高效液相色谱法测定伤口护理产品中次没食子酸铋含量

北京市医疗器械检验所（101111）王利霞 崔永平 黄永富 岳卫华

次没食子酸铋具有收敛、防腐的功效，外用于湿疹等皮肤病。此外，临床上还经常用于治疗胃溃疡，铋制剂在胃溃疡的治疗中有其独特的优势，它可以直接杀灭幽门螺杆菌，克服幽门螺杆菌对抗生素的原发耐药和避免继发耐药，对胃黏膜有保护作用[1]。此外，次没食子酸铋常作为一种有效成分添加在伤口护理软膏、伤口敷料等医疗器械产品中，应用于烧伤伤口表面的处理，内外痔疮的炎症及出血症状的治疗。常见的产品代表有：复方次没食子酸铋栓、伤口护理软膏、伤口敷料等等。这些产品的技术要求或注册产品标准中对次没食子酸铋的含量都有明确的规定，因此建立一种准确快速测定次没食子酸铋含量的方法，对该类医疗器械产品的质量控制十分必要。目前尚未见次没食子酸铋含量测定的相关报道，但应用高效液相色谱法对其原料没食子酸的含量测定有一些报道[2-5]，研究对象多为各类中药材中的没食子酸含量。本研究采用HPLC法测定伤口护理产品类医疗器械中的次没食子酸铋含量，为该类产品的质量控制提供检测依据。次没食子酸铋的合成：用没食子酸和硝酸铋进行反应，生成次没食子酸铋，经沉淀、过滤、洗涤、干燥后得到次没食子酸铋，见附图1。

附图1 次没食子酸铋合成路线

附图2 次没食子酸铋标准品色谱图

1 材料和方法

Agilent 1260高效液相色谱仪，配备紫外检测器；电子天平（梅特勒-托利多公司）；次没食子酸铋对照品，纯度：49.1%（以三氧化二铋计），甲醇（色谱级，Fisher）；磷酸（优级纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：T20101115）；氯仿（分析纯，北京化工厂，批号：20160902），盐酸（优级纯，北京化工厂，批号：20160508），水为milli Q纯化水。昆山市超声仪器有限公司超声波清洗仪，伤口护理产品（由医疗器械生产厂家提供）；伤口敷料（由医疗器械生产厂家提供）。

1.1 仪器分析条件 用Agilent 1260高效液相色谱仪进行检测，色谱柱：SunFireTMC18分析柱，（250mm×4.6mm，5µm）；检测波长：254nm；流动相：甲醇：0.05%（v/v）磷酸=15∶85（v/v）；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样体积：25µL。理论塔板数以次没食子酸铋计应不小于2000，保留时间为5.5min，次没食子酸铋色谱峰与相邻峰的分离度大于1.5。

1.2 对照品溶液的制备 精密称取次没食子酸铋对照品45mg，置于烧杯中，加入10mL 6N的盐酸，超声处理，直至次没食子酸铋完全溶解，转移至100mL容量瓶，用0.06N盐酸定容至刻度，即得450µg/mL次没食子酸铋标准溶液储备液。取储备液适量用0.06N盐酸逐级稀释，得到浓度为2.25µg/mL、4.5µg/mL、18µg/mL、27µg/mL和45µg/mL一系列标准溶液。

1.3 供试品溶液的制备 精密称取样品（1.0g±0.1）g，置于烧杯中，加20mL氯仿，振摇，直至样品完全溶解，转移至100mL分液漏斗中，然后加入10mL 6N盐酸，振摇2min，静置10min后进行分液，继续用0.06N盐酸反复萃取3次，合并上层滤液至100mL容量瓶，用0.06N盐酸定容至刻度。即得样品储备液。取5mL样品储备液置于50mL容量瓶，用0.06N盐酸稀释至刻度并混匀，即得供试品溶液。

2 方法学考察

2.1 系统适用性 按“1.1”项下的色谱条件，理论塔板数按次没食子酸铋峰计算约为15819，不低于2000。拖尾因子1.01，表明峰对称性良好。目标峰前后均无干扰峰。色谱图见附图2。

2.2 线性范围和检出限 取1.2项下配制的次没食子酸铋标准溶液，按照1.1中色谱条件进行测定，得到各浓度的峰面积值，见附表1。以峰面积值（Y）为纵坐标，次没食子酸铋浓度（X）为横坐标，绘制次没食子酸铋标准曲线并得到线性回归方程为y=18.56x-15.09；R=0.9994，见附图3。该结果表明在2.25～46.95µg/mL范围内线性关系良好。当稀释对照品溶液浓度至0.09µg/mL时，其信噪比（S/N）等于3.0，故检出限约为0.09µg/mL（S/N=3.0）。

附表1 次没食子酸铋标准溶液浓度对应峰面积值

2.3 精密度试验 取浓度为45µg/mL标准溶液，按“1.1”项下的色谱条件连续进样7次，记录色谱图，得到其峰面积，计算变异系数为0.51%。符合中国药典2015年版规定的高效液相色谱外标法精密度要求（RSD不大于2%）[6]。表明方法精密度良好。

2.4 重复性 配制同一浓度的对照品溶液5份，按“1.1”项下的色谱条件进样，记录色谱峰面积，RSD为0.64%（n=5）。

2.5 加样回收率实验 取已知浓度的样品溶液9份，分别加入0.45µg/mL、4.5µg/mL、27µg/mL三种浓度的标准溶液，每个浓度平行测试3份，记录色谱峰面积，低、中、高浓度的平均回收率均在93.3%～104.4%，总平均回收率为98.2%，相对标准偏差为3.3%（n=9）。表明回收率良好。结果见附表2。

2.6 稳定性试验 取“1.2”项下的同一标准溶液，室温放置0h、2h、4h、8h和24h，48h分别按“1.1”项下的色谱条件连续进样分析，记录峰面积，计算次没食子酸铋峰面积的RSD为0.9%。该结果表明次没食子酸铋在0.1N盐酸水溶液中室温放置至少48h内稳定。

2.7 样品测定结果 用外标法测定了三种伤口护理产品中的次没食子酸铋含量，结果均满足产品技术要求的规定。

3 讨论

次没食子酸铋在水、乙醇、乙醚或氯仿中几乎不溶，仅溶于热的矿酸。本次检测用于伤口护理的样品中除了含有次没食子酸铋外，其余大部分是凡士林，根据这两种物质的溶解特性，结合次没食子酸铋对照品的溶解性能，选择了用盐酸水溶液跟氯仿萃取的形式，分离样品中的次没食子酸铋，本文对加入盐酸溶液的量、振摇时间、静置时间都经过优化，最终确定加入20mL氯仿分散样品，先用6N盐酸溶液10mL进行萃取，然后每次加入0.06N盐酸溶液10mL，萃取三次，以充分提取样品中的次没食子酸铋。

本研究的结果证明，高效液相色谱法（HPLC）在2.25µg/mL～45µg/mL较宽的次没食子酸铋浓度范围保持良好的线性关系。不同类医疗器械产品中，次没食子酸铋含量相差较大，HPLC标准曲线较宽的线性范围则能很好的适应产品特点，有利于确保检测的可靠性。同时精密度和回收率试验也表明此方法准确度高，精密度好，可以满足日常检测伤口护理产品中次没食子酸铋含量的要求，且操作简单，分析速度快，易于推广。