宫颈癌中HPV16的整合位点分布及意义

王 丽*，王秀丽

（1.山东省聊城市人民医院妇产科聊城大学医学院，山东 聊城 252000；2.山东省聊城市人民医院妇产科，山东 聊城 252000）

宫颈癌（Cervical Cancer，CC）是世界女性中最常见的恶性肿瘤之一，发病率与死亡率仅次于乳腺癌而位居第二，其中80%以上的宫颈癌患者在发展中国家[1]。人乳头瘤病毒（Human papilloma virus， HPV） 持续性感染是造成临床上宫颈癌发生和发展的原因， HPV DNA几乎在所有的宫颈癌中均可被检测到[2]。在女性生殖道中，根据HPV致癌性的不同，可分为高危型（HRHPV），可能高危型和低危型（LR-HPV）。HPV16和HPV18是目前报道的最常见的与宫颈癌相关的型别，约70%以上的侵袭性宫颈癌是由这两种型别的病毒感染引起[3]。

HPV的基因组中，使HPV病毒具有永生化和转化的潜能主要与E6和E7两个致癌蛋白有关。HPV整合是随机的，同时也具有一定的倾向性，在脆性或异位断裂位点等热点区域[4]相对更易发生。本研究使用高通量全基因组测序方法对病毒整合事件进行检测，探讨了宫颈癌中HPV16整合与宫颈癌组织的临床病理因素的相关性。

1 材料与方法

1.1 研究对象

经本院伦理委员会批准，收集2012年5月～2017年5月我院因宫颈癌行根治术拥有完整临床资料的患者36例。所有病例均经病理学确证。患者术前HPVNDA阳性，既往无CIN病史及宫颈锥切病史，无盆腔放疗病史。

1.2 实验方法

使用高通量基因测序和芯片捕获方法在深圳华大基因公司进行测序分析。测序所得的序列在除去载体序列后取插入载体部分序列与NCBI 数据库用在线BLAST程序比对，将所得的人基因组序列在NCBI-Map Viewer中进行查询，了解病毒整合位置。

1.3 统计学处理

应用SPSS 19.0统计学软件进行统计分析。采用x2检验或者Fisher’s精确检验等对结果进行分析，P＜0.05，有统计学意义。

2 结 果

HPV 16整合与宫颈癌的临床分期相关，P＜0.05，差异有统计学意义。HPV16整合率在宫颈鳞癌，间质浸润深度≥1/2和淋巴血管间隙受累的病例中升高；HPV16整合率在其他病理因素中均无统计学意义，但可提示以上临床病理因素与病毒整合的相关。

表1 HPV 16整合与宫颈癌临床病理之间的关系

3 讨 论

HPV感染后，和宿主发生的一系列事件促进细胞的恶性转化， HPV发生整合，编码E6和E7蛋白的转录子的表达和稳定性提高，E6和E7蛋白能结合P53和pRb等细胞周期关键性调节蛋白并干扰其作用[5]。病毒整合导致了病毒癌基因E6和E7的持续性表达，也影响宿主DNA的功能。在本研究中，有29例标本检测到HPV16整合，其中12例样本均检测到2个以上整合位点，其中1例检测到了23次整合，提示HPV16可能倾向多点整合到启动子区域。

HPV16在Ib2-IIa的宫颈癌中整合事件出现的概率高于Ib1。HPV16的整合率在宫颈鳞癌，间质浸润深度≥1/2和淋巴血管间隙受累的病例中升高；HPV16整合率在其他病理因素统计中均无意义，但仍提示临床病理因素与病毒整合有关，宫颈间质浸润深度≥1/2和淋巴血管间隙受累可能是病毒多次整合的高危因素之一。有研究显示，HPV16整合状态与临床分期、病理类型、组织学分化相关不明显，其整合状态与预后无明显关联[6]。由于既往研究中均使用E2/E6基因比值计算病毒整合状态，结果显示与本研究略有不同，可能与研究使用的检测方法不同有关。

综上所述，在宫颈癌中，HPV16整合事件发生与频率随临床分期加重而升高；在宫颈间质浸润深度≥1/2和淋巴血管间隙受累的样本中整合事件更容易发生。