血清肿瘤相关物质（TAM）在急性白血病中的应用研究

钟巧玉，廖长风，李冬，刘礼平，魏美甜，张晶红，徐燕，高鳌

（1.赣州市立医院血液科，江西 赣州 341000；2.赣南医学院第一附属医院血液科，江西 赣州 341000）

急性白血病（acute leukemia，AL）临床表现为不同程度的贫血、出血、发热及肝脾、淋巴结肿大、胸骨压痛等征象，可危及生命。疾病预后的评价手段有年龄、白细胞总数、白血病细胞免疫表型的监测、染色体分析、PCR检测基因突变及特异性的标志基因等。但由于60%以上AML患者无特异性分子生物学标志，治疗后无微小残留病（MRD）的监测指标，以致无法准确判断预后。因此，寻找判断预后的敏感性指标具有重要意义。有研究表明血液中的肿瘤相关物质（TAM）水平伴随着肿瘤的形成发展呈现正相关，在早期恶性肿瘤的形成、生长时，在单核／巨噬细胞、内皮细胞、肿瘤细胞自身分泌的生长因子刺激下毛细血管大量增生，导致血液中肿瘤相关物质含量升高，其组成成分如唾液酸等糖胺类物质，羟脯氨酸类物质出现代谢紊乱，因此，肿瘤相关物质的检测也成为对早期恶性肿瘤检测的有效手段[1]。目前TAM在各种脏器恶性肿瘤如鼻咽癌、肺癌、原发性肝癌、食管癌、大肠癌、乳腺癌、口咽癌、胃癌、卵巢癌、肾上腺皮质癌、骨肿瘤均有检测研究报道[2]。在肿瘤复发或转移时，血清唾液酸水平上升可出现在临床诊断之前的数周，因此，对于恶性肿瘤的早期发现、及时治疗有着重要的意义。急性白血病是血液系统最常见的恶性肿瘤。那么，在急性白血病中TAM是否也同样有相似的意义呢？本研究旨检测急性白血病中TAM的表达情况，以探讨TAM的表达与急性白血病的的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2013年6月～2018年3月在赣州市立医院和赣南医学院第一附属医院血液科急性白血病患者320例，分为急性淋巴细胞白血病组和急性髓系细胞白血病组。其中急性淋巴细胞白血病160例，急性髓系细胞白血病160例，每组男性及女性各80例，年龄20～70岁，平均年龄（42.9±12.6）岁。两组急性白血病患者在初诊时及化疗后达缓解时进行TAM检测，分为初诊组和缓解组。缓解组指骨髓象原始细胞≤5%，伴血细胞完全或不完全恢复。选取160名健康体检人员进行对照比较，设为对照组，男80名，女80名，年龄段同急性白血病组，平均年龄（38.7±9.1）岁。3组研究资料在性别、年龄，一般等临床资料上比较差异无统计学意义，两者之间有可比性。

1.2 方法 分别观察两组急性白血病患者初诊时、化疗达缓解后与对照组各项指标，包括各组白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数以及各组Wilms肿瘤基因（Wilms'tumor gene,WT1）阳性表达率、骨髓原始细胞比例与肿瘤相关物质（TAM）水平，探讨各项指标之间的相关性。

TAM检测主要仪器有：①GF-EⅡ型生化分析仪（山东高密彩虹分析仪器有限公司，可设定波长450 nm）；②Thermo微量移液器（Finnpipette 20-200 μl）；③HH-W420数显三用恒温水箱（金坛市医疗仪器厂，100℃）；④湘仪TDZ5-WS离心机（湖南湘仪离心机公司）；⑤电子计时器（精确到秒）；TAM检测主要试剂有：①肿瘤相关物质（TAM）试剂盒（青岛博新生物技术有限公司）；②标准品100 U/ml（青岛博新生物技术有限公司）；③质控品（青岛博新生物技术有限公司)。TAM结果判定：将TAM检测值≥95 U/ml判定为阳性，＜95 U/ml判定为阴性。

WT1基因定量检测主要仪器是ABI7500荧光PCR检测仪，主要试剂是WT1基因定量监测试剂盒（上海源奇生物医药科技有限公司）。WT1基因定量检测结果判定：WT1/ABL1＞0.6%判定为阳性，WT1/ABL1≤0.6%判定为阴性。

1.3 统计学方法 所有数据均选择SPSS 21.0统计学软件进行统计处理计量资料均用±s表示。阳性率用百分率（%）表示，不同组间阳性率用χ2检验，P＜0.05，为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验各组血常规测定值比较 320例急性白血病患者初诊时，白细胞计数范围（8.69～308.98）×109/L，白细胞计数平均值（46.23±2.11)×109/L，红细胞计数范围（1.2～4.5）×1012/L，红细胞计数平均值(2.63±0.21)×1012/L，血红蛋白浓度范围42～113 g/L，血红蛋白浓度平均值（75.52±5.87）g/L，血小板计数范围（4～370）×109/L，血小板计数平均值（71.74±3.09）×109/L，化疗后各组值与初诊时比较均有统计学意义（P＜0.05）。与正常体检组比较，急性白血病患者化疗后各血液检测值均接近于正常体检者值，见表1。

表1 实验各组血常规测定值比较Table 1 Comparison of blood routine measurement values in each group

2.2 急性髓系白血病组肿瘤相关物质检测结果 初诊时WT1/ABL1范围0%～107.4%，WT1/ABL1平均值为（19.74±18.1）%，WT1阳性表达率为92.5%，骨髓原始细胞范围33%～97%，骨髓原始细胞平均值（66.97±35.25）%，TAM范围（67.96～162.3）U/ml，TAM平均值（109.17±40.32）U/ml，TAM阳性率66.25%。AML缓解组WT1/ABL1范围0%～25.02%，WT1/ABL1平均值为（1.24±1.11）%，WT1阳性表达率为31.25%，骨髓原始细胞范围0%～4.5%，骨髓原始细胞平均值（1.69±1.52）%，TAM范围（45.07～171.23）U/ml，TAM平均值（77.42±23.15）U/ml，TAM阳性率5.625%。AML缓解组较初诊组比较，WT1阳性率和TAM阳性率差异有统计学意义（P＜0.05），两者有一致性，详细结果见表2和表3。

表2 急性髓细胞白血病（AML）组WT1阳性率结果Table 2 Results of WT1 positive rate inAML group

表3 急性髓细胞白血病(AML)组TAM阳性率结果Table 3 Results of TAM positive rate inAML group

2.3 急性淋巴细胞白血病组肿瘤相关物质检测结果 初诊时WT1/ABL1范围0.00%～76.17%，WT1/ABL1平均值为（7.60±6.54）%，WT1阳性表达率为52.5%，骨髓原始细胞范围23%～99%，骨髓原始细胞平均值（82.54±15.32）%，TAM范围（60.25±177.62）U/ml，TAM平均值（102.23±32.65）U/ml，TAM阳性率46.25%。ALL缓解组WT1/ABL1范围0%～25.02%，WT1/ABL1平均值为（1.24±1.12）%，WT1阳性表达率为31.25%，骨髓原始细胞范围0%～4.5%，骨髓原始细胞平均值（1.69±1.15）%，TAM范围（45.07～171.23）U/ml，TAM平均值（77.42±25.45）U/ml，TAM阳性率5.625%。ALL缓解组较初诊前比较，WT1阳性率和TAM阳性率有统计学意义（P＜0.05），两者有一致性，详细结果见表4和表5。

表4 急性淋巴细胞白血病（ALL）组WT1阳性率结果Table 4 Results of positive rate of WT1 in acute lymphocytic leukemia(ALL)group

表5 急性淋巴细胞白血病(ALL)组TAM阳性率结果Table 5 Results of TAM positive rate in acute lymphocytic leukemia(ALL)group

3 讨论

WT1是目前研究者广泛研究的抑癌基因[3]，在正常人群中WT1极低表达或不表达[4]。大量的研究表明，WT1在功能上能够控制血细胞增殖以及分化。WT1蛋白表达值同样反映出白血病的发生、发展以及治疗的效果[5-6]。在初诊过程中，WT1的表达往往处于较高的表达水平，从研究资料中显示，在急性髓系白血病（AML）以及急性淋巴细胞白血病（ALL）中，WT1阳性表达率高达90%以及50%以上，经过化疗后，普遍下降30%以上。本研究中，AML缓解组WT1阳性率31.25%较初诊组WT1阳性率92.5%明显下降，见表2，与多数文献报道一致[7]。本研究中，ALL缓解组WT1阳性率21.875%较初诊组WT1阳性率52.5%亦有明显下降，见表4。因此，WT1表达水平可以作为白血病尤其是AML的微小残留病灶（MRD）监测的指标之一，特别是在没有特异性分子学标志的AML患者中。动态监测WT1表达水平对于评估白血病预后有重要的临床价值。

TAM在急性白血病中的应用目前处于较落后状态，如何联合各血液指标在白血病前期判断白血病早期发生、发展，一直受研究者的关注[8]。从研究资料显示，TAM在急性白血病患者初诊时、化疗后检测中有重要意义。TAM阳性率在两类急性白血病的表达显示较高水平，在化疗后，TAM表达结果阳性表达率均明显下降[9]。3组实验研究中，AML缓解组TAM阳性率5.625%较初诊组TAM阳性率66.25%明显下降，见表3；ALL缓解组TAM阳性率8.75%较初诊组TAM阳性率46.25%明显下降，见表5。

从上述结果中，我们发现，在AML和ALL中，TAM表达水平、阳性率在初诊组、缓解组和WT1表达水平、阳性率具有相当的一致性。因此，白血病早期白细胞异常变化时，血红蛋白出现异常偏低时，血小板异常减少时[10]，可通过血清肿瘤相关物质（TAM）检测进一步初筛，同时，进一步检测WT1表达和其他骨髓相关检查进一步明确诊断[11]。同时在化疗后，继续监测血细胞分析、TAM、WT1和其他相关指标[12]。TAM可以与WT1检测、血细胞分析、骨髓原始细胞比例等一起作为监测急性白血病疗效判断、监测病情复发的指标。因目前TAM检测时间以及纳入此次讨论的患者数量、随访时间尚不足，期待继续加大观察样本量以及延长患者随访时间以继续观察、总结[13-14]。