无偿献血者乙肝病毒核酸检测分析

李小容 谭寒玉 朱 林 淳 静

（四川省绵阳市红十字中心血站，四川绵阳 621000）

输血是临床急救及手术治疗等的重要环节，也是挽救伤病者的关键，而输血安全则是保障伤病者生命安全的重中之重，其中，输血相关性传染病的预防是临床关注的重点，血液筛查也是各地血站安全工作的核心。一直以来，血清免疫学检测都是血液筛查的主要手段，检测的阳性率高，但是HBV、HCV及HIV这3种液传播疾病病毒检测的窗口期均较长，仍具有一定的安全风险。而核酸检测应用的逐渐广泛，有效弥补了血清免疫检测的不足[1]。本研究就核酸检测在无偿献血者乙肝病毒空窗期筛查中的应用价值进行探究，效果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年8月至2017年12月本院采集的且经过血清免疫检测合格的无偿献血者的血样标本为研究样本，共有107 465例，均进行核酸检测。无偿献血者均经过严格筛选，均身体健康，满足卫生部颁布的现行的《献血者健康检查要求》的相关标准。采集血液后，同时留取用以血清免疫检测和核酸检测的样本，先进行血清免疫检测，合格后，再行核酸检测，血清免疫检测及核酸检测全程中，血样的采集、存取及处理操作，皆由专业人员严格依照卫生部的技术要求规范进行。

1.2 试剂与仪器

（1）血清免疫检测。使用全自动酶联免疫分析仪（生 产 厂 家：HUMAN Gesellschaft fürBiochemica und DiagnosticambH）全自动加样仪（生产厂家：嘉兴凯实生物科技有限公司）；乙型肝炎病毒表面抗原（HBSAG）酶联免疫诊断试剂盒、丙型肝炎病毒抗体（HCV）酶联免疫试剂盒以及人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）抗体酶联免疫检测试剂盒均购自北京万泰生物药业有限公司，具体操作，皆严格依照产品使用说明书进行。

（2）核酸检测。使用罗氏COBASS201检测系统，使用配套试剂，具体操作步骤，皆严格依照产品使用说明书进行。

1.3 方法

（1）标本采集及处理方法。EDTA-K2真空抗凝管，留取10mL血液，分2管装存，其中，应用带分离胶的真空抗凝管保存核酸检测标本。全部标本在血样采集后4 h内进行离心处理，运输或保存待检时，应将样本置于4℃环境内，需保证在采集血样24 h内进行检测。需要追踪检测的献血者的血样，使用带分离胶的真空抗凝管留样，5 mL即可，核酸初检为阳性的标本，需取血袋血浆，实施核酸拆分实验。

（2）核酸检测方法。先进行单人份联合检测，若为核酸单独反应性标本，则进一步采取分项鉴别试验。

1.4 检测结果判定标准

两种检测行平行检测。血清免疫检测结果低于设定的Cut off值，则可判定为阴性，而若大于或等于设定的Cut off值，则可判定为阳性[2]。

在核酸检测中，核酸单独反应性判定由系统自动完成，以样本S/CO值≥1为判定标准，初检时同时检测3种病毒，出现反应性结果便是存在1 ～ 3种阳性病毒核酸；初检阳性者，取血袋血浆，分别进行3种病毒核酸反应试验，无反应，则为阴性，有反应，为阳性，

1.5 统计学分析

采用SPSS21.0统计学软件进行数据分析，计量资料用（±s）表示，行t检验；计数资料用（%）表示，行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 核酸单独反应性检测结果

在本组107 465例无偿献血者中，出现核酸单独反应性的样本有331例，阳性检出率为0.31%，核酸初检单阳性例数有223例，单阳性率为0.21%。

2.2 核酸鉴别试验阳性检出结果

进一步核酸鉴别试验中，有97例为反应性样本，总阳性率为29.31%；而其中，HCV-NRA的鉴别阳性检出率显著高于HCV-DRA和 HIV-NRA，差异有统计学意义（P ＜ 0.05），见表 1。

表1 HBV-DNA、 HCV-DRA和 HIV-NRA核酸鉴别情况比较[例（%）]

3 讨论与结论

一直以来，临床都以血清免疫学检查为血液筛查的主要手段，阳性检出率高，但若患者处于窗口期、合并病毒变异或处于免疫静默期间，均容易出现漏诊[3]。近年来，随着分子流行病学的的发展以及分子生物科学技术的不断进步，核酸检测在血液筛查，尤其是HBV、HCV以及HIV等病毒的筛检中，应用逐渐广泛，现如今，其应用几乎已经覆盖了全国各地的血站。

相比于血清免疫学监测，核酸检测的最显著优势就是能够缩短病原体检测的窗口期，其检测的灵敏度很高，能够直接对血液中的病原体进行筛查，可以准确检测出血清免疫检测不到的隐匿病毒，从而有效提升输血安全。

核酸检测基于TMA技术，其基本原理如下：借助特异性的磁微珠以及目标捕获试剂，将被检测的病毒核酸分子进行分离和纯化，再借助TMA技术，实现对HBV-DNA、HCV-RNA以及HIV-RNA的核酸片段进行扩增，最后，再利用HPA法对扩增产物进行检测，所用试剂中，具有内标分子，在整个反应过程中都起到严密监测的作用，可以有效避免假阴性结果的出现。

现阶段，临床将核酸检测引入到无偿献血者的血液筛查中，其目的就在于对血清免疫检测遗漏的血样进行再次筛查，而血清免疫检测漏诊的发生，主要集中于以下两种原因，其一，献血者正处于血清免疫检测的窗口期，其二则是献血者属于隐匿性HBV病毒感染；后一种现象的出现，多是由于病毒变异或者患者自身免疫系统发生变化导致，感染者体内的乙肝表面抗原的合成降低或者出现结构变化，在进行血清HBsAg检测时，结果呈阴性，但是患者肝组织中还是可以检出HBV-DNA。而核酸检测则正好能弥补这一不足。但有研究证实，核酸检测的总检出率相比于血清免疫检测较低，且成本较高，因此，在实践应用中，均先行血清免疫检测，再行核酸检测进行二次筛查，以确保安全性。

本研究中，针对107 465例血清免疫检测合格的无偿献血者的血样进行核酸检测，先行单人份联合检测，成功发现有331例血样存在核酸单独反应性，进行核酸单阳性确定有223例，进一步实施核酸鉴别反应试验，最终确定有97例血样存在病毒感染，而其中有94例HBV-DNA阳性检出，HCV-DRA以及HIV-DRA阳性检出则分别为2例和1例。证实了核酸检测能够有效弥补血清免疫检测的缺漏，将两者联合应用，效果突出。将阳性检出率进行两两交叉对比，结果显示，HBV-DNA阳性检出与其它两种的阳性检出率差异有统计学意义（P＜0.05），证实目前输血安全风险主要为乙肝病毒感染，所以应将其作为防控重点。

综上所述，核算检测可以与血清免疫检测联合应用于无偿献血者血液安全检查中，能有效提升输血安全，另外，临床应加强对乙肝病毒感染的筛查和防控。