康炎净颗粒对大鼠长期毒性试验研究

孟 莉，向绍杰，乔 敏，宋达夫，张 宏，贾天柱

0 引言

慢性盆腔炎是指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜的慢性炎症。在患者体质较差的情况下，急性盆腔炎的病程可迁延及反复发作，造成慢性盆腔炎；但是亦可无急性盆腔炎症病史过程，如沙眼衣原体感染所致输卵管炎。慢性盆腔炎病情较顽固，可导致月经紊乱、白带增多、腰腹疼痛及不孕等，严重影响患者的正常生活。近年来，中药在治疗此病上取得了较好的进展。康炎净颗粒具有清利湿热、化瘀散结的功效，临床用于治疗慢性盆腔炎，取得较好的疗效。前期实验研究表明[1]，康炎净颗粒具有抑菌、抗炎、活血化瘀、镇痛、免疫调节等药理作用，本实验在前期研究基础上，对大鼠进行了长期毒性实验研究，为其临床安全应用提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验药物 康炎净颗粒浸膏，由沈阳药科大学提供，批号：0701010，每毫升浸膏含4.272 g生药。用蒸馏水配成所需浓度后供试验用。

1.2 动物 Wistar大鼠，160只，雌性，体重70～90 g，由吉林大学基础医学院试验动物中心提供，合格证号：SCXK(吉)2003-0001。

1.3 试剂 血细胞分析仪用稀释液(批号：071027)、血细胞分析仪用溶血剂(批号：20070919，上海东湖仪器试剂科技有限责任公司)。尿素氮(BUN)试剂盒(批号：20070626)、碱性磷酸酶试剂盒(批号：20070928)、总胆固醇试剂盒(批号：20070817)、血糖试剂盒(批号：20070813)、血清总胆红素测定通用试剂盒(批号：20070716)、肌酸磷酸激酶试剂盒(批号：20071214)、白蛋白试剂盒(批号：20070518)、总蛋白试剂盒(批号：20070518，桂林优利特医疗电子有限公司)。肌酐液体试剂(批号：H097，北京豪迈生化有限公司)。钾试剂盒(批号：70417C211)、钠试剂盒(批号：70514B211，北京利德曼公司)。凝血四项试剂盒(批号：20070927，北京世帝公司)。

1.4 仪器 日本光电MEK-6318K血细胞计数仪，意大利Eos Bravo Plus全自动生化分析仪，北京世帝四通道血凝仪。

1.5 方法

1.5.1 分组与给药[2-4]取雌性Wistar大鼠160只，体重70～90 g，按体重随机分成4组，空白对照组(对照组)、康炎净颗粒低剂量组(低剂量组，9.69 g/kg)、康炎净颗粒中剂量组(中剂量组，28.77 g/kg)和康炎净颗粒高剂量组(高剂量组，85.44 g/kg)，每组40只。大鼠每日按20 ml/kg的容积灌胃给药，空白对照组给予等容积蒸馏水。每周称1次体重和摄食量，并根据体重变化调整给药量，试验期间每周给药6 d，连续6个月。

1.5.2 指标检测[5-6]试验期间每日观察受试大鼠的行为体征、外观形态及药物可能产生的不良反应等。试验进行到3个月末时，每组取14只受试大鼠禁食不禁水18 h，麻醉取血，检测血液学及血液生化学指标。取血后系统尸解，取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、子宫、卵巢、脑等主要脏器，称湿重，计算脏器指数，并对上述器官及胃、肠、淋巴结、胰腺、乳腺、颌下腺、坐骨神经、骨髓、脊髓、膀胱、气管、食管、主动脉等进行组织学检查。其余大鼠继续给药观察3个月，6个月末时，每组取14只受试大鼠做上述同样项目检查。余下每组12只受试大鼠，停药恢复性观察4周，进行上述同样项目检查。

2 结果

2.1 大鼠一般状况 连续给药6个月，除高剂量组于给药第12周和第22周各有1只大鼠死亡，15周时有1只大鼠濒临死亡提前处死外，其余各组大鼠被毛光泽、反应机敏，口周、鼻及尾部黏膜无破溃，活动正常，摄食、饮水、大小便均未见异常，亦未发现因药物中毒引起的受试动物死亡或其他毒副反应发生。

2.2 大鼠体重、摄食量测定结果 给药期间，高剂量组大鼠从给药第1周开始，体重、摄食量明显低于对照组(P<0.05)，其余各给药组大鼠体重、摄食量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。恢复期，高剂量组体重明显低于对照组，其余各给药组大鼠体重、摄食量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见图1、图2。

图1 康炎净颗粒对大鼠体重的影响

2.3 大鼠血液学测定结果 给药3个月后，高剂量组大鼠白细胞计数、中性粒细胞比率、平均血细胞容积、网织红细胞百分率明显高于对照组(P<0.05)，红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积明显低于对照组(P<0.05)。

图2 康炎净颗粒对大鼠摄食量的影响

给药6个月后，高剂量组大鼠红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积低于对照组(P<0.05)，平均血细胞容积、平均血红蛋白含量和网织红细胞百分率高于对照组(P<0.05)。停药4周后，高剂量组红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积低于对照组(P<0.05)，网织红细胞百分率高于对照组(P<0.05)。见表1。

2.4 大鼠血液生化学测定结果 给药3个月后，高剂量组大鼠血清尿素氮、血清钾高于对照组(P<

0.05)，肌酐低于对照组(P<0.05)。给药6个月后，高剂量组大鼠血清肌酸激酶低于对照组(P<0.05)。停药4周后，各剂量组血液生化学指标与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.5 大鼠脏器指数测定结果 给药3个月后，高剂量组大鼠肝、脾、肾、肾上腺脏器指数高于对照组(P<0.05)。给药6个月后，高剂量组大鼠肝、脾、肾脏器指数高于对照组(P<0.05)。停药4周，高剂量组肝、脾、肾脏器指数高于对照组(P<0.05)。见表3。

2.6 大鼠主要组织形态学改变 实验中期、末期、恢复期大鼠病理组织形态学检查结果表明，对照组动物各脏器组织均无异常组织学改变，高剂量组动物各脏器组织均无药物所致异常组织学改变，提示康炎净颗粒对大鼠主要脏器无明显损害和毒性反应。

表1 康炎净颗粒对大鼠血液学的影响

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

表2 康炎净颗粒对血液生化学的影响

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

3 结论

长期毒性试验是观察评价动物反复给予受试物后，机体产生毒性反应的特征及其毒性损害的严重程度，以及主要毒性靶器官及其损害的可逆性，其目的是提供受试物的无毒性反应剂量和主要临床检测指标，为制定人用安全剂量提供参考资料[1]。本文对康炎净颗粒进行了长期毒性研究，结果表明，试验中期时，高剂量组大鼠红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积明显低于对照组，平均血细胞容积、网织红细胞百分率明显高于对照组；尿素氮、血清钾明显高于对照组，肝、脾、肾、肾上腺脏器指数明显高于对照组。试验结束时，高剂量组大鼠红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积明显低于对照组，平均血细胞容积、平均血红蛋白含量和网织红细胞百分率明显高于对照组；肝、脾、肾脏器指数明显高于对照组。停药4周后，高剂量组血液学指标中红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积明显低于对照组，网织红细胞百分率明显高于对照组，肝、脾、肾脏器指数明显高于对照组。推测康炎净颗粒高剂量可能对红系细胞有损害作用，停药4周不足以恢复其对红细胞的损伤。在给药期间及恢复期，康炎净颗粒低、中剂量组大鼠体重、摄食量、血液学指标、血液生化学指标及脏器指数与对照组比较，差异均无统计学意义。提示康炎净颗粒大鼠灌胃给药安全剂量为28.77 g/kg以下，约为临床成人拟用量的22.27倍(成人按60 kg体重计)。

表3 康炎净颗粒对主要脏器指数的影响

注：与对照组比较，*P<0.05