C-erbB-2、p53蛋白在遵义地区妇女子宫内膜不同病变组织中的表达的研究

肖欣

子宫内膜癌是女性生殖系统常见的三种恶性肿瘤之一,在发达国家, 其发病率已高居女性生殖道恶性肿瘤之首［1］。近年来, 我国上海等大中城市的子宫内膜癌发病率有逐年上升的趋势, 且发病年龄渐趋年轻化。目前, 在上海市区,子宫内膜癌发病率已超过宫颈癌, 其中, 以子宫内膜样腺癌(endometrioid adenocarcinoma, EA)最为常见［2］。而有关遵义地区妇女子宫内膜样腺癌的发生率, 尚未见相关报告。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集本院2006年1月～2016年12月刮宫或手术切除经病理科确诊的标本100例, 按照组织学分级分为Ⅰ级38例, Ⅱ级 41例, Ⅲ级 21例, 上述标本经过 10%福尔马林液固定, 常规脱水 , 石蜡包埋 , 连续切片 4 μm厚为标准, 苏木精-伊红染色法(HE)染色, 并进行重新阅片明确诊断。选取同期正常子宫内膜、增生性病变、子宫内膜上皮内瘤变 (endometrial intraepithelial neoplasia, EIN) 各 20 例作为对照。

1.2 试剂 鼠抗人单克隆抗体C-erbB-2、鼠抗人单克隆抗体p53、免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司, 工作浓度分别为1∶100、1∶150.

1.3 方法 将存档的石蜡块4 μm厚标准连续切片, 行 HE染色和免疫组化染色。免疫组化实验步骤严格按照试剂盒说明书进行操作：石蜡切片脱蜡至水后, 蒸馏水冲洗, 3%过氧化氢溶液封闭(10 min), 抗原修复(p53采用pH 6.0枸橼酸盐缓冲液高压修复, C-erbB-2采用pH 9.0 EDTA 抗原修复液微波修复), 磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗, 加一抗 , 湿盒 4℃冰箱过夜 , PBS 冲洗 , 滴加二抗 (室温 30 min), PBS 冲洗 , 用 DAB显色 (镜下控制 ), 苏木素复染 , 酒精脱水 , 二甲苯透明 , 封片。一抗的工作浓度为1∶100, 二抗为即用型。用PBS代替一抗作阴性对照, 用预试验中已知的阳性片作阳性对照。

1.4 染色结果判定标准 C-erbB-2的阳性信号主要定位于细胞膜, p53蛋白的阳性信号主要定位于细胞核。细胞出现棕黄色颗粒、黄色颗粒或棕褐色颗粒为阳性, 评分标准如下：①着色强度：无色为0分, 淡黄色为 1分, 棕黄色为2分, 棕褐色为 3分；②计数标准：无阳性细胞为0分, 阳性细胞≤25%为1分, 阳性细胞26%～50%为2分, 阳性细胞51%～75%为3分, 阳性细胞＞75%为4分, 以①②两项相加的结果作为综合评分：0分为 (-), 1～3分为 (±), 4～5 分为 (+),6～7 分为 (++), 其中 (+)和 (++)判为阳性。

1.5 统计学方法 采用SPSS23.0统计学软件对数据进行处理。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 C-erbB-2、p53在子宫内膜不同病变组织中阳性表达情况比较 C-erbB-2、p53蛋白在正常子宫内膜组织中阳性表达率分别为5.00%、0, 在增生性病变组织中阳性表达率分别为10.00%、15.00%, 在EIN组织中阳性表达率分别为60.00%、45.00%, 在EA组织中阳性表达率分别为50.00%、59.00%；C-erbB-2、p53蛋白在正常子宫内膜组织中阳性表达率与在EIN、EA组织中比较, C-erbB-2、p53蛋白在增生性病变组织中阳性表达率与在EIN、EA组织中比较, 差异均具有统计学意义(P＜0.05)。C-erbB-2、p53蛋白在正常子宫内膜组织中阳性表达率与在增生性病变组织中比较, 在EIN组织中阳性表达率与在EA组织中比较, 差异均无统计学意义 (P＞0.05)。见表 1, 图 1, 图 2。

2.2 C-erbB-2和p53在不同EA组织学分级中阳性表达情况比较 不同EA组织学分级中C-erbB-2、p53蛋白的阳性表达率比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表1 C-erbB-2、p53在子宫内膜不同病变组织中阳性表达情况比较(n,%)

图1 EA肿瘤细胞膜表达C-erbB-2, Elivision法×400

图2 EA肿瘤细胞核表达p53 Elivision法×400

表2 C-erbB-2和p53在不同EA组织学分级中阳性表达情况比较(n,%)

3 讨论

C-erbB-2是表皮生长因子受体家族成员之一, 定位于染色体17q21, 编码相对分子量185 kD的络氨酸蛋白。在许多种恶性肿瘤组织中存在C-erbB-2基因扩增及蛋白的过度表达, 许多研究［3］显示, 肿瘤组织内存在 C-erbB-2过度表达和基因扩增时, 更容易发生转移和复发, 而且预后不佳。人类p53基因定位于染色体17p13, 是一种转录因子 , 转录 2.8 kD的mRNA, 编码蛋白质为p53, p53是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因, 通过生长抑制、诱导细胞凋亡、促进细胞分化达到抑制肿瘤的作用。该基因突变、失活在肿瘤生长与浸润过程中具有重要作用［4］。

本研究结果显示, C-erbB-2、p53蛋白在正常子宫内膜组织中阳性表达率与在EIN、EA组织中比较, C-erbB-2、p53蛋白在增生性病变组织中阳性表达率与在EIN、EA组织中比较, 差异均具有统计学意义 (P＜0.05)。C-erbB-2、p53蛋白在正常子宫内膜组织中阳性表达率与在增生性病变组织中比较, 在EIN组织中阳性表达率与在EA组织中比较, 差异均无统计学意义(P＞0.05)。提示两种基因蛋白的阳性表达参与了EA的发生发展。

本组100例EA中, C-erbB-2的阳性表达率随组织学分级的升高而逐渐降低, 而p53的阳性表达率则随组织学分级的升高而逐渐升高, 但不同EA组织学分级中C-erbB-2、p53蛋白的阳性表达率比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。提示两种基因蛋白的阳性表达与恶性程度无关, 但C-erbB-2可能在EA发生的起始阶段发挥一定的作用, 是EA发生的早期事件；一旦出现p53基因的突变, 则肿瘤可能向更高的恶性程度发展。

总之, 联合检测C-erbB-2和p53可能成为临床诊治子宫内膜样腺癌的重要参考依据。