氢溴酸东莨菪碱的制备

陈朋朋，吴泽宇，许 坤，惠爱玲，张文成

（1. 合肥工业大学食品科学与工程学院，农产品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥 230009；2. 安徽德信佳生物医药有限公司，安徽阜阳 236000)）

0 引言

东莨菪碱（Scopolamine） 是一种莨菪烷型生物碱，具有多种生物活性，如散瞳、解痉、抗胆碱、麻醉、镇痛和镇静等，逐渐受到人们的关注[1]。在临床上，东莨菪碱的药效主要基于其抗毒蕈碱作用。作为毒蕈碱阻滞剂，东莨菪碱竞争毒蕈碱受体，打断副交感神经的支配[2-5]。此外，与莨菪碱、阿托品（莨菪碱的外消旋形式）相比，东莨菪碱具有不良反应少、疗效强的特点。据初步统计，东莨菪碱的市场需求量是莨菪碱和阿托品总量的10倍[6-8]。因此，东莨菪碱的制备已经成为当前的研究热点。

东莨菪碱易消旋、不易保存，所以临床上主要用其氢溴酸盐。研究将洋金花提取物溶解后，通过加酸成盐和冷冻结晶的方法，制得其临床用药氢溴酸东莨菪碱，并采用差示扫描量热仪、自动旋光仪等进行确证。

1 试验方法

洋金花提取物（东莨菪碱含量为83%），自制；氢溴酸东莨菪碱对照品（纯度99%），购于合肥驭成仪器有限公司（代理）；甲醇、无水乙醇、氢溴酸、乙酸铵、三乙胺等，均购于国药化学试剂有限公司。

1260型高效液相色谱仪，美国安捷伦公司产品；JA2003型电子天平，美国希特公司产品；SC2201型超声波处理器，上海小岩工贸发展有限公司产品；Q200型差示扫描量热仪，美国TA公司产品；WZZ-2SS型自动旋光仪，上海精密科学仪器有限公司产品。

液相条件：Eclipse Plus C18型色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温35 ℃；检测波长215 nm；流速1 mL/min；进样量20 μL；流动相：甲醇-0.02 mol/L乙酸钠溶液（加入0.01%三乙胺） （体积比= 40∶60）[9]。标准曲线的绘制：准确称取20 mg氢溴酸东莨菪碱放入5 mL的容量瓶中，用流动相定容。然后将定容后的溶液分别稀释成质量浓度为0.25，0.50，1.00，2.00，4.00 mg/mL的溶液。用0.45 μm的微孔滤膜处理后，分别取20 μL进样测定，以峰面积（Y） 为纵坐标、氢溴酸东莨菪碱的质量浓度（X） 为横坐标，绘制标准曲线。

精确称取125 mg洋金花提取物，加入500 μL无水乙醇，超声溶解；然后在混合溶液中加入40%的氢溴酸150 μL，放置在搅拌器上搅拌10 min，使其成盐；平行3次试验。

氢溴酸-东莨菪碱溶液放置在-20 ℃冰箱中过夜后，使用布氏漏斗抽滤，去除溶液；用2 mL冰的无水乙醇洗涤结晶2次，去除晶体表面残留的杂质；然后将晶体置于真空干燥箱中，于40 ℃条件下干燥12 h，去除晶体表面残留的溶剂和水分；平行3次试验。

称取2 mg干燥后的晶体，放入5 mL的容量瓶，用流动相定容；精密吸取20 μL样品溶液，注入液相色谱仪进行检测；样品检测前，均经0.45 μm 微孔滤膜过滤；根据液相图的峰面积及标准曲线，计算纯度。

根据纯度及干燥后的晶体质量，按照下面公式（1） 计算回收率：

式中：m结晶——干燥后的晶体质量，mg；

p纯度——样品的纯度，%；

m低浓度——洋金花提取物的质量，mg；

1.445 ——氢溴酸东莨菪碱与东莨菪碱的摩尔质量比；

0.83 ——洋金花提取物中东莨菪碱的含量。

利用Q200 DSC仪对晶体进行确证，小心称取mg级样品，精确称定，记录质量；将晶体移入坩埚中，压片；将空白坩埚和装有晶体的坩埚置于Q200 型DSC仪中，气氛为氮气，升温速度10 ℃/min，升温范围0～250 ℃，测定DSC差示扫描量热曲线。

利用WZZ-2SS型自动旋光仪对标准品、得到的晶体进行旋光度测定；称取适量晶体，用去离子水溶解，静置15 min后，将溶液移入10 dm测定管中；在旋光仪中测定旋光度，每个样品重复3次，取平均值后代入公式（2） 计算旋光度。公式（2） 如下：

式中：[α]——比旋度；

α——旋光仪测定的读数；

T——测定时温度，℃；

D——光源钠灯的波长（589 nm）；

L——测定管的长度，dm；

C——100 mL溶液中含有被测物质的质量，g。

2 结果与分析

以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标，得到标准曲线的回归方程Y=12 863X+148.33（R2=0.999 5），线性范围为0.25～4.0 mg/mL。根据晶体样品液相检测结果，计算得到晶体的纯度为99.40%。晶体洗涤干净后，放入干燥箱中充分干燥。根据回收率计算公式，计算回收率为73.24%。

氢溴酸东莨菪碱标准曲线图见图1，氢溴酸东莨菪碱样品的HPLC图见图2。

图1 氢溴酸东莨菪碱标准曲线图

图2 氢溴酸东莨菪碱样品的HPLC图

氢溴酸东莨菪碱热分析数据见表1，氢溴酸东莨菪碱的DSC图见图3。

由表1可以看出，晶体的熔点为198.54±0.40 ℃，熔程为29.77±0.98 ℃，溶化焓为58.54±2.40 J/g。药典上记录其熔点在195～199 ℃，所以制备得到的氢溴酸东莨菪碱符合药典上对其熔点的规定。并且从图3可以看出，只有在熔点附近出现1个吸热峰，在东莨菪碱熔点（59 ℃） 附近未出现吸热峰，说明了无东莨菪碱的存在，表明晶体中无未成盐的东莨菪碱。同时也说明了晶体晶型单一、无杂晶存在。

表1 氢溴酸东莨菪碱热分析数据

图3 氢溴酸东莨菪碱的DSC图

经检测，氢溴酸东莨菪碱晶体的比旋光度为-24.9°±0.45，氢溴酸东莨菪碱标准品的比旋光度为-24.5°±0.59。根据药典记载，氢溴酸东莨菪碱的旋光度为-24°～-27°，说明得到的氢溴酸东莨菪碱符合要求。

3 结论

以东莨菪碱含量为83%的洋金花提取物为原料，利用加酸成盐和冷冻结晶技术，对东莨菪碱进行纯化，制得其临床用药氢溴酸东莨菪碱。制得的晶体经液相色谱检测其纯度为99.40%，满足临床上使用的纯度要求。鉴于东莨菪碱易消旋，转化为氢溴酸盐提高了产品稳定性。差示扫描量热仪和自动旋光仪测量结果表明，制得的氢溴酸东莨菪碱晶体符合药典中关于熔点和旋光度的标准。