对猪圆环病毒2型抗体水平的分析与研究

罗建平

近年来，由于国家政策的大力扶持，我国的养殖业生产得到了空前的稳步发展，猪的养殖业更是在大步跃近。但是，猪病的危害和影响不容忽视，尤其是仔猪断奶后出现多系统衰竭综合征等现象，该病症与猪圆环病毒关系密切，是猪圆环病毒相关疾病（PCVAD）的重要病源，本文通过采用ELISA（酶联免疫吸附试验en-zymelinkedimmunosorbentassay， ELISA）试剂的免疫检测技术，进行了检测抗体水平分析与研究，以期有效评估和掌握的猪圆环病毒2型灭活疫苗对猪场的作用，减少仔猪高死亡率，有效控制该病蔓延。

1 关于猪圆环病毒与免疫检测技术介绍

1.1 猪圆环病毒是世界公认的免疫抑制病之一，该病是由猪圆环病毒感染所引起的以免疫抑制为特征的一类病毒性传染病，自1991年在加拿大猪群中首次暴发以后，已成为当今危害世界养猪业最严重的病毒之一，该病毒是引起仔猪断奶后出现多系统衰竭综合征、增生性坏死性间质性肺炎、猪皮炎与肾病综合症、新生仔猪先天性震颤、怀孕母猪繁殖障碍等多种疾病的统称，抑制猪体免疫功能，仔猪会伴有咳嗽、呼吸困难、逐渐消瘦等症状，随着病程的增长，容易继发其他疾病，如：附红细胞体病、弓形体病、喘气病、猪瘟等，给养猪业造成了巨大的经济损失。

1.2 猪圆环病毒免疫检测。常用的方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前者测定可溶性抗原或抗体，后者检测组织或细胞表面抗原。将抗原一抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后的显色反应判定结果。可用目测定性，也可用酶标测定仪测定光密度（OD）值反应抗原含量，灵敏度可达每毫升纳克（ng）水平甚至皮克（pg）水平，它常用于标记的酶有辣根过氧化物酶（ horseradishperoxidase，HRP）、碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，AP）等。

2 猪圆环病毒2型抗体水平免疫检测分析

2.1 操作方法。严格按试剂盒说明书操作，取抗原包被板，加入已稀释好的洗涤液200υL，倒掉，重复洗涤共计洗板2次，最后一次在吸水紙上拍干。将稀释好的待测血清、阳性和阴性对照血清各取lOOυL加入到抗原包被板孔中，阳性对照和阴性对照各设2孔（轻轻摇匀孔中样品，勿溢出），用封板膜覆盖包被板，置37℃温箱中温浴30min。弃掉封板膜，甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200υL，弃取洗涤液.重复洗涤共计洗涤5次，最后一次在吸水纸上拍干。每孔加酶标记物lOOυL，置37℃温箱中温浴30min。再次弃掉混合液并对抗原包被板进行洗涤拍干。将洗涤并拍干好的抗原包被板中每孔加入底物A50υL、底物B50υL混匀，室温（20至25℃）温室避光显色lOmin，最后每孔加入终止液50υL。lOmin内用酶标仪测定并记录各孔在630nm波长处的吸光度（OD）值（测定前轻轻摇匀，勿溢出）。根据OD值的大小，进行样品抗体水平的判断。

2.2 实验分析

2.2.1 随着猪年龄的增长，不同生长阶段的猪感染情况是有差异的，在仔猪（6至8周龄，发病率为20%至60%）和育肥猪生长阶段的猪感染机率高，猪体抗体水平较低，可引起仔猪淋巴系统疾病、渐进性体重下降、呼吸道症状及黄疸，造成患猪免疫机能下降、生产性能降低。此时，应及时加强免疫措施，积极做好疫病防控重点，有针对性地控制病情的流行。

2.2.2 基于猪圆环病毒2型免疫效果全年比较稳定，与季节性因素的影响不大，因此，养殖人员应做好日常管理工作，加强卫生消毒意识，提高饲养管理水平和猪群机体自身免疫抗体水平，防患于未然。

2.3 结果判定。阳性对照孔平均OD630nm≧1.O，阴性对照孔平均OD630nm≤0.3，于波长630nm处测酶标仪上各孔OD630nm的值，样品OD630nm>0.42，判为阳性，则证明实验成立。

3 注意事项

3.1 由于每个猪的健康情况不同，所以可能会导致试验结果有一定的影响。本文提到的试验方法虽常广泛应用于各种抗原和抗体的测定实验中。但除在检测中，会受到标本因素、试剂因素、操作因素等的影响，而导致ELISA试验测定出现结果错误。

3.2 血清标本在采集过程中应避免标本出现严重溶血现象：冰冻保存的血清样本应防止反复冻融；样本保存过程中若出现非细菌污染所致的浑浊或絮状物质，应离心后取上清液进行检测：样本的采集及血清分离过程中应尽量避的免细菌污染。

4 结论

猪圆环病毒2型抗体为在控制猪群猪圆环病毒2型的疫情，以及制定合理的综合防治措施奠定基础。

参考文献：

[1]孟宪梅，吴天鹏.猪圆环病毒2型和猪瘟病毒抗体检测与分析[J].中国动物检疫，2012，29（10）：39-40.

[2]张馨玉，徐立波.我国猪圆环病毒2型的流行情况和分析[J].中国猪业，2007（5）：37-40.

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