血痛定喷雾剂消肿及镇痛作用的研究

钟沁月，呼永河 ，郑德志，肖雯婧，侯 君

血痛定巴布贴是成都军区总医院和解放军452医院院内制剂，临床应用至今已有十几年，主要用于基层部队外训常见软组织损伤的治疗。其由中药三七、独一味、祖师麻组成，疗效确切，未见明显不良反应发生[1]。但血痛定巴布贴的生物利用率低，使用、携带不便。本课题组前期研究表明，血痛定巴布贴抗炎作用明显，镇痛作用较弱[2]。因此，为改善巴布贴剂型缺陷，本研究前期采用了高分子生物材料聚己内酯-聚乙二醇-聚己内酯共聚物（PCEC）制备出同时传输疏水性（独一味、祖师麻）和亲水性药物（三七）的高效透皮缓释纳米粒，可促进血痛定有效成分的吸收，并制成具有较好止血作用的中药外用喷雾剂[3]。为了解纳米载体的血痛定喷雾剂是否具有快速、高效的消肿与镇痛作用，本实验进行了动物实验研究。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

1.1.1 试剂 血痛定喷雾剂冻干粉末（批号：20160701）及φ6 mm打孔器由本实验室制备；云南白药粉购于云南白药集团股份有限公司；扶他林乳胶剂购于北京诺华制药有限公司；硫化钠、冰醋酸、二甲苯（分析纯）购置于西南国药公司。

1.1.2 仪器 恒温水浴热板（55℃，河北冀星实验仪器有限公司），小鼠尾光热痛反应仪（成都泰盟科技有限公司），扭力天平（上海实验试剂有限公司）。

1.2 实验动物 健康ICR小白鼠，SPF级实验动物，体重19～22 g，雄性，购于四川大学实验动物中心（许可证号：川实动管字第71号）。饲养条件：温度 20～22℃，相对湿度 60%～70%，光照 12 h/12 h，明暗交替，自动定时过滤通风换气，换气频度10～15次/h。

1.3 溶液配制 精密称定冻干血痛定喷雾剂粉末0.5 g，定容至 100 ml，配制成 5 mg/ml的储备液，临用前稀释。

精密称取云南白药粉0.3 g，定容至100 ml，配制成3 mg/ml阳性对照药物溶液。

1.4 动物分组 将小鼠随机分为空白组（赋形剂PCEC 3 mg/ml）、阳性对照组（云南白药 3 mg/ml或扶他林8 g/kg）、血痛定喷雾剂高、中、低浓度组（5、3、1 mg/ml），分别用于消肿及镇痛实验，每个实验每组动物8只。

1.5 实验方法

1.5.1 消肿实验 各组小鼠给药前，采用硫化钠滑石粉对背部脱毛，脱毛面积为2 cm×2 cm；涂敷药物前，以温水洗净去毛区皮肤。各组按照成人体表面积法换算成小鼠给药量为0.01 ml/g，血痛定喷雾剂高、中、低浓度组含药量分别为 1.25、0.75、0.25 mg，阳性对照组（云南白药）含药量为0.75 mg。早上9:00涂敷1次，下午15:00涂敷1次，连续给药3 d。末次给药后1 h，各组小鼠均于右耳正反两面均匀涂抹二甲苯0.05 ml。1 h后用直径6 mm打孔器在左右耳相对称部位打孔，取耳片，用扭力天平称重，计算双侧耳片重量之差。肿胀度=右耳质量-左耳质量。

1.5.2 镇痛实验

1.5.2.1 热板法 剔除痛阈反应潜伏期＜10 s和＞30 s的小鼠。给药方案同“1.5.1”项，连续给药3 d。各组小鼠于分别于末次给药后0.5和1 h，置于55℃热板上，观察小鼠的痛觉反应。以小鼠出现舔后足为判断指标，记录小鼠置于热板上至其出现舔足的时间。

1.5.2.2 甩尾法 选择反应潜伏期4～6 h的小鼠。给药方案同“1.5.1”项，各组小鼠分别于末次给药后0.5和1 h，置小鼠尾于光热痛反应测试仪上，观察记录小鼠出现甩尾的时间。

1.5.2.3 扭体法 空白组和血痛定各组每次给药剂量同前，阳性对照组（扶他林）按照体表面积法换算成小鼠给药量8 g/kg，0.2 g/只。各组小鼠腹部去毛，暴露2 cm×2 cm的皮肤为给药区，各组分别于早上9:00和下午15:00各涂药1次。于末次给药后0.5 h，腹腔注射1%冰醋酸0.2 ml，观察记录 15 s内，小鼠出现扭体反应的次数。

1.6 统计学方法应用SPSS19.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 消肿作用 血痛定喷雾剂的消肿作用呈剂量依赖性，且高剂量组的消肿作用与阳性对照组无显著差异（P＞ 0.05，表 1）。

表1 小鼠耳壳二甲苯炎症消肿实验（n=8）

2.2 镇痛作用

2.2.1 热板法 血痛定各浓度组及阳性对照组的痛觉反应潜伏期均延长，其中给药后1 h的作用明显长于给药后0.5 h，并呈剂量依赖性，而血痛定高浓度组的痛觉反应潜伏期长于阳性对照组（P＜0.05，表 2）。

表2 热板法各组痛觉反应潜伏期比较（n=8）

2.2.2 甩尾法 血痛定各浓度组及阳性对照组的痛觉反应潜伏期均延长，给药后1 h镇痛作用长于0.5 h，并呈剂量依赖性（P＜ 0.05，表 3）。

表3 甩尾法各组痛觉反应潜伏期比较（n=8）

2.2.3 扭体法 血痛定各浓度组及阳性对照组的扭体痛次数均减少，血痛定喷雾剂的作用呈剂量依赖性（P＜0.05，表4），其中高浓度组的抑制率与阳性对照组相当。

表4 扭体法各组扭体反应次数比较（n=8）

3 讨论

部队日常训练或执行任务过程中，战士容易出现创伤出血、皮肤擦伤和肌肉、韧带挫伤或撕裂伤、关节和腰部损伤、过劳性损伤等。在后送至医院进行专科治疗前，主要进行各种外伤药膏的贴敷治疗，以达到止痛、消肿的目的。但目前部队配发的外伤药膏要么粘附性差，容易脱落；要么粘附性过强，在用后揭撕时引起皮肤过敏或刺激、拔掉汗毛、甚至造成局部皮肤撕裂导致极度疼痛等。本研究在原组方不变的情况下，运用高分子纳米材料，制备了新型的血痛定喷雾剂，其有效成分为PCEC[3]，增加了中药的生物利用度，较巴布贴剂型而言，提高了中药组分的镇痛作用，且方便携带，适用于皮肤、关节肢体表面等部位给药，同时兼具止血镇痛作用，适合恶劣野战条件下官兵自救。

耳壳二甲苯炎症肿胀实验结果表明，血痛定喷雾剂具有明确的消肿作用，其中高剂量的效果最显著，与阳性对照药物云南白药相当，显示其较好的消肿作用。小鼠热板法、甩尾法实验结果表明，血痛定喷雾剂对热刺激所致疼痛感具有明确的抑制作用，尤其以高剂量的抑制作用最强，甚至超过了云南白药的作用。小鼠扭体法实验结果表明，血痛定喷雾剂能减轻醋酸对试验小鼠内脏所致的疼痛，显示较强的镇痛作用，也是以高剂量的镇痛作用最强，与阳性对照药物扶他林的作用相当。

综上所述，血痛定喷雾剂具有强效的消肿及镇痛作用，具有使用便捷的特点，可作为治疗军队训练伤的常用药和特需药，亦是临床所急需的中药新品种。