人参三醇对老年大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

王 斌 时 沛

(南阳医学高等专科学校基础医学部，河南 南阳 473000)

缺血再灌注损伤(IRI)是指机体组织经过一段时间缺血后，再次恢复血流灌注后，部分组织细胞的功能代谢障碍或功能进一步损伤或病情加重的现象，可以分为缺血损伤和再灌注损伤〔1〕。肾脏、心脏及脑部是IRI中较为常见的器官。冠心病是一种常见的严重危害老年人群健康的心血管疾病之一，是由于冠状动脉在粥样硬化的基础上伴随局部血栓形成造成冠脉血流量下降造成心绞痛及IRI〔2～4〕。近年研究表明，炎症对于动脉粥样硬化的发生及进展有着重要的作用〔5〕。炎症对于斑块的形成及斑块从稳定状态变为易损状态都有着重要的作用。改善患者的心肌供血，使患者血流量增加，改善患者血液循环，从而使心肌耐受缺血缺氧的能力是目前临床上的治疗重点。人参是一类名贵的重要，历来治疗心血管疾病的处方上有着重要的对用。人参三醇是人参中最重要的一类生理活性物质，目前已经在临床上广泛用于治疗心血管疾病，且效果明显。本研究采用结扎冠状动脉左前降支的方法导致老年大鼠形成IRI的模型，系统性分析人参三醇对大鼠心肌的影响并探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1实验动物 健康SD大鼠60只，体质量280～320 g，鼠龄20～24 w，SPF级，均为雄性，由浙江省医学科学院提供，使用许可证号为syxk(浙)2014-0008。大鼠的饲养与SPF动物房中，动物房温度维持在20～25℃，相对湿度为30%～60%，自由禁食禁水。12 h照明12 h避光，正式试验前适应新饲养至少1 w。

1.2试剂 本研究使用的人参三醇购自上海源叶生物科技有限公司(纯度≥99%)，动物呼吸肌购自成都泰盟科技有限公司，酶标仪购自深圳雷杜生命科学股份有限公司；全自动生化分析仪购自日立7020型；SSW型电热恒温水槽购自上海博讯实业有限公司，生化试剂盒购自日本积水；酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自深圳达科为有限公司。

1.3方法 将80只大鼠随机分为4组，每组20只，分别为假手术组、模型组、生脉饮组(450 mg/kg)和人参三醇组(45 mg/kg)，给药组连续给药7 d，最后1次给药于造模前腹腔注射(i.p.)给药。造模方法为大鼠使用30 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，背位固定在手术台上，记录正常的心电图。胸部去毛后消毒，打开胸腔，剪开心包，迅速穿线结扎灌装动脉左前降支(LAD)后将心脏送回胸腔。假手术组只穿线，不结扎。以心电图中ST段抬高或者下降0.1 mV为结扎成功。结扎成功后30 min，松开结扎绳实现再灌流后，荷包缝合。再灌注24 h后取材测定各项指标，并同时观测人参三醇对模型大鼠心电图ST段的影响。

1.4观察指标 大鼠再灌注24 h后，腹主动脉插管取血，加入抗凝管中没使用血小板聚集仪测定大鼠血流动力学参数5 min的血小板聚集率(PAG)及最大血小板聚集率(MPAG)。另收集部分全血至非抗凝管中，离心收集血清肌酸激同工酶(CK-MB)及白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；按试剂盒方法测血清丙二醛(MDA)，超氧物歧化酶(SOD)含量;另取血抗凝分离血浆，用放免法测血浆内皮素(ET)、血小板黏附率血管紧张素(Ang)Ⅱ及前列环素(PG)I2和血栓素(TX)A2水平。剖取大鼠心脏，使用氯化钠注射液冲洗干净大鼠心脏中的血液，剔除脂肪血管等非心肌组织后，沿着冠状沟切除心房，称左心室湿重。平行房室沟横切左心室4～5片，浸入氮蓝四唑(NBT)磷酸缓冲液中，于37℃水浴中颜色，切下缺血心肌组织，称重并计算心肌梗死面积。

1.5统计学方法 使用SPSS15.0统计学软件进行LSD-t检验，率的比较采用χ2检验。

2 结 果

2.1人参三醇对大鼠心电图ST段的影响 与假手术组相比，模型组缺血5 min和30 min ST段均显著增高；与模型组相比，生脉饮和人参三醇均显著降低了缺血5 min和30 min ST段。再灌注段的结果表明，与假手术组相比，模型组再灌注5 min、30 min和60 min后ST段均显著抬高；与模型组相比，而生脉饮组和人参三醇均显著降低ST段(P<0.05)，见表1。

表1 人参三醇对大鼠心电图ST段的影响

与模型组比较：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

2.2人参三醇对大鼠血清生化指标及细胞因子的影响 模型组大鼠血清CK-MB、IL-6、TNF-α和MDA均显著高于假手术组，SOD显著低于假手术组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。经过生脉饮和人参三醇干预后，大鼠血清中CK-MB、IL-6、TNF-α和MDA均显著低于模型组，SOD显著高于模型组(P<0.05)，生脉饮组和人参三醇组之间差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 人参三醇对大鼠血清生化指标及细胞因子的影响

2.3人参三醇对大鼠血流动力学及心肌梗死面积的影响 模型组血小板黏附率、PAG和MPAG均显著高于假手术组(P<0.01)；生脉饮和人参三醇干预大鼠后，血小板黏附率、PAG和MPAG均显著低于模型组(P<0.01)。生脉饮组和人参三醇组干预后，大鼠心肌梗死面积显著低于模型组(P<0.05)。见表3。

表3 人参三醇对大鼠血流动力学及心肌梗死面积的影响

3 讨 论

正常的血液循环是维持机体组织、细胞保持正常生理功能的基本条件。各种原因所致的组织血液灌流量不足会导致组织局部缺血，导致局部组织能量代谢障碍、活性氧增多，导致局部炎症反应发生，最后炎症反应介导的细胞损伤和细胞凋亡导致组织损伤〔6〕。如何有效预防并积极治疗组织的IRI是目前临床上急需解决的治疗难题。目前，临床上主流的治疗方法是对缺血组织预处理及在缺血发生前采取相应措施，提高靶区域细胞对缺血和缺氧的耐受程度，并且在缺血后处理及采取短暂的再灌注-缺血交替处理方法，但是不仅操作繁琐，而且往往难以诊断患者是否存在局部缺血风险，难以真正有效实施。人参三醇是一种天然的酚类抗氧化物，也是现在药理学研究较为充分一种的天然产物。现代药理学研究已经证实，人参三醇具有抗氧化、抗炎、免疫调节等作用〔7，8〕。由于人参三醇具有清除自由基、抑制炎症等方面的作用，人们推测人参三醇可能能够缓解机体IRI。

本研究显示人参三醇能够显著改善缺血阶段和再灌注阶段心肌的心电图变化，能够降低由于缺血再灌注引起的血流供应不足导致的损伤。人参三醇能够显著降低血清中炎症介质的水平，且人参三醇与生脉饮之间无显著差异。人参三醇能够显著改善大鼠由于IRI导致的血流动力学的变化，这可能与人参三醇主要降低血清中炎症相关介质相关〔9，10〕。综上所述，人参三醇能够显著改善心肌IRI大鼠的心电图变化，显著降低血清中的炎症介质相关水平，并降低相关血流动力学参数，降低心肌梗死面积，值得进一步研究人参三醇的具体作用机制。