小枝玫瑰总黄酮提取工艺研究

刘寰宇， 王 莹， 严文平， 刘 勇， 兰 卫

(新疆医科大学1中医学院， 乌鲁木齐 830011; 2附属中医医院， 乌鲁木齐 830002; 3新疆鸿德堂永盛药业有限公司， 乌鲁木齐 830011)

小枝玫瑰为蔷薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb)中紫红花重瓣玫瑰(R.rugosaf.plenaByhouwer)中的小枝玫瑰(BranchletRose)干燥花蕾，为中华人民共和国药典收载品种[1]。 玫瑰具有抗心肌缺血[2]、抑菌[3]、调节血脂[4]、抗抑郁[5]等作用。小枝玫瑰具有芳香开窍、安神止痛、软肠通便、滋补肠胃、改善消化、驱风消炎、润肤生辉功能[6]。主要含有木犀草素、槲皮素和没食子酸等成分[7]。本研究以乙醇体积分数、乙醇用量和提取时间为考察因素，以芦丁为对照品，通过单因素试验和正交试验，最后确定小枝玫瑰总黄酮最佳提取工艺，为小枝玫瑰黄酮的质量控制和工业化生产提供依据。

1 仪器与试药

1.1仪器DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，UV2550型紫外分光光度计(日本岛津公司)，EYELA SB-1000型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司) ，UV-2550型紫外光谱仪(日本岛津) ，AL 104型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。

1.2试剂芦丁标准品(上海源叶生物科技有限公司，批号：20160530)， 95%乙醇(天津富宇化工厂，批号：20160826)，硝酸铝(天津富宇化工厂，批号：20151009)、氢氧化钠(天津富宇化工厂，批号：20160415)、亚硝酸钠(天津富宇化工厂，批号：20160823)，试剂均为分析纯；蒸馏水为去离子水。

1.3药材小枝玫瑰2017年3月购买于新疆鸿德堂永盛药业有限公司(批号：20161012)，经新疆医科大学中医学院中药资源教研室主任盛萍教授鉴定为蔷薇科植物玫瑰(RosarugosaThunb)中紫红花重瓣玫瑰(R.rugosaf.plenaByhouwer)中的小枝玫瑰(branchlet rose)的干燥花蕾。

2 方法与结果

2.1对照品溶液的制备称取芦丁标准品2.95 mg，用乙醇定容至25 mL容量瓶中，得到浓度为0.118 mg/mL芦丁标准品溶液。

2.2线性关系考察吸取“2.1”项下芦丁标准品溶液1、2、3、4、5 mL，分别加入5%亚硝酸钠0.3 mL，反应6 min，加入10%硝酸铝0.3 mL，反应6 min，加入4%氢氧化钠3 mL，充分摇匀，定容至10 mL容量瓶中反应15 min，测定500 nm处吸光度。以浓度为纵坐标(Y)，吸光度值为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程Y=9.449 2X-0.005 1，r=0.999 3，芦丁浓度在0.011 8～0.059 0 mg/mL范围内线性关系良好。

2.3单因素试验

2.3.1 乙醇浓度对玫瑰总黄酮含量的影响 称取小枝玫瑰粉5份，每份1 g，温度80℃ ，次数1次，料液比1∶12，时间60 min，加热回流提取，提取溶剂分别为30%、40%、50%、70%、90%乙醇，测定500 nm处吸光度，吸光度(A) 分别为0.288、0.427、0.517、0.485、0.187，总黄酮含量分别为37.24、54.91、66.35、62.28、24.40 mg/g。选择40%、50%、70%乙醇作为正交试验考察因素。

2.3.2 料液比对玫瑰总黄酮含量的影响 称取小枝玫瑰粉5份，每份1 g，温度80℃，提取次数1次，乙醇浓度50%，时间60 min，加热回流提取，料液比分别为1∶8、1∶12、1∶16、1∶20、1∶25，测定500 nm处吸光度，吸光度(A) 分别为0.480、0.517、0.361、0.347、0.293，总黄酮含量分别为51.37、66.35、70.86、74.57、78.91 mg/g。选择料液比1∶8、1∶12、1∶16作为正交试验考察因素。

2.3.3 提取时间对玫瑰总黄酮含量的影响 称取小枝玫瑰粉5份，每份1 g，温度80℃，提取次数1次，乙醇浓度50%，料液比1∶12，加热回流提取，时间分别为30、60、90、120、150 min，测定500 nm处吸光度，吸光度(A) 分别为0.491、0.517、0.498、0.473、0.435，总黄酮含量分别为63.05、66.35、63.40、60.76、55.93 mg/g。选择提取时间30、60、90 min作为正交试验考察因素。

2.4正交试验根据单因素预试验的结果，选择溶剂浓度(A)、料液比(B)、提取时间(D)3个因素，每个因素3个水平，以小枝玫瑰总黄酮提取量为指标，采用L9(33)正交表做正交试验设计，见表1。称取小枝玫瑰27份，每份1 g，每种条件平行提取3份样品，以小枝玫瑰总黄酮提取量为指标，对结果进行极差分析，以确定最佳提取条件，正交试验安排及含量测定结果，见表2。方差分析结果表明，各因素对小枝玫瑰中总黄酮含量影响的顺序是B>A>C，(即料液比>乙醇浓度>提取时间)。A、B因素与各因素之间差异有统计学意义 (P<0.05和P<0.01)，即乙醇浓度和料液比对小枝玫瑰中总黄酮的含量具有显著性影响。C因素与各因素间差异无统计学意义(P>0.05)，即提取时间对小枝玫瑰中总黄酮的含量影响不显著。最佳工艺为A2B3C1，即50%乙醇，料液比1∶16，提取30 min，见表3。

表1正交试验设计表

2.5验证试验称取干燥小枝玫瑰花粉3份,每份1 g，按照提取工艺A2B3C1进行提取，对正交试验优选的条件进行验证试验,得到小枝玫瑰总黄酮提取量分别为66.82、65.99、67.02 mg/g，平均值为66.61 mg/g，表明方法与正交试验结果基本相同。

表2 正交表及含量测定结果(n=27)

表3 方差分析结果

注：F1-0.05(2,2)=19.00，F1-0.01(2,2)=99.00。

3 讨论

近年来，学者们对小枝玫瑰开展多方面研究，帕尔哈提·柔孜等[8]报道玫瑰花瓣总黄酮和总多糖具有体外抗氧化活性；姜君君等[9]测定了小枝玫瑰花中没食子酸含量；郭玉婷等[10]研究了新疆小枝玫瑰对正常小鼠降糖作用及机制；兰卫等[11]研究了小枝玫瑰提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的降低作用及对糖耐量的提高作用。小枝玫瑰中主要含有挥发油、黄酮类、多酚、花青素类等成分是人体口服产生药效的物质基础。黄酮类化合物是其主要的活性成分，本研究确定了小枝玫瑰总黄酮最佳提取工艺条件，提取工艺简单、实用，可为大规模提取小枝玫瑰黄酮提供理论依据。