子宫内膜癌组织中miRNA-373的表达变化及其临床意义

谭飞非，徐红， 李美仪， 何中慧

(广西医科大学第一附属医院，南宁530022)

微小核糖核酸即微小RNA(miRNA)，是广泛存在于真核生物体内的、长度18～25 nt的单链非编码内源性小分子RNA，通过与靶基因3′-UTR区完全或不完全互补结合而发挥其调节作用，是人类某些疾病(包括癌症)发病的关键基因和调节因子[1]。miRNA表达谱分析表明，miRNA的异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关，其扮演着促癌或抑癌作用，如miR-21在乳腺癌中扮演抑癌基因[2]，而在结直肠癌中扮演促癌基因作用[3]。多种miRNA在子宫内膜癌中的异常表达可以影响肿瘤的行为与进展，如miR-944在子宫内膜癌中表达上调，促进肿瘤的侵袭[4]，miR-302c在子宫内膜癌中表达下调而促进肿瘤的发生发展[5]。本研究采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测子宫内膜癌组织与癌旁正常组织中的miR-373，观察其在子宫内膜癌组织中的表达变化，分析其表达与子宫内膜癌患者临床病理参数的关系，并进一步探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2016年9月～2017年12月在广西医科大学第一附属医院接受广泛性子宫切除及盆腔淋巴结清扫术治疗的子宫内膜癌患者30例(术前均未接受放化疗)，手术治疗时均留取癌组织，其中20例同时留取癌旁正常组织(癌旁2 cm以外)。留取的组织标本均在离体后立即用液氮浸没降温，置-80 ℃冰箱冻存，所有标本经术后病理检查确诊。

1.2 试剂与仪器 TRIzol试剂(大连Takara公司)，RNase-free water(大连Takara公司)，miRNAs逆转录试剂盒(大连Takara公司)，荧光定量PCR试剂盒(大连Takara公司)，RT-PCR、miRNA-373及U6引物(大连Takara公司)。NanoDrop2000紫外分光光度计，ABI 7500实时荧光定量PCR仪。

1.3 miR-373检测方法 采用qRT-PCR。先用TRIzol试剂按其说明书提取受检组织总RNA。用NanoDrop2000紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度，OD260/OD280为1.8～2.1。逆转录cDNA，RT反应:10 μL反应体系，37 ℃、1 h，85 ℃、5 min。qRT-PCR: 以U6作为内参；U6上游引物序列为5′-CGCTTCGGCAGCACATATAC-3′、下游引物序列为5′-AAATATGGAACGCTTCACGA-3′，miR-373上游引物序列为5′-TGCGCGAAGTGCTTCGATTTGG-3′、下游引物序列为5′-CCAGTGCAGGGTCCGAGGTATT-3′；以cDNA为模板，按试剂盒说明配置反应液，上样于ABI 7500实时荧光定量PCR仪；95 ℃预变性30 s，95 ℃、5 s，60 ℃、34 s，共40个循环。miR-373相对表达量用2-ΔΔCt表示。

2 结果

子宫内膜癌组织及癌旁正常组织中miRNA-373的相对表达量分别为3.045±1.664、1.098±0.419，两者相比，P<0.01。 miR-373在子宫内膜癌组织中的表达与患者的肿瘤临床分期、组织分级、肌层浸润、是否有淋巴结转移等因素相关(P均<0.05)，与年龄及病理类型无关(P均>0.05)，详见表1。

表1 子宫内膜癌组织中miR-373的表达与子宫内膜癌患者临床病理参数的关系

3 讨论

子宫内膜癌是妇科最常见三大恶性肿瘤之一，在我国子宫内膜癌的发病率位居妇科恶性肿瘤第2位，仅次于宫颈癌，近年来子宫内膜癌发病率呈逐年上升趋势[6]。虽然治疗子宫内膜癌的技术与方法在不断发展，但对于晚期和复发的子宫内膜癌患者的治疗效果仍欠佳。因此，进一步探索子宫内膜癌中具有特异性和敏感性的分子标志物是对子宫内膜癌进行早期诊断、改善治疗效果的关键。

miRNA作为一类保守的非编码RNA，在各种疾病的病理生理过程扮演基因管理角色，主要通过转录后水平参与调节众多目标基因的表达[7, 8]。miRNA的表达失常在肿瘤中是一种常见现象，主要表现在表观遗传修饰、基因变异、生物起源改变及转录阻抑这四个主要机制的失调。表达失调的miRNA不仅影响肿瘤的发生进展，且关联着肿瘤对其抗癌药物耐药性的产生[9]。miR-373作为miR-371-372-373家族的一员，主要位于染色体19q13.42上，在不同的肿瘤中，其表达情况不同，如miR-373在食管鳞状细胞癌、宫颈癌中表达均显著上调，促进其癌细胞的增殖和转移，发挥促癌基因作用[10,11]。miR-373在乳腺癌中可通过TXNIP-HIF1α-TWIST信号轴而促进上皮间质细胞的过渡与转移[12]。miR-373在卵巢癌中通过作用于Rab22a抑制卵巢癌的侵袭与转移，在膀胱癌中通过增强钙黏蛋白的表达而显著抑制癌细胞的增殖与发展，发挥抑癌基因作用[13,14]。Hua等[15]研究发现，胰腺癌患者血清中miR-373 低表达与临床预后不良显著相关，且miR-373的表达水平与肿瘤分级、分期、远处转移密切相关。我们[16]的前期研究，通过构建miR-373-3p慢病毒载体成功转染子宫内膜癌HEC-1A细胞，发现miR-373-3p明显抑制HEC-1A细胞的增殖和迁移能力，故miR-373具有促进子宫内膜癌细胞的增殖、迁移的作用。

本研究结果显示，miR-373在子宫内膜癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织，与我们[16]的前期研究结果一致，表明miR-373在子宫内膜癌中发挥癌基因作用。另外本研究发现，子宫内膜癌组织中miR-373的表达随子宫内膜癌恶性程度的增高及临床分期的增加而呈上升趋势，miR-373的表达在有淋巴结转移者明显高于无淋巴及转移者，相较于肌层浸润<1/2者，在肌层浸润≥1/2者中的miR-373的表达量明显增加，提示miR-373可能与子宫内膜癌的浸润与转移有关。

综上所述，子宫内膜癌组织中miR-373呈高表达，其表达量与子宫内膜癌恶性程度有关，可能成为子宫内膜癌恶性程度及转移潜能的重要预测指标，并有可能成为子宫内膜癌的潜在治疗靶点。但miR-373在子宫内膜癌中的具体作用机制、作用信号通路及靶基因还需要更全面、更深入探讨。本实验所取样本例数较少，所取样本时间较短，有关miR-373的表达情况对子宫内膜癌患者的生存及预后的影响不能做出完整阐述。后续研究还需扩大样本量后进行追踪随访。