颅脑创伤血清标志物miR—124的表达及其意义的研究

毛剑

【摘要】 目的：研究颅脑创伤血清标志物miR-124（脑组织特异性的miRNA-124）的表达及其意义。方法：选取2014年11月-2015年6月本院接診的颅脑创伤患者38例为研究组，另选38例正常人为正常组。研究组采取积极的手术治疗，正常组不予以任何治疗措施。比较两组miR-124、白细胞介素10（IL-10）、调节性T细胞（Treg细胞）的表达水平及治疗前格拉斯哥昏迷量表（GCS）评分、预后格拉斯哥结局评分（GOS）。结果：入院4、24 h，研究组miR-124、IL-10水平和Treg细胞比例均显著高于正常组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）；研究组治疗前GCS评分明显低于正常组（P<0.05）；两组预后GOS评分和miR-124表达水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：血清标志物miR-124与颅脑创伤诊断和预后有一定的关系，其能够帮助临床医师开展个体化治疗和早期更精确地估计预后，值得在临床大力推广。

【关键词】 颅脑创伤； 血清标志物； miR-124

【Abstract】 Objective：To study the expression and significance of serum marker miR-124 （brain specific miRNA-124） in patients with traumatic brain injury.Method：A total of 38 patients with craniocerebral trauma admitted to our hospital from November 2014 to June 2015 were selected as study group，and another 38 normal people were selected as normal group.The study group received active surgical treatment，while normal group did not receive any treatment.The expression level of miR-124，interleukin 10（IL-10），regulatory T cells（Treg cells） and the scores of the lasto Coma Scale（GCS） before treatment and the prognosis of Glasgow outcome score（GOS） between two groups were compared.Result：After admission 4 and 24 h，the levels of miR-124，IL-10 and Treg cell proportions in study group were significantly higher than those of normal group（P<0.05）.The GCS score of study group before treatment was significantly lower than that of normal group（P<0.05）.The prognosis of GOS and miR-124 expression level between two groups were compared，the differences were not statistically significant（P>0.05）.Conclusion：Serum marker miR-124 has a certain relationship with the prognosis of traumatic brain injury，which can help clinicians carry out individualized treatment and early accurate estimation of prognosis，it is worth popularizing in clinical practice.

【Key words】 Craniocerebral trauma； Serum markers； miR-124

First-authors address：No.184 Hospital，Yingtan 335000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.20.025

颅脑外伤是神经外科的多发疾病，改善预后是一切医疗活动的核心和最终目标，早期判断颅脑创伤病情严重性，对预后进行估计并给予合适的个体化治疗对重型颅脑创伤患者至关重要[1-2]。目前临床上常用的患者预后估计工具主要包括临床指标（GCS评分、并发症、瞳孔变化等）、影像学资料（CT、MR等）和颅内压变化等[3]。尽管这些工具给颅脑创伤救治工作带来了很大改善，但其本身亦存在各种局限性，如难以从病理生理学角度判断脑损伤程度、对病情严重性定量程度不足、容易受各种临床因素如醉酒、镇静和肌肉松弛药物的影响[4]。因此，急需一种新的预后预测和分级方法，能够在颅脑创伤急性期对预后进行充分定量，并且稳定性高，能够直接反应脑损伤病理生理学变化，帮助临床医师开展个体化治疗和早期更精确地估计预后。研究表明，颅脑损伤后机体可应激产生一系列的炎症反应和免疫应答，形成“瀑布效应”进一步加重脑损伤[5]。miR-124（脑组织特异性的miRNA-124）在神经系统疾病研究较多，在脑缺血中表达上调，并且和胶质瘤、阿尔茨海默病的发生发展有一定关系[6]，且研究发现心肺复苏后血清miR-124的表达明显升高，并与颅脑损伤的程度有一定关系，还可参与调解免疫反应[7]。因此本研究选取本院接诊的38例颅脑创伤患者和38例正常人作为对比，研究颅脑创伤血清标志物miR-124的表达及其意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年11月-2015年6月本院接诊的颅脑创伤患者38例为研究组。纳入標准：有明确头部外伤史；年龄18～75岁；格拉斯哥昏迷量表（GCS）评分3～15分[8]；经本院医学伦理委员会批准，且患者或家属自愿签署知情同意书。排除标准：曾经损伤过脑颅的患者；患有肝肾功能不全，缺血性心脏病，甲状腺功能异常，2型糖尿病的患者；临床资料不完全患者等。另选38例正常人（医院体检的健康成年人）为正常组。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 （1）miR-124的检测：入院4、24 h，抽取两组静脉血，肝素抗凝，利用荧光定量聚合酶联反应（RT-PCR）测定外周血中单个核细胞中miR-124表达量，用标准曲线法计算miR-124表达量。（2）白细胞介素（IL-10）的检测：将已分离的血浆标本从冰箱取出置于室温下，待溶解后离心取上清液，应用酶联免疫吸附试验（ELIAS）检测血清中IL-10的含量。（3）Treg细胞的检测：利用购自美国BD公司流式细胞仪检测Treg细胞，并采用Cellquest Pro软件进行分析。

1.2.2 治疗方法 参考颅脑创伤临床救治指南（第3版）[9]，对颅脑创伤患者应采取积极的手术治疗；正常组不予以任何治疗措施。

1.3 观察指标及判定标准 （1）比较两组入院4、24 h的miR-124、IL-10水平和Treg细胞比例。（2）患者病情及预后评估，采用格拉斯哥结局评分（GOS）评估治疗15 d后的预后情况。其中5分：总体痊愈良好，有些小的残疾，能够恢复正常生活；4分：中度残疾，但尚可独立生活，可以在保护下工作；3分：严重残疾，日常生活不能独立，需要别人照顾；2分长期持续的植物生存状态，存在眼部的活动和睡眠周期；1分：死亡[10]。

1.4 统计学处理 使用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验，组内比较采用配对t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料比较 两组年龄、性别比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

2.2 两组入院4、24 h的miR-124、IL-10水平和Treg细胞比 例比较 入院4、24 h，研究组miR-124、IL-10水平和Treg细胞比例均显著高于正常组，比较差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3 两组GCS、预后GOS评分及miR-124比较 研究组治疗前GCS评分明显低于正常组，差异有统计学意义（P<0.05）；研究组治疗15 d后，两组预后GOS评分和miR-124表达水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表3。

3 讨论

颅脑外伤是外界暴力直接或间接作用于头部所造成的损伤[11-12]。常见的脑外伤有头皮裂伤、头皮撕脱伤、头皮血肿、颅骨骨折、脑震荡、脑挫裂伤、颅内血肿等。受伤后有不同程度的头痛、呕吐、视乳头水肿及意识、思维、感觉、运动障碍。颅脑外伤病情复杂、变化快，病情严重性不易判断[13]。故早期判断颅脑创伤病情严重性，对预后进行估计并给予合适的个体化治疗对重型颅脑创伤患者至关重要[14-15]。目前临床上常用的患者预后估计工具主要包括临床指标（GCS评分、并发症、瞳孔变化等）、影像学资料（CT、MR等）和颅内压变化等[16]。尽管这些工具给颅脑创伤救治工作带来了很大改善，但其本身亦存在各种局限性，如难以从病理生理学角度判断脑损伤程度、对病情严重性定量程度不足、容易受各种临床因素如醉酒、镇静和肌肉松弛药物的影响[17]。因此，急需一种新的预后预测和分级方法，能够在颅脑创伤急性期对预后进行充分定量，并且稳定性高，能够直接反应脑损伤病理生理学变化，帮助临床医师开展个体化治疗和早期更精确地估计预后。世界关于miR-124的研究刚刚起步[18-19]，因此关于血清miR-124与颅脑创伤预后关系的研究具有创新性。

miRNAs是一类由20～25个核苷酸组成、具有调控功能且存在于真核细胞的内源性非编码RNA。其在机体内的表达与代谢、个体发育、疾病进展等密切相关，而miR-124作为一种脑组织特异性miRNA，在颅脑损伤中其含量有明确改变[20]。生理状态下，外周血中miR-124表达较低，但脑组织损伤时可反应性的被释放入血，增加其在血液中的浓度[21]。一方面，miR-124可通过对辅助T细胞（Th1/Th17）分化和活化T细胞分泌细胞因子的调控作用参与机体的免疫应答[22]；另一方面，miR-124存在可调控AT1R及转录因子的靶基因，在改善内皮细胞迁移期内miR-124表达升高的过程中，可促进炎性因子和特异性抗体的释放，对颅脑组织损伤有一定影响[23]。另外，miR-124若过度激活则可能造成免疫细胞的过度活化和促炎因子的爆发性释放，进而加重颅脑损伤。Treg细胞通过分泌IL-10和转化生长因子（TGF-β1）对免疫功能有增强和抑制的双重作用，对维持细胞免疫平衡有不容忽视的作用[24]。此外，有学者研究表明，颅脑损伤患者miR-124升高，可促进Treg细胞增殖，从而使机体免疫应答、炎症反应均处于混乱的失衡状态，不利于患者预后[25]。

因此，为了进一步研究颅脑创伤血清标志物miR-124的表达及其意义，本研究选取本院接诊的38例颅脑创伤患者和38例正常人进行研究，结果如下：入院4、24 h，研究组miR-124、IL-10水平和Treg细胞比例均显著高于正常组，比较差异均有统计学意义（P<0.05），表明此3种指标对颅脑创伤有一定诊断价值。研究组治疗前GCS评分明显低于正常组（P<0.05）；两组预后GOS评分和miR-124表达水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。提示治疗后研究组两者表达水平与正常人相近。这充分说明血清标志物miR-124作为一种新手段在颅脑创伤急性期对预后进行充分定量，并且稳定性高，能够直接反应脑损伤病理生理学变化，帮助临床医师开展个体化治疗和早期更精确地估计预后。

综上所述，血清标志物miR-124对颅脑创伤的诊断和预后有一定的关系，其能够帮助临床医师开展个体化治疗和早期更精确地估計预后，值得在临床大力推广。

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（收稿日期：2018-03-27） （本文编辑：董悦）