超高效液相色谱串联质谱测定芹菜中咪鲜胺、噻虫嗪等5种农药残留量

张 武，李二虎，李桂红，赵 瑞，李 俊，程 媛

(天津市农药检定所，天津 300061)

噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒是烟碱类杀虫剂，咪鲜胺和烯酰吗啉是杀菌剂，具有广谱、低毒等特点。 已有的液相色谱检测方法因其干扰性强、灵敏度差，假阳性时有发生。本文采用超高效液相色谱-串联质谱法，经固相萃取柱(SPE)，在Hypersil Gold柱(2.1×100mm)柱经梯度洗脱分离，采用选择离子监测(SRM)方式准确检测芹菜中的咪鲜胺、噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒、烯酰吗啉，本方法与以往方法相比，具有更高的选择性、稳定性和灵敏性。

1 实验方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器 TSQ Quantum Access三重四极杆串联液质联用仪(Thermo Fisher Scientific公司)；振荡器；高速匀浆机(IKA®-WERKE，T25 basic)；水浴氮吹仪(N-EVAP111,Organomation Associates，Jnc.)；旋转蒸发仪(IKA®-WERKE，RV06-ML)。

1.1.2 试剂与材料 甲醇、乙腈均为HPLC级(Merck，Darmstadt，Germany)，二氯甲烷、氯化钠(140℃烘烤4h)、醋酸铵均为分析纯；娃哈哈纯净水;氨基柱(Cleanert NH2-SPE；500mg/6mL)；0.22μm过滤膜。

1.1.3 标准品 咪鲜胺、噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒、烯酰吗啉 (天津环境监测中心)。

将5种标准品用甲醇配置成浓度为100mg/L作为储备液。系列浓度的标准工作溶液由标准贮备溶液用甲醇配制(现用现配)。

1.1.4 色谱与质谱条件 三重四极杆液质联用仪，配电喷雾离子源(ESI)；色谱柱：Hyperisil Gold柱，2.1×100mm；柱温：室温；流动相采用梯度洗脱，洗脱参数(表1)；进样体积：10μL。

表1 梯度洗脱参数

质谱条件：ESI正离子模式；喷雾电压4 000V；离子传输毛细管温度：350℃；鞘气：35psi；采用选择反应监测(SRM)扫描模式。质量条件参数(表2)。

表2 质谱质量条件参数

1.2 试验方法

1.2.1 样品提取 称取混匀芹菜样品20.00g置于125mL的广口瓶中，加入40mL乙腈，在高速匀浆机上匀浆2min(15 000r/min)，然后过滤到100mL的具塞量筒中，加入6g 氯化钠，振摇提取2min，静置分层后，分离有机相和水相，准确量取有机相8mL于60℃水浴上氮吹至干，用2mL二氯甲烷+甲醇(95∶5,V/V)混合液溶解，待净化。

1.2.2 样品净化 净化用氨基柱，先用5mL二氯甲烷+甲醇(95∶5,V/V)的混合溶液预淋柱子，当溶液到达吸附层表面时，立即将上述浓缩液加至柱中，并用10mL二氯甲烷+甲醇(95∶5,V/V)的混合溶液分2次洗脱，收集。将收集的洗脱液在50℃水浴浓缩至近干，用甲醇+水(50∶50,V/V)准确定容至4mL，用0.22μm滤膜过滤，待检测。

1.2.3 测定步骤 在1.1.4色谱工作条件下，待仪器稳定后，按标准溶液、样品溶液、标准溶液的顺序进行色谱分析，采用外标法对样品进行定量分析。

2 结果与讨论

2.1 固相萃取小柱的选择 净化过程中利用固相萃取小柱相对于传统填充柱净化具有以下几个优势：一是，净化效果好，能有效排除杂质干扰，可获得良好目标峰型；二是，大大减少了前处理溶剂的用量，减少资源浪费和环境污染；三是，操作更加方便，效率高，对于大批量的样品，容易实现自动化和批量操作。

2.2 流动相选择 对流动相条件进行了优化，采用梯度洗脱，使得峰型得到了很好的改善，大大提高了灵敏度。

2.3 分析方法的线性相关测定 在上述确定的色谱条件下，将5种农药标准贮备溶液用甲醇+水(50∶50,V/V)溶液逐级稀释成10、20、40、80、160μg/L系列浓度的标准工作溶液。将系列浓度分别进样10μL，在液质联用仪上测定峰面积，每个浓度测得的峰面积与对应的标准溶液浓度绘制标准曲线。咪鲜胺的标准工作曲线方程y=2 846.1x-6 008.9，R2=0.998 1；噻虫嗪标准工作曲线方程y=8 383.2x-824.58，R2=0.998 6；吡虫啉标准工作曲线方程y=3 297.1x-7 503.2，R2=0.997 8；啶虫脒标准工作曲线方程y=4 475.9x+20 341，R2=0.992 6；烯酰吗啉标准工作曲线方程y=2×106x-9×106，R2=0.995 3。

2.4 最小检测量 5种农药均为1.0×10-10g。

2.5 相对保留时间 咪鲜胺10.71min、噻虫嗪3.64min、吡虫啉5.35min、啶虫脒5.98min、烯酰吗啉9.19min。

2.6 实验谱图

图1 标准样品色谱图

图2 基质标准样品色谱图

图3 样品添加色谱图

图4 样品空白色谱图

2.7 精密度、回收率试验 采用添加法，在空白对照样品中添加已知含量的5种农药标准溶液，添加浓度为0.01、0.1、0.5mg/kg 3个水平，各处理重复5次，咪鲜胺在芹菜添加回收率在81.81%～107.74%之间，变异系数在4.39～8.26之间；噻虫嗪在芹菜添加回收率在80.87%～90.83%之间，变异系数在2.63～5.70之间；吡虫啉在芹菜添加回收率在78.50%～87.07%之间，变异系数在1.99～3.46之间；啶虫脒在芹菜添加回收率在87.35%～95.50%之间，变异系数在5.00～8.09之间；烯酰吗啉在芹菜添加回收率在105.50%～113.00%之间，变异系数在7.24～8.69之间。具体数据(表3)。

表3 回收率与相对标准偏差

续表

3 结论

本文选用LC-MS/MS法的SRM方式检测芹菜中咪鲜胺、噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒、烯酰吗啉 ，用固相萃取柱净化，过滤后进行分析。采用三重四极杆质谱的选择反应监测(SRM)方式，确定其母离子，经碰撞能量优化试验确定特征离子，获得极高的检测灵敏度，本实验采用的方法满足多组分、低含量样品的检测要求，具有快速、准确、灵敏度高等优点。