宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11、miR-590-3p的表达观察

杨勇莉，王晓武，韦静，邵娜娜

(青海大学附属医院，西宁810001)

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，2011年有学者[1]报道全球每年有超过200,000例女性患宫颈癌，且鳞状细胞癌是宫颈癌的主要类型。宫颈鳞状细胞癌的早期发现及根治能够有效防止复发[2]，但宫颈癌患者的术后5年总生存率低于50%[3]，预后较差。研究[4]表明，非编码RNA(non-coding RNA，ncRNA)能够调控细胞凋亡、转移等，参与宫颈鳞状细胞癌的发生发展。微小RNA(miRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)都属于ncRNA[5]。miRNA是一种能够通过结合其靶基因转录本的互补位点抑制翻译从而调控基因表达的短小RNA[6]。miRNA在多种类型的癌症，如膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌中调控细胞的增殖、凋亡、分化[7～10]。宫颈癌中的miRNA可分为致癌因子或抗癌因子[11]。目前有关微小RNA-590-3p(miR-590-3p)在宫颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义的相关报道较少。研究[12]表明，lncRNA能够与miRNA相互调节共同参与肿瘤的进展，并且lncRNA和miRNA之间的调节关系已成为目前的研究热点。但是有关lncRNA 与miRNA在宫颈癌中表达的相关性及临床意义研究报道较少。本研究观察了宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11和miR-590-3p的表达变化，分析两者表达的相关性，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2012年8月～2013年7月在青海大学附属医院接受子宫切除手术治疗的宫颈鳞状细胞癌患者69例。纳入标准：①术前未接受化疗、放疗、内分泌治疗等抗肿瘤治疗；②术后经病理检查证实为宫颈鳞状细胞癌；③具备完整的病历和随访资料。排除标准：①合并乳腺癌、卵巢癌等恶性肿瘤；②合并严重肝、肾等重要器官功能不全。手术过程中切取癌组织及癌旁正常组织(距离癌组织>3 cm)。69例患者的年龄为29～68岁，其中<50岁者34例、≥50岁者35例；根据国际抗癌协会的TNM分期标准分为Ⅰ期+Ⅱ期46例、Ⅲ期+Ⅳ期23例；肿瘤分化程度为低分化27例、中分化22例、高分化20例；有淋巴结转移者36例，无淋巴结转移者33例；妇科人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染者43例，无HPV感染者26例；癌组织直径<4 cm者30例、≥4 cm者39例。所有患者随访资料完整，以患者术后出院为随访观察起始时间，随访方式包括电话、来院复诊。末次随访时间为2017年8月，随访时间5～60个月。本研究获得医院伦理委员会批准，研究对象在知情同意书上签字。

1.2 仪器与试剂 D-37520型低温离心机和NanoDrop2000紫外微量光度计均购自Thermo公司,GT9612型普通梯度PCR仪购自Biotek公司,MX3005P实时荧光定量梯度 PCR 仪购自美国 Aglient公司。TRIzol购自Life公司，DEPC购自Sigma公司，逆转录试剂盒、SYBR Green Master Mix试剂盒均购自诺唯赞公司。

1.3 受检组织中lncRNA HCG11、miR-590-3p的检测方法 分别取适量宫颈鳞状细胞癌组织和癌旁组织，加入TRIzol提取总RNA，用分光光度计测量RNA的浓度。按照逆转录试剂盒说明书操作，将总RNA反转录为cDNA。根据SYBR Green Master Mix试剂盒说明书上的反应体系及反应程序，进行实时荧光定量PCR，检测相关基因的表达。lncRNA HCG11、miR-590-3p的引物引物序列用Primer Premier5.0设计，以GAPDH基因作为内参。lncRNA HCG11正、反向引物分别为5′-GCTCTATGCCATCCTGCTT-3′、5′-TCCCATCTCCATCAACCC-3′；miR-590-3p正、反向引物分别为5′-TAATTTTATGTATAAGCTAGT-3′、5′-GCTGAGGTGCTGTGGT-3′；GAPDH正、反向引物分别为5′-TGGATTTGGACGCATTGGTC-3′、5′-TTTGCACTGGTACGTGTTGAT-3′。用2-ΔΔCt表示受检组织中lncRNA HCG11、miR-590-3p的相对表达量。

2 结果

2.1 宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织中lncRNA HCG11和miR-590-3p的表达量比较 宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织中lncRNA HCG11的相对表达量分别为0.41±0.33、1.04±0.12，两者相比，P<0.05。宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织中miR-590-3p的相对表达量分别为14.6±5.94、1.06±0.23，两者相比，P<0.05。宫颈鳞状细胞癌组织中的lncRNA HCG11与miR-590-3p的表达量呈负相关(r=-0.597,P<0.01)。

2.2 宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11、miR-590-3p表达量与宫颈鳞状细胞癌患者临床病理参数的关系 宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11和miR-590-3p的表达量与肿瘤组织大小、有无淋巴结转移以及临床分期有关(P均<0.05)，与患者年龄、有无妇科HPV感染、分化程度无关(P均>0.05)，见表1。

表1 癌组织中lncRNA HCG11、miR-590-3p表达量与宫颈鳞状细胞癌患者临床病理参数的关系

2.3 宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11、miR-590-3p表达量与宫颈鳞状细胞癌患者预后的关系 以宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11、miR-590-3p相对表达量的平均值为界，将宫颈鳞状细胞癌患者分为lncRNA HCG11高表达组(32例)与lncRNA HCG11低表达组(37例)、miR-590-3p高表达组(36例)与miR-590-3p低表达组(33例)。lncRNA HCG11高表达组患者5年总生存率为87.5%(28/32)、低表达组为59.46%(22/37)，两者相比，P<0.01。miR-590-3p高表达组患者5年总生存率为58.33%(21/36)、低表达组为81.82%(27/33)，两者相比，P<0.01。

3 讨论

miRNAs在各种人类癌症的肿瘤发生中发挥重要作用[13, 14]。miRNA能够结合下游mRNA，在转录水平调节mRNA的表达，使mRNA转录或降解[15]。miRNA包括癌基因和抑癌基因，参与细胞的增殖、凋亡、分化等过程[16]。miRNA参与多种癌症的进展过程，可以作为治疗癌症的潜在靶分子。miR-590-3p是一种新发现的miRNA，能够通过调节PTEN基因促进肝癌细胞的增殖[17]。Sun等[18]研究发现，miR-590-3p能促进结肠癌细胞的增殖和转移。miR-590-3p在胰腺癌细胞中表达上调，miR-590-3p可能是维持胰腺癌干细胞特性的关键基因[19]。本研究发现，miR-590-3p在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达与癌旁组织相比上调，miR-590-3p在宫颈鳞状细胞癌中的表达量与肿瘤组织大小、有无淋巴结转移以及临床分期相关。本研究还发现，miR-590-3p低表达组宫颈鳞状细胞癌患者术后5年总生存率较高，可以作为预测宫颈癌预后的靶分子。

研究[20]表明，lncRNA的异常表达均与癌症发生相关，在癌细胞的转移及术后预后中发挥关键作用。通路富集分析显示lncRNA HCG11主要参与MAPK信号通路、钙信号通路、Jak-STAT信号通路、Wnt信号通路和GnRH信号通路[21]，在调控信号转导、转录、细胞黏附、发育和蛋白质氨基酸磷酸化中起关键作用。有研究[22]报道lncRNA HCG11在多种肿瘤中表达失调并且能够作为判断某些肿瘤预后的潜在指标。Quagliata等[23]的研究发现，敲降lncRNA HCG11不仅抑制肝癌细胞的生长，而且抑制了癌细胞的转移，验证了lncRNA HCG11在肝癌进展中的关键作用。有研究[24]发现，肝癌组织中lncRNA HCG11表达上调，进一步研究发现lncRNA HCG11能够调节线粒体凋亡，进而促进肝癌的发生。但Zhang等[21]的研究表明，在前列腺癌中lncRNA HCG11表达下调并且与患者预后不良有关。本研究发现lncRNA HCG11在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达显著低于癌旁组织，lncRNA HCG11在宫颈鳞状细胞癌患者中的表达量与肿瘤组织大小、有无淋巴结转移以及临床分期相关，lncRNA HCG11高表达组子宫颈鳞状细胞癌患者术后5年总生存率较高，说明lncRNA HCG11表达量与患者预后呈正相关，可以作为宫颈鳞状细胞癌预后判断的靶分子。本研究还发现，lncRNA HCG11的表达量与miR-590-3p的呈负相关，即lncRNA HCG11高表达的宫颈鳞状细胞癌组织中，miR-590-3p表达量明显下调。由此推测，lncRNA通过海绵样吸附作用，与miRNA发生竞争性结合，抑制miRNA的转录调控，即lncRNA HCG11可能通过在转录水平调控miR-590-3p的表达发挥抑癌作用[18]。

综上所述，在宫颈鳞状细胞癌组织中，lncRNA HCG11表达下调，而miR-590-3p表达上调；宫颈鳞状细胞癌组织中的lncRNA HCG11低表达和miR-590-3p高表达预示肿瘤组织较大且处于较高临床分期、淋巴结转移可能性较大、患者预后较差。推测lncRNA HCG11与miR-590-3p有可能成为宫颈鳞状细胞癌治疗的靶标分子。