

董小春，彭彩莲，王玉山

急性冠脉综合征（ACS）属于冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病，CHD）的一种严重急症表现，是由于冠状动脉（冠脉）粥样斑块破裂继发性引起的完全或不完全血管狭窄和阻塞，具体发病机制不明，致死率较高，包括不稳定型心绞痛（UA）、ST段抬高型心肌梗死（STEMI）和非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）[1,2]。目前，临床上治疗CHD常见的方式包括药物保守治疗、经皮冠状动脉介入治疗（PCI）以及冠脉搭桥手术（CABG）等[3]。但是由于ACS病变的严重性和复杂性，临床上常见的CHD治疗手段对于ACS效果并不理想，因此，积极探索ACS的发病机制以及新的治疗策略势在必行。众多研究证实，动脉粥样硬化导致的血管内皮损伤是ACS发生的重要病理基础，因此对于内皮损伤相关血管因子的探讨一直是近些年的研究热点，治疗性血管新生为ACS患者提供了全新的治疗方向和希望。本项研究通过探讨ACS患者冠脉内和外周血中肝细胞生长因子（HGF）、血小板衍生生长因子（PDGF）、胱抑素C（CysC）等三种多效生长因子表达的变化以及与ACS的相关性，初步为血管生长因子相关性个体化治疗ACS提供理论支持。现研究报告如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料本项研究选取2017年1月～2017年11月期间于赤峰学院附属医院心内科进行冠状动脉造影术（CAG）并住院接受治疗的162例ACS患者的临床资料，其中男性94例，女性68例，年龄41～83（62.37±7.41）岁，包括61例UA患者，STEMI患者53例和NSTEMI患者48例。另外选择同时期在我院进行CAG检查未发现结果异常，心肌酶和肌钙蛋白检查呈阴性的47例受试者作为对照组纳入本项研究。对ACS患者进行Gensini评分以评估疾病程度。本项研究已获得伦理委员会批准。两组患者在年龄、性别、体质指数（BMI）、糖尿病史、高血压病史、吸烟史方面无统计学差异（P＞0.05，表1）。

表1 患者的一般临床资料分析

1.2 诊断标准

1.2.1 临床分型[4]①UA：发作频繁，持续时间≥20 min，经心电图检查，动态ST段水平型或下斜型压低≥1 mm或ST段抬高（肢体导联≥1 mm，胸导联≥2 mm）；当发作时心电图显示ST段压低≥0.5 mm但＜1 mm；胸痛发作时有一过性ST段变化。心肌肌钙蛋白一般无异常性升高。②STEMI：早期心电图表现为ST段弓背向上抬高（呈单向曲线）伴或不伴病理性Q波、R波减低；超急期心电图可表现为异常高大且两支不对称的T波；心肌肌钙蛋白持续升高，并表现出动态变化。③NSTEMI：心电图持续变化≥12 h，持续性ST段≥1 mm或伴有对称性T波倒置；导联电波进行性降低；心肌肌钙蛋白持续升高，并超过正常值3倍以上。

1.2.2 病变支数①单支病变：左冠状动脉的左前降支（LAD）、左回旋支（LCX）、右冠状动脉（RCA）中任一单支血管狭窄＞50%。②双支病变：LAD、LCX、RCA中任意两单支血管狭窄＞50%或者左主干（LM）病变。③三支病变：LAD、LCX、RCA均狭窄，或者LM合并RCA同时病变。

1.2.3 患者纳入及排除标准纳入标准：①所有患者经CAG、临床症状以及辅助检查确诊为ACS；②具有完整的临床资料；③由患者或家属签署知情同意书。排除标准：①不符合上述纳入标准的患者；②患者在治疗前出现严重的意识障碍、高血压危象、急性心衰等；③先天性心脏病患者；④合并严重的免疫系统疾病或急慢性严重感染患者；⑤合并严重的肝肾功能损伤；⑥合并严重的血液系统疾病，或伴有出血性疾病；⑦恶性肿瘤患者等。

1.3 方法

1.3.1 主要仪器和试剂5810R型台式冷冻离心机，德国Eppndorf；美国ELX-808型全自动定量绘图酶标仪，美国Bio Tek；迈瑞BS-350型全自动生化分析仪，中国迈瑞。HGF、PDGF、CysC ELISA试剂盒，购自美国R&D生物科技有限公司。

1.3.2 冠状动脉造影术（CAG）患者在检查前，适度放松手腕，自桡骨茎突上2 cm处行穿刺，经鞘管注射3000～6000 U肝素，对左右冠状动脉进行全方位拍片检查，采用DSA图像处理系统定量分析冠状动脉狭窄程度，以Gensini评分系统来评价：1分，狭窄＜25%；2分，25%～50%狭窄；4分：51%～75%狭窄；8分：76%～90%狭窄；16分：91%～99%狭窄；32分，100%狭窄。冠状动脉各段所占的系数：LM×5；前降支近、中、远段分别×2.5、×1.5、×1；第一及第二对角支分别×1、×0.5；回旋支近、中、远段分别×2.5、×1.5、×1；右冠状动脉近段、中段、远段、后降支、左室后支分别×1，所有病变得分相加为最后总分。

1.3.3 检测指标所有受试者在进行CAG时，采集桡动脉或股动脉外周血5 ml。将血液样本室温下离心，取上清，置于-80℃保存备用。根据ELISA试剂盒说明书介绍的实验步骤检测血清HGF、PDGF、CysC表达水平。采用全自动定量绘图酶标仪在波长450 nm处测定OD值。

1.4 统计学处理本资料采用SPSS 21.0统计学软件进行数据统计分析等，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数（构成比）表示，采用卡方检验；相关性分析采用Spearman检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。将单因素分析中P＜0.05的因素纳入多因素Logistic回归模型分析与Gensini评分的相关性。

2 结果

2.1 两组患者术前检查结果比较比较两组受试者入院时血液生化指标，结果显示，ACS患者血小板计数（PLT）、空腹血糖（FPG）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量高于对照组受试者，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组受试者其他各项指标包括糖化血红蛋白（HbAlc）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）无统计学差异（P＞0.05）（表2）。

表2 两组受试者入院时检查结果比较

2.2 两组受试者外周血HGF、PDGF、CysC水平以及Gensini评分比较ACS患者外周血HGF、PDGF和CysC的含量值均高于对照组患者外周血含量值，差异有统计学意义（P＜0.05）。另外，ACS患者Gensini评分为（33.91±1.08）分，远高于对照组受试者，差异有统计学意义（P＜0.05）（表3）。

表3 两组受试者外周血HGF、PDGF、CysC水平和Gensini评分比较

2.3 不同类型ACS患者外周血HGF、PDGF、CysC水平比较UA、STEMI和NSTEMI型ACS患者外周血HGF、PDGF、CysC水平以及Gensini评分基本一致，差异有统计学意义（P＜0.05）（表4）。

表4 不同临床类型ACS患者外周血HGF、PDGF、CysC水平和Gensini评分比较

2.4 不同病变支数ACS患者外周血HGF、PDGF、CysC水平比较比较不同病变分支ACS患者外周血HGF、PDGF、CysC水平以及Gensini评分，结果显示，三支病变的ACS患者外周血HGF、PDGF、CysC水平以及Gensini评分最高，差异有统计学意义（P＜0.05）。说明病变血管越多，Gensini评分越高，外周血HGF、PDGF、CysC水平也越高（表5）。

表5 不同病变支数ACS患者外周血HGF、PDGF、CysC水平和Gensini评分比较

2.5 HGF、PDGF、CysC与Gensini评分相关性分析采用Spearman相关性分析，ACS患者Gensini评分与HGF、PDGF、CysC表达呈正相关性，（P＜0.05）（表6、图1）。

2.6 多因素Logistic回归分析以Gensini评分作为因变量，将HGF、PDGF、CysC表达水平以及病变分支数作为自变量，经多因素Logistic回归分析结果显示，HGF、PDGF、CysC表达水平升高以及病变分支数增加是ACS病变严重程度的危险因素（P＜0.05，表7）。

3 讨论

冠心病是我国发病率和致死率较高的心脑血管疾病之一，且近年呈年轻化趋势，给患者及家庭增加了极大的经济负担。ACS属于冠心病中最严重、最复杂的急症类型。近些年，多项研究证实，冠脉内皮血管损伤、氧化应激反应、炎症反应、泡沫细胞破裂等与ACS的发生发展密切相关[5]。尤其是内皮损伤炎症学说，得到越来越多相关学者的认可，各种病变机制最终都会导致动脉血管内皮损伤[6]，所以本项研究着重讨论ACS患者冠脉内和外周血中HGF、PDGF、CysC等内皮修复相关因子表达的变化及其与ACS严重程度的相关性。本项研究结果发现，ACS患者外周血HGF、PDGF和CysC的含量值均高于对照组患者，并且病变分支数越多，ACS患者外周血HGF、PDGF和CysC水平越高，提示HGF、PDGF和CysC与ACS患者病变程度密切相关。经Spearman相关性分析以及多因素Logistic回归分析，ACS患者疾病严重程度与HGF、PDGF、CysC表达呈正相关性，HGF、PDGF、CysC水平升高是ACS进展的独立危险因素。

HGF、PDGF都属于多功能细胞因子，与炎症反应的发生、血管生成、细胞凋亡等生理病理过程密切相关[7]。HGF来源于间质细胞，可特异性与C-met受体结合，从而启动多条信号通路，参与血管新生、内皮细胞增殖等，具有保护缺血性心肌细胞的作用[8]。有动物实验显示，心肌内注射HGF可促使微血管生成，增加心肌缺血区的血液供应，从而改善心功能[9]。本项研究结果显示，ACS患者外周血中HGF水平升高，可能与RAS系统激活有关；冠脉血管HGF分泌被抑制，导致其他未受损组织代偿性分泌HGF进入外周血，从而抑制ACS进展[10]。

表6 Gensini评分与HGF、PDGF、CysC表达相关性分析

表7 ACS患者Gensini评分多因素Logistic回归分析

与HGF类似，PDGF也具有多种生理效应，可通过抑制内皮衍生舒张因子的合成促进血管收缩[11]。PDGF受体分为α和β两种亚型，PDGF主要与PDGFR-β结合发挥生物学效应。ACS患者冠脉内膜损伤后，导致血小板、单核细胞等功能激活，同时产生凝血酶，促进PDGF的释放，诱导平滑肌细胞向内膜迁移，通过激活PDGF/PDGFR-β通路刺激血管内皮增生[12]。近年来，越来越多的研究将PDGF作为ACS治疗靶点或者基因冠脉搭桥术的候选基因[13]。

CysC属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂，但是目前关于CysC参与ACS发生、发展的作用机制尚不明确，据推测可能是与调节细胞外基质的合成和降解和促使氧自由基释放有关[14]。ACS患者内皮受到损伤，促使大量炎性因子释放入血，从而增加半胱氨酸蛋白酶的表达，使得CysC反馈性增加；另一方面CysC可通过释放氧自由基促使氧化低密度脂蛋白以及泡沫细胞的形成，从而导致粥样斑块的生成[15]。因此，CysC也属于粥样硬化斑块加重和破裂的重要因素。

综上所述，HGF、PDGF、CysC与ACS的发生发展密切相关，可作为ACS诊断和预测疾病严重程度的分子标志物，为血管新生的个体化基因治疗提供潜在的靶点和方向。