TNF-α和TSLP在干眼症患者中的表达水平及临床意义

朱珮瑜 雷鹏

（广东省第二人民医院体检科 广州 510317）

干眼症是由于泪液动力学及泪液量和质异常所引起的泪膜稳定性下降，可诱使眼表组织病变[1]。患者常伴有眼部异物感、畏光等症状，且存在角膜上皮角化干燥等体征，严重影响患者生活质量。据流行病学调查显示[2]，我国干眼症发生率为19%～29%，呈现老年人多于青年人、女性多于男性的流行病学趋势。干眼症病因繁多，发病机制复杂，主要危险因素包括年龄、性别、糖尿病、空气污染、眼药水滥用等，且与机体炎症反应密切相关[3]。肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α） 为重要的炎性介质，能促进中性粒细胞吞噬，抗感染，促进细胞增殖和分化，与青光眼、白内障等一些眼部疾病的发生、进展有密切关系。胸腺基质淋巴细胞生成素（Thymic Stromal Lymphopoietin，TSLP）是一种由上皮细胞、肥大细胞及成纤维细胞表达的细胞因子，可通过树突状细胞协调体内天然免疫和适应性免疫，导致上皮细胞增生肥大及黏液过多分泌，进一步加重病情。鉴于此，本研究通过检测不同人群泪液、结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP的表达，以探究二者在干眼症发生机制中的作用，以期为临床提供参考。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年1月～2017年6月我院收治的70例干眼症患者为观察组，其中男33例、女 37例，年龄 28～71岁、平均年龄（42.91±6.98）岁。选择同期于我科进行眼科体检未见异常的55例健康正常者为对照组，其中男30例、女25例，年龄26～68岁、平均年龄（43.78±6.77）岁。两组性别、年龄等资料比较无显著性差异（P＞0.05），具可比性。

1.2 入组标准 纳入标准：符合干眼症的诊断标准[4]；无其他眼部疾病者；未合并全身代谢性疾病者；患者均自愿参加本次研究，并签署知情同意书。排除标准：精神异常或无法配合检查者；近12周内有眼部活动性炎症史者；合并其他变应性疾病、角膜移植、已行准分子激光屈光手术者；不能如期进行复查的干眼症患者。

1.3 方法

1.3.1 标本采集与检测 两组患者均在首次入院检查时按以下方法进行1次标本采集与检测：（1）轻拉受检者下睑结膜，稍稍后压，收集泪液后立即放入冻存管；（2）轻轻用刀片刮取受检者上睑结膜，放入冻存管，储存待检。将结膜上皮细胞和泪液放入离心机，转速2 000 r/min，离心半径13.5 CB，离心10 min，采用酶联免疫吸附法检测两组泪液、结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP水平，且两组样本检测均由同1人进行。

1.3.2 临床检查 （1）角膜荧光素染色情况（Fluorescein，FL）检查分为：0 级，无染色；1 级，散状点状染色；2级，密集型点状染色为；3级，片状染色。其中 2～3级判定为阳性。（2） 泪膜破裂时间（Break-up Time，BUT）检查：在裂隙灯下将1%荧光素钠纸放在患者结膜囊内，暴露角膜，用钻蓝光照射，记录最后一次瞬目到角膜上开始出现斑点的时间，时间＜10 s为阳性。（3）泪液分泌试验（Schirmer I Test，SIT）检查：轻轻将滤纸放入受检者下睑内侧1/3的结膜囊内，另一端自然下垂，嘱患者轻轻闭眼，5 min后取出滤纸测量并记录湿长，长度＜10 mm为阳性。

1.4 统计学方法 使用SPSS20.0软件进行数据分析，计量资料以（±s）表示，多组之间比较采用方差分析，两两比较采用t检验，相关性采用Pearson相关分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组泪液、结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP比较观察组泪液、结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP均显著高于对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 两组泪液、结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP水平比较（ng/L，±s）

表1 两组泪液、结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP水平比较（ng/L，±s）

组别 n 泪液TNF-α TSLP结膜上皮细胞TNF-α TSLP观察组对照组70 55 t P 30.23±6.33 20.61±4.40 10.01 0.00 16.40±4.28 9.31±2.57 11.47 0.00 268.84±30.28 190.89±21.50 16.81 0.00 128.20±16.49 66.38±8.81 26.79 0.00

2.2 观察组泪液中TNF-α、TSLP表达与临床检查结果相关性分析 Pearson相关分析显示，泪液中TNF-α、TSLP 表达与 BUT、SIT 均呈负相关（P＜0.05），与 FL呈正相关（P＜0.05）。见表 2。

表2 观察组泪液中TNF-α、TSLP表达与临床检查结果相关性分析

2.3 观察组结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP表达与临床检查结果相关性分析 Pearson相关分析显示，结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP表达与BUT、SIT均呈负相关（P＜0.05），与 FL 呈正相关（P＜0.05）。见表3。

表3 观察组结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP表达与临床检查结果相关性分析

3 讨论

干眼症是眼科常见的眼表疾病之一，病因繁多，目前多认为炎症、内分泌紊乱以及神经功能障碍可能参与或共同参与该病的发生、发展，当泪液分泌及排出系统功能不全，且存在长时间异常便会破坏眼表面防御平衡，损伤眼表修复功能，导致泪膜稳定性下降，引起泪腺和眼表慢性炎症反应。临床研究表明[5]，在正常情况下，眼表面能通过多种调控机制调整眼表面免疫反应和炎症反应，在干眼症进展阶段，炎症反应起着最为关键的作用。

TNF-α主要是由单核细胞和巨噬细胞产生的炎症介质，为启动炎症反应的关键细胞因子，可促进炎症细胞发生聚集与黏附，诱发慢性炎症反应[6]。此外，TNF-α亦可通过自分泌和旁分泌等多种途径将白细胞招募到炎症部位，激活炎性细胞以发挥抗感染、杀伤和抑制肿瘤细胞、促进细胞增殖和分化等作用，广泛参与了多种自身免疫病的病理过程。TSLP主要由上皮细胞合成、分泌，能够与树突状细胞表面受体结合，通过TSLP/OX40L/OX40信号通路诱导Th2 型细胞转型，促进白细胞介素 -4（IL-4）、IL-5、嗜酸性粒细胞趋化因子的产生，启动过敏反应[7]。研究结果显示，观察组泪液、结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP均显著高于对照组（P＜0.05），提示在干眼症患者结膜上皮细胞和泪液中，TNF-α和TSLP处于病理性过度表达。这与曾永宜[8]研究结果相一致。此外，本研究亦发现，干眼症患者泪液、结膜上皮细胞中 TNF-α、TSLP表达与 BUT、SIT 均呈负相关（P＜0.05），与 FL 呈正相关（P＜0.05），这说明 TNF-α、TSLP在干眼症发生机制中具有重要作用，考虑原因可能为以TNF-α、TSLP为代表的炎性介质的释放，引起炎性聚集，加重眼表和泪腺的炎症反应，同时泪膜持续性异常，眼表面防御机制被破坏以致免疫及炎症反应失衡，进一步加重泪膜不稳定性及眼表损害。综上所述，TNF-α、TSLP在干眼症发生、发展中有着极为重要的作用，可作为干眼症临床诊断或预后判断的标志物。