周期疗法对乳腺增生模型大鼠性激素的影响

张小花，申剑，武权生*，苏珊珊

(1.甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730000；2.山东省淄博市桓台县中医院，山东 淄博 256400)

乳腺增生病(Hyperplasin of Mammary Gland，HMG)是指乳腺导管、乳腺小叶、腺泡上皮、纤维组织的单项或多项良性增生。以周期性加重的乳房胀痛和多发性乳房肿块为主要临床特点。国内报道其发病率在10%左右，且多发于30～50岁妇女，男子亦有发生。本病原因迄今尚未明确，主要认为与人体的内分泌功能紊乱，特别是与妇女的卵巢功能失调有关。

武权生教授是甘肃省名中医，博士研究生导师，在长期的医疗实践中积累了丰富的治疗乳腺增生病经验，认为乳腺增生病主要为肝肾失养、肝郁气滞所致，症状伴随月经周期性发作，治疗时应遵循月经周期中气血阴阳变化的不同而遣药组方，临床常以疏肝散结、补肾柔肝周期疗法治疗[1]，疗效颇佳。为了探讨武权生教授治疗乳腺增生病经验方的作用机制，特进行了本次实验，现报道如下。

1 实验材料

1.1 实验动物

甘肃中医药大学动物实验中心SPF级实验室选购SPF级健康雌性SD大鼠90只，3～4月龄、体质量(200±20)g，批号SYXK(甘)2011-0001-62001000000069。

1.2 主要试剂、药品

苯甲酸雌二醇注射液(杭州动物药品厂，批号140429)；生理盐水(辰欣药业股份有限公司，批号1206191101)；黄体酮注射液(浙江仙琚制药股份有限公司，批号130702)；三苯氧胺(扬子江药业集团有限公司，批号14042911)；逍遥丸(兰州佛慈制药股份有限公司，批号14A28)。

中药(I号方：柴胡、赤芍、枳实、川楝子、夏枯草、白蒺藜、全瓜蒌、鳖甲、王不留行、当归、生地黄、海藻、昆布。II号方：柴胡、醋香附、元胡、王不留行、川楝子、夏枯草、当归、杭白芍、海藻、昆布、何首乌、菟丝子、肉苁蓉、巴戟天、知母、黄柏)均购自甘肃中医药大学附属医院药房。

P(批号20130610)、E2(批号20130611)及PRL ELISA分析药盒(批号20130530)(北京市福瑞生物工程公司)。

2 实验方法

从90只大鼠中随机抽取20只，为空白组，右下肢肌肉注射生理盐水0.2 ml/(kg·d)，共30天,其余70只大鼠进行造模[2]。具体方法:大鼠右下肢肌注苯甲酸雌二醇注射液0.5 mg/(kg·d),25天，再肌注黄体酮注射液4.5 mg/(kg·d),5天。实验第31天随机从造模组和空白组分别抽取10只大鼠，脱臼处死大鼠后，剜下其第3对的左侧乳房，观察组织形态学变化，判断造模是否成功。待造模成功后将其余60只大鼠随机分为6组，每组10只，分别为模型组、逍遥丸组、三苯氧胺组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。空白组和模型组给予生理盐水0.2 ml/(kg·d)灌胃，其余5组分别灌服不同药物，药物剂量根据人与动物每公斤体质量剂量换算系数表换算。逍遥丸组灌服逍遥丸混悬液0.8 g/(kg·d)；三苯氧胺组灌服三苯氧胺水溶剂3.6 mg/(kg·d)；中药组先灌服I号方10天，低、中、高剂量组分别为11.1 g/(kg·d)、22.2 g/(kg·d)、44.4 g/(kg·d)，后灌服Ⅱ号方20天，低、中、高剂量组分别为9.6 g/(kg·d)、19.2 g/(kg·d)、38.4 g/(kg·d)。

于造模后31天、灌服药物30天后，测量大鼠第3对乳房左侧乳头的直径。末次灌胃24 h后，大鼠腹腔麻醉，股动脉采血，室温静置2 h后3 000 r/min离心3 min，吸取上部取血清，-20℃保存待测。随后脱臼处死大鼠。

实验期间所有实验动物分笼饲养，自由进食饮水。

3 统计学方法

4 结果

4.1 各组大鼠一般情况比较

于造模第12日起，各造模组大鼠出现喜聚集、毛发粗糙、具有攻击性、乳房色红，造模结束后出现精神不振、易激惹、乳房色红、肿大；用药后大鼠有不同程度的好转，活动增加，易激惹、乳房红肿现象基本消失。各造模组间表现无明显差异。

4.2 用药前后乳头直径的变化情况比较

造模31天后，各造模组大鼠的乳头直径与空白组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，各造模组间差异无统计学意义(P>0.05)。用药30天后大鼠的乳头直径缩小，与造模后相比较除空白组、模型组外，差异均有统计学意义(P<0.05)；中药高剂量组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)，各用药组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。说明造模成功后大鼠乳头直径增大，用药可使增大的乳头缩小，尤其是在序贯应用Ⅰ号方、Ⅱ号方后，其中又以中药高剂量组作用最明显(与空白组比较,P>0.05)。

表1 用药前后各组大鼠乳头直径的变化情况比较

注：与空白组比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05；与本组造模后相比较，△P<0.05

4.3 各组大鼠血清E2、P和PRL的变化情况比较

从表2可以看出，模型组大鼠血清E2升高，与空白组比较有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比较，各用药组大鼠血清E2下降，其中中药中剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，三苯氧胺组及中药低、中、高剂量组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)，中药中剂量组与逍遥丸组相比较差异有统计学意义(P<0.05)，说明HMG模型大鼠血清E2升高，灌服药物后可使HMG模型大鼠升高的血清E2回落。

表2 血清激素含量变化情况比较

注：与空白组比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05；与逍遥丸组比较，△P<0.05

模型组大鼠血清P下降，与空白组比较有统计学差异(P<0.05)。与模型组比较，各组大鼠血清P升高，以逍遥丸组最明显，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)，说明灌服逍遥丸、三苯氧胺及低、中剂量中药后可使HMG模型大鼠血清P升高。

模型组大鼠血清PRL升高，与空白组比较差异有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比较，逍遥丸组和中药低、中、高剂量组血清PRL下降，差异有统计学意义(P<0.05)，而逍遥丸组、低剂量组与空白组比无统计学差异(P>0.05)，说明灌服逍遥丸及中药低、中、高剂量可使HMG模型大鼠血清PRL下降。

5 讨论

HMG的发病可以是从青春期至绝经期的任一年龄，其中以25～45岁为多见，35～45岁为高峰年龄，约占全部乳腺疾病的70%以上。中医称其为“乳癖”，冲任失调、肝郁肾虚为其发病之本，血瘀气滞痰凝为其发病之标，病属本虚标实，与肝脾肾三脏密切相关[3-4]。通过多年临床观察和总结，武权生教授依据月经节律中冲任、胞宫气血由满盈、溢泻至空虚的变化和本病有随月经周期发作的特点,从而分段周期论治，强调“经前勿补，经后勿泻”的原则，经前治标，经后固本，常见显效[1]。因此，针对乳腺增生病在月经的不同时期拟定了经后用II号方补肾柔肝、调补冲任，经前及经期I号方疏肝清热、软坚散结。

P、E2、PRL对女性乳腺的发育发挥了重要作用，E2促进乳腺腺管增生，P促进乳腺腺泡发育，PRL促进乳腺腺泡、腺管的发育。但是，E2过高或PRL升高，P与雄激素分泌不足，使乳腺组织长期过度刺激导致HMG的发生。徐巍等发现，乳腺增生患者的血清雌激素水平明显升高，孕激素水平显著下降[5]；邵淑丽[6]等研究发现，与正常组比较，绝经前HMG患者血清催乳素(Prolactin，PRL)明显增高。本次实验中大鼠造模后血清PRL、E2升高，P降低，与文献报道相一致[7]。而在对HMG模型大鼠灌服三苯氧胺、逍遥丸及中药I号方、II号方后，出现不同程度的血清PRL与E2降低、P升高，其中中药中剂量组血清E2和中药低、中、高剂量组血清PRL与模型组比较差异有统计学意义，提示中药I号方、II号方可通过调节血清PRL、E2、P水平，从而达到治疗HMG的目的。