艾炭炮制工艺研究

吕佳美，李曦凝，王俊桐，甄翱翾，王昌辉，李 勇*

（1.长春中医药大学药学院，长春 130117；2.长春医学高等专科学校，长春 130031）

艾叶为菊科植物艾（Artemisia argy Levl. Et Vant.）的干燥叶，性温，味苦，具有理气、温经脉等作用。因艾叶有小毒，需经过炮制加工处理可降低或消除毒副作用[1-9]。汉代《华氏中藏经》最早记载于“艾叶，炒”，至明代提出了“存性”的要求，且艾叶在炒炭后具有祛瘀止血，驱寒止痛的功效[10-11]。现代炮制方法以醋制和制炭2种方法，各炮制品质量良莠不齐。本研究以艾炭中总黄铜的含量为评价指标，同时结合古代炮制过程中外观形状特征，不仅量化了炮制关键影响参数，优选出了最佳艾炭炮制工艺，为艾叶炭工业化生产加工提供了科学依据，而且也为炒炭存性的中医药理论提供了强有力的客观依据，为进一步建立国家标准奠定了基础。

1 材料

1.1 药材 艾叶购于吉深大药房，经长春中医药大学中药鉴定教研室张景龙教授鉴定，样品均为菊科植物艾（Artemisia argy Levl. Et Vant.）的干燥叶。

1.2 仪器 FA105型十万分之一电子天平（上海精科实验有限公司）；TP-A500电子天平（福州华至科学有限公司）；KQ-C型玻璃仪器气流烘干器（巩义市予华仪器有限责任公司）；HL-2B型手提式中药粉碎机（杭州华菱设备有限公司）；W210D型恒温水浴锅（上海申顺科技公司）；ST80型红外温度仪为（哈尔滨市侧电器厂）；CYJ型滚筒式炒药机（江阴市鑫达药化机械制造有限公司）；101型鼓风干燥箱（北京科伟永兴仪器有限公司）；UV-1780紫外可见分光光度计（岛津仪器苏州有限公司）。

1.3 试药与试剂 卢丁对照品（购于中国药品生物制品检定所，3:100080-200707）；亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠及其他试剂均为分析纯（购于北京化工厂）。

2 方法与结果

2.1 因素水平设计 设计正交L9（34）因素水平表,考察加热温度、加热时间对艾叶炒炭质量的影响。将炒药机转速定为20 r/min，将炒制温度、炒制时间作为考察因素，因素设计，见表1。

表1 因素水平

2.2 试验方法 照正交设计方案，取吉深大药房净艾叶50 g，轻揉至散，将炒药机定为20 r/min，按照因素设计的温度和时间进行炒炭，取出，放凉，即得。

2.3 考察指标及指标选择依据

2.3.1 质量评价指标的选择 饮片传统的质量评价是在传统中医药发展的过程中慢慢形成，直到现代中药加工的研究，也在一定程度上显示中药饮片的质量。按照传统炮制外观质量的标准，能在一定程度上显示炮制品的质量，因此将其作为正交试验的评价指标之一。根据《中华人民共和国药典》（2015版）对艾炭饮片的描述，确定艾炭外观达到“呈不规则碎片，表面黑褐色”为最佳品，将此最佳品定为100分，炮制后的艾炭请有经验的炒药师傅，按照炒炭后颜色、片形及完整度分为5等：100、80、60、40、20 分。

2.3.2 内在质量评价指标的选择 根据传统的炒炭存性要求，参考相关文献，艾叶中黄酮是其有效成分之一，具有抗菌、抗过敏、消炎等多种生物活性。因此，艾叶及其炮制品种选用总黄酮类成分的含量作为内在的评价指标，将测定黄酮含量为选择依据[12-18]。

2.3.3 对照品溶液的制备 精密称取芦丁（25.03 mg），转移到量瓶中（25 mL），加适量乙醇试剂，放置水浴锅上，微热、溶解、放冷，加乙醇至刻度，摇匀，取20 mL转移到100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀得到芦丁0.2 mg/mL。

2.3.4 供试品溶液的制备 取艾叶及各批次艾叶炮制品，称取0.5 g粉末，精密称定、分别置于圆底烧瓶中（100 mL）。精密加入乙醇（40%）50 mL，再次称重，用水浴进行回流提取，放置1 h，放凉，再次称重，用乙醇（40%）补定减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 测定波长的选择 取芦丁对照品溶液1 mL，转移到5 mL容量瓶，进行显色处理，首先加入5%亚硝酸钠0.2 mL，摇匀后放置6 min，接着加入10%硝酸铝0.2 mL，摇匀后静置6 min，再加入5%氢氧化钠2 mL，加水定容，摇匀。静置15 min后放入紫外分光光度计中，进行光谱扫描模式。结果对照品溶液在511 nm处有最大吸收。

2.4.2 标准曲线的制备 精密称取芦丁标准品溶液1、2、3、4、5、6 mL，分别置于25 mL容量瓶中，加水至6 mL，按2.4.1项下进行显色处理后放入紫外分光光度计中。以相应试剂为空白，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标。结果表明：Y = 12.418 X - 0.012 7，r =0.999，芦丁浓度在0.014 8～0.051 8 mg/mL 范围内与吸收呈良好的线性关系。

2.4.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液1 mL，照上述方法连续测定6次。结果，芦丁对照品溶液吸光度的RSD值为0.04%，表明仪器精密度良好。

2.4.4 稳定性试验 精密吸取艾叶供试品溶液1 mL，分别于0、2、4、6、8、12 h，照上述方法测定，供试品溶液的RSD值为0.06%，表明艾叶提取溶液在12 h内稳定。

2.4.5 重复性试验 取同批艾叶供试品5份，分别采用上述供试品溶液和对照品溶液的制备方法，并依法显色进行紫外测定，测得总黄酮含量的平均质量分数为16.30%，RSD值为0.02%，表明本法重复性良好。2.4.6 回收率试验 取同一批已知含量的艾叶供试品9份，分为3组。将3组分别各精密加入芦丁标准品，相当于样品浓度的80%、100%、120%。按供试品溶液的提取方法提取，另取芦丁标准品溶液测定作对照，并计算芦丁低、中、高3个浓度的加样回收率。结果见表2。

2.5 综合评分标准 在艾炭样品中总黄酮含量的测定发现，艾炭中的黄酮含量较生艾叶下降，其下降率在44%～81%。并联系传统外观性状进行分析，确定艾炭总黄酮下降率在65%者为炮制佳品。因此，本工艺研究将内在指标下降65%者定为满分，总黄酮下降率每增加或减少0.37%减1分。根据正交表综合性评分中外观评分和总黄酮下降率的分各占权重系数0.5，并计算综合得分，结果见表3，表4。

表2 回收率试验结果

表3 正交设计方案及炮制结果

表4 正交试验各指标评分结果

2.6 结果分析 由正交试验直观分析表分析，从极差（R）值可以分析出在该正交试验设定的因素、水平条件中，各因素对综合得分的影响程度依次为A＞B，即A因素最大，B因素影响次之；A因素选择水平2、B因素选择水平2。且结合外在指标正交5中的研究外观和得率，联系分析结果，选择最佳炮制工艺组合为 A2B2。且在方差分析中表明,炒制时间、炒制温度2项因素都是影响的显著性因素，见表5，表6。

表5 艾炭正交试验结果分析（直观分析）

表6 艾炭正交试验结果分析（方差分析）

2.7 工艺验证 为了验证工艺，称取吉深大药房艾叶3份 （每份50 g），按照研究的工艺参数制备艾叶炭饮片，并对其黄酮含量进行测定，结果第1批含量为5.950 4%，第二批含量为5.951 2%，第3批含量为5.948 4%。RSD值为0.02%，表明工艺稳定可行。

3 小结

为了更全面的反映温度和时间对艾叶炭质量的影响，利用外在指标（传统质量评价），内在指标（黄酮含量）双重的综合评分对炮制品进行分析，经过对工艺的研究，确定具体参数。

艾叶炮制炭化和灰化有本质差别，艾叶炭中的总黄酮成分再次证明了炒炭存性，是炭化而不是灰化。现代药理学研究[19-20]亦表明，黄酮具有止血功能，这与“炒炭止血”的传统中医药理论相一致。综上所述，本项研究为建立科学合理的艾炭质量控制标准提供了实验依据，同时，也表明艾炭的化学和药理学等系统研究还有待进一步深化。