34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的药物敏感分析及耐药机制探讨

2018-08-22蒋逸沈佳丽蒋文玥史伟峰

智慧健康 2018年19期

关键词：培南外排内酰胺酶

蒋逸，沈佳丽，蒋文玥，史伟峰

（1.常州市武进人民医院检验科，江苏常州 213161；2.常州市第一人民医院检验科，江苏常州 213003）

0 引言

耐亚胺培南的铜绿假单胞菌（IRPA）耐药性强，探讨其耐药机制可以为临床医生提供用药指导[1]。本研究通过收集我院IRPA，通过PCR技术分析其耐药基因，为有效控制耐药菌株传播提供依据。

1 研究对象和方法

1.1 研究对象

收集本院2015年4月至2016年7月我院各个科室患者体液标本分离出的IRPA，共计34株。样本来源为男性21例，女性13例，年龄24岁～63岁，平均年龄（43.2±13.2）岁。

1.2 研究方法

1.2.1 菌株鉴定及药敏试验

采用法国梅里埃公司的VITEK2 COMPACT全自动细菌鉴定仪及配套的药敏卡。以铜绿假单胞菌ATCC 27853为标准质控菌株，药敏试验采用Kirby-Bauer纸片扩散法，药敏结果参照美国临床和实验室标准化委员会颁布的标准判定。

1.2.2 检测基因

采取PCR法检测碳青霉烯酶基因（IMP、VIM、SIM、GIM、SPM、OXA-2以及OXA-10）、超广谱β-内酰胺酶基因（TEM、VEB、SHV、PER）、AmpC酶基因（PDC、DHA）并测序验证；PCR法检测整合酶基因(intIl、intI2和intI3)，并对整合酶阳性菌株进行整合子可变区的扩增，测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒；荧光定量PCR法检测PA膜孔蛋白oprD2基因是否缺失，以及主动外排系统MexAB-OprM、MexXYOprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN的超表达情况。

1.3 观察指标

分析34株IRPA的标本分布；RT-PCR结果。

1.4 统计学分析

录入SPSS 18.0软件。计量资料t检验；计数资料χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 标本分布

34株IRPA中，痰标本占70.6%（24/34）、尿标本占(5/34)占14.7%、伤口分泌物占5.9%（2/34）、咽拭子占5.9%(2/34)、血标本占2.9%(1/34)。从科室分布来看，脑外科占的比重最大，占 58.8%（20/34）；其次是ICU占14.7%（5/34），呼吸内科5.9%（2/34），肿瘤科5.9%（2/34），普外科5.9%（2/34），其余来自其他科室如骨科、神经内科、泌尿外科,占8.8%（3/34）

2.2 药物敏感分析

通过药敏发现菌株对亚胺培南耐药率最高，对阿米卡星最敏感，见表1。

表1 34株PA对11种抗菌药物的药敏分析

2.3 RT-PCR结果

34株IRPA中膜孔蛋白oprD2基因缺失11株，缺失率为32.4%。MexA超表达的PA有8株（23.5%），MexX超表达的PA有9株（26.5%），MexC超表达的PA有11株（32.4%），MexE超表达的PA有10株（29.4%）。

3 讨论

3.1 TEM-1超广谱β-内酰胺酶的产生

超光谱β-内酰胺酶由质粒介导，其基因型有TEM、SHV、OXA、CTX-M和其他型（PER、VEB、GES、CARB等）[2]。美国流行的ESBLs基因型以TEM-1为主，在欧洲以TEM-12型较常见，在亚洲以TEM-1居多。TEM-1超广谱β-内酰胺酶能水解第三代头孢菌素、第四代头孢菌素如头孢吡肟，单环B-内酰胺类抗生素。