华支睾吸虫感染患者的胆汁成分及各成分相关性分析

罗小兵,夏厚才,蔡洪英,马瑞红,乔 铁

(1.广东省广州市南沙区第六人民医院检验科 511470；2.广东省广州市南沙区第六人民

医院病理科 511470；3.广东省广州市中德内镜研究所 511430)

华支睾吸虫病俗称肝吸虫病，是由华支睾吸虫寄生在人体肝内胆管所引起的以肝胆病变为主的一种食源性寄生虫病。据报道，全球约有3 500万人感染此病，中国感染人数约为1 249万人[1-3]。目前，华支睾吸虫感染与胆结石的关系已有报道证实，但相应的致病机制仍不清楚[4-6]。多数研究认为，各种原因引起的胆汁成分改变是结石发生、发展的可能致病因素。当前，有关华支睾吸虫感染相关胆囊结石的胆汁成分研究报道较少，本研究初探了华支睾吸虫感染的胆囊结石患者的多种胆汁成分及其相互关系，以期为相关研究提供借鉴和参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 连续选取2016年4-12月广州市南沙区第六人民医院135例胆囊结石患者，所有患者均为本地(华支睾吸虫流行区)户籍居民，并在本院普外科成功实施硬镜取石保胆手术。其中男64例，女71例，年龄18～80岁，中位年龄46.30岁。

1.2仪器与试剂 微量清蛋白(MALB)、β2微球蛋白(β2-MG)、总胆红素(TBIL)、胆固醇(CHO)和总钙(Ca)测定用商品试剂盒购自北京中生生物技术公司，免疫球蛋白(IgA、IgG和IgM)和补体(C3和C4)测定试剂购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，碳酸氢根(HCO3-)商品试剂盒购自四川迈克生物技术公司，总胆汁酸(TBA)试剂盒购自日本积水医疗株式会社。上述胆汁成分测定仪器为日本东芝公司TBA-120FR全自动生化分析仪；pH测定仪为美国Thermo Fisher Scientific公司产品。

1.3方法

1.3.1标本获取 患者的胆囊胆汁于术中以无菌方式获得：取胆汁5～10 mL，置于肝素抗凝管内送检。所获标本于1 h内送检，不能及时送检的置于4 ℃保存不超过4 h。所有标本的获取均征得患者本人及其家属同意，并经医院伦理委员会审核通过。

1.3.2检测方法 取送检胆囊胆汁5 mL于无菌刻度离心管内，380×g离心10 min，吸取上层胆汁用于化学成分测定，留取离心沉淀物约300 μL检查华支睾吸虫卵。胆汁化学成分测定按照参考文献[7]的方法，测定MALB、β2-MG、IgA、IgG、IgM、C3、C4、pH值、TBIL、TBA、CHO、Ca2+和HCO3-共13项指标。胆汁及结石中的华支睾吸虫卵检测采用显微镜检法[8]。临床上称为“白胆汁”(即外观无颜色、总胆红素测不出的胆汁)排除于本研究。

1.4统计学处理 采用SPSS16.0统计学软件进行分析。计量资料先用描述性分析检验两组数据资料是否正态分布和方差齐性，本研究数据资料为非正态分布且方差不齐，故用中位数(M)和四分位数间距(P75，P25)表示，组间比较使用两独立样本的非参数检验；胆汁各成分间的相关分析采用Kendall′s tau-b相关系数表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1华支睾吸虫感染阳性和阴性患者的胆汁成分对比 根据胆汁离心沉淀镜检结果，将135例胆囊结石患者分为感染阳性和感染阴性两组，阳性组68例，阴性组67例，然后比较两组患者的胆汁各成分水平。与华支睾吸虫感染阴性组相比，阳性组胆汁中MALB(429.0 mg/Lvs.198.0 mg/L)、pH(7.64vs.7.47)和HCO3-(20.8 mmol/Lvs.17.3 mmol/L)的水平较高，而CHO水平较低(3.45 mmol/Lvs.5.40 mmol/L)，差异均有统计学意义(P<0.05)；其他成分比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 华支睾吸虫感染阳性与阴性患者之间的胆汁成分对比[M(P75，P25)]

注：与阴性组相比，*P<0.05

2.2阳性组胆汁中各成分的相关关系 阳性组胆汁中，MALB与TBIL和Ca2+呈正相关(r=0.174、0.263，P<0.05)；pH与HCO3-呈正相关(r=0.522，P<0.05)，但与IgA、TBIL、TBA、CHO和Ca2+呈负相关(r=-0.315、-0.250、-0.294、-0.214和-0.168，P<0.05)；此外，CHO与HCO3-呈负相关(r=-0.232，P<0.05)，与TBIL、TBA和Ca2+呈正相关(r=0.497、0.430和0.218，P<0.05)；其他各成分间无相关性(P>0.05)，见表2。

表2 华支睾吸虫感染者胆汁各成分间的相关系数(n=68)

注：相关系数比较，*P<0.05

3 讨 论

人体感染华支睾吸虫后，可引起一系列的肝胆系统损伤，引起胆囊炎、胆结石甚至胆管癌发生[9-11]。其中，华支睾吸虫感染引起胆囊结石已有报道证实，但其具体机制仍不清楚[4-6]。大多数研究认为人体内胆结石的产生和结石类型与胆汁的成分改变密不可分，但是在华支睾吸虫病流行区，胆囊结石患者的人群分布和结石类型与其他地区明显不同[12-14]。因此本文作者推测，与普通胆结石患者相比，华支睾吸虫感染的胆结石患者体内的胆汁成分可能也有不同。基于此，作者测定对比了华支睾吸虫感染胆结石患者与非感染患者的13种胆汁成分，并分析了感染患者各种成分之间的相关性，得到了一些有意义的结果和发现。

本研究发现，与普通胆囊结石患者相比，华支睾吸虫感染患者的胆汁中pH和HCO3-的水平较高(二者呈正相关，r=0.522)，而CHO水平较低(P<0.05)。从结果可以看出，由于感染患者胆汁成分的不同，比如较高的HCO3-，可能会导致胆囊内产生较多的CO2，过多的CO2在一定条件下与Ca2+结合产生碳酸钙结晶或沉淀，进而逐步形成以碳酸钙为主要成分的结石；同时，感染患者胆汁中的胆固醇水平较低，因此由于胆固醇过饱和而导致胆固醇结石发生的可能性变小。上述两种胆汁成分改变情况同时存在，最终引起华支睾吸虫感染患者的胆结石类型与普通患者明显不同：即感染者的胆结石类型以碳酸钙类结石为主，胆固醇类结石最少，而普通患者绝大多数为胆固醇结石。本研究还发现，感染患者胆汁中的MALB水平高于非感染患者，推测可能与华支睾吸虫感染所致肝内胆管局部机械损伤及炎症引起的胆管通透性增加有关，但由于研究的局限，还需要进一步研究证实。

为了进一步了解华支睾吸虫感染与胆汁成分改变的关系，笔者还分析了胆汁中各种成分间的相关性。结果显示，阳性组胆汁中的MALB与TBIL和Ca2+水平，pH与HCO3-之间呈正相关(r=0.522，P<0.05)，提示华支睾吸虫感染引起肝内胆管通透性及胆管内外离子交换改变，进而导致胆汁的整体化学性质和相应功能改变的可能性。同时，由于HCO3-和(或)pH 与TBIL、TBA、CHO和Ca2+之间呈负相关(P<0.05)，因此在胆汁中高HCO3-(与之对应较高的pH)和高MALB水平共同作用下，阳性组的胆汁中CHO水平相对较低、CO2相对过多、但TBIL、TBA和Ca2+水平改变不显著，进而造成胆固醇结石的可能性降低，碳酸钙类和胆红素类结石更易形成的结局[15]。此外，感染者胆汁中pH与IgA、IgG与补体C3之间呈负相关，提示华支睾吸虫感染者尤其是胆汁高pH者可能发生分泌型抗体IgA减少及胆道的免疫防御改变，这可能是华支睾吸虫持续感染或抵抗机体胆管系统局部免疫功能的机制之一。需要注意的是，由于本研究的样本只限于胆囊结石患者，是否全部华支睾吸虫感染人群都存在上述胆汁成分的改变，还需要更多的研究来证实。

综上所述，华支睾吸虫感染的胆结石患者胆汁成分发生改变，主要表现为HCO3-及其相关的pH、MALB增高，以及相关的胆固醇减低及潜在的胆道局部免疫功能改变，这种改变的长期存在，可能最终导致胆囊结石的发生及结石主要成分的不同。胆汁成分的研究，有助于从另一个方面了解华支睾吸虫感染所致胆道系统损伤的机制、发展和结局，为临床治疗和相关研究提供重要参考。