高效液相色谱-串联质谱法检测鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的残留

龚 勇，朴秀英，孙丰收，崔 凯，廖先骏，李富根*

(1.农业部农药检定所，北京 100125；2.山东农业大学环境毒理研究中心，山东 泰安 271001；3.江苏省农业科学院农产品质量安全与营养研究所，江苏 南京 210014)

氟虫腈是一种苯基吡唑类杀虫剂，对害虫以胃毒作用为主，也有触杀和一定的内吸作用。其作用机制为阻碍昆虫γ-氨基丁酸控制的氯化物代谢，对蚜虫、叶蝉、鳞翅目幼虫、蝇类和鞘翅目等害虫具有很高的杀虫活性。氟虫腈在1987年由原法国罗纳-普朗克公司研发，1994年进入中国市场。对耐菊酯类、氨基甲酸酯类农药的害虫有高敏感性，也可用于防治人畜生活环境害虫和猫、狗等体外的跳蚤和虱等寄生虫[1]。

目前国内检测动物源基质中氟虫腈及其代谢物残留量前处理方法主要有固相萃取柱净化[2]、QuEChERS净化[3]，本方法采用GPC进行净化，净化效果好，抗基质干扰性强，灵敏度高，能达到残留分析要求的各项技术指标。

1 实验部分

1.1 主要仪器 液相色谱-质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI)；凝胶渗透色谱仪；旋转蒸发仪；氮气吹干仪；分析天平；组织捣碎仪；离心机等其他实验室设备。

1.2 主要试剂 乙腈为色谱纯，乙酸乙酯、环己烷、无水硫酸钠为分析纯，乙酸为优级纯；标准品由农业部农药检定所提供。

1.3 样品前处理

1.3.1 提取 称取10 g鸡蛋试样(精确至0.01 g)于250 mL提取瓶中，加入70 mL乙酸乙酯-环己烷溶液(1:1)，加入20 g无水硫酸钠，用高速组织捣碎机在15 000 r/min，匀浆1.5 min，全部倒入100 mL离心管中，4 000 r/min离心5 min，取上清液30 mL，40℃水浴旋蒸至低于5 mL，转移至离心试管中用乙酸乙酯-环己烷溶液(1:1)定容至10 mL，待净化。

1.3.2 净化 仪器：凝胶渗透色谱仪；净化柱：530 mm×20 mm，内装BIO-Beads S-X3填料22 g；流动相：乙酸乙酯-环己烷(1:1)；流速：5 mL/min；进样量：5 mL；开始收集时间：7 min；结束收集时间：10 min。

将待净化样品转移至样品管中，进样后收集7～10 min的馏分，取2 mL用氮气吹干，再用乙腈溶解定容至2 mL，过0.22 μm有机滤膜后，供液相色谱-串联质谱进行检测。

1.4 仪器分析条件

1.4.1 色谱参考条件 色谱柱：C18，100 mm×2.1 mm，粒径5 μm，或相当者；流动相：A为乙酸水(0.05%)溶液，B为乙腈，梯度洗脱程序(表1)；流速：0.2 mL/min；柱温：35℃；进样体积：10 μL。

表1 梯度洗脱程序(VA+VB)

1.4.2 质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描；喷雾电压：3 000 V；毛细管温度：350℃；鞘气(N2)：20 psi；辅助气(N2)：10 psi；碰撞气氩气：1.5 mTorr；检测方式：多反应监测(MRM)，多反应监测条件(表2)。

表2 氟虫腈及其代谢物的多反应监测(MRM)条件

相关谱图(图1-3)，每组自上至下依次为氟虫腈、氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜的谱图。

图1 鸡蛋空白谱图

图2 标样谱图(0.01 ppm)

图3 添加回收谱图(0.01 mg/kg)

2 结果与讨论

2.1 标准曲线 准确称取一定量的标准品(精确至0.01 mg)，以乙腈溶解并稀释，配制成一系列标准溶液，浓度分别为0.000 1、0.000 5、0.001、0.01 和0.1 mg/L，高效液相色谱-串联质谱分析测试，结果显示氟虫腈及其代谢物的峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性方程为氟虫腈y=14 973 348.420 2x+16 924.035 4，相关系数R2=0.998 4；氟甲腈y=67 230 873.147 2x+84 723.195 8，R2=0.998 3；氟虫腈砜y=40 289 281.585 6x+46 939.677 6，R2=0.998 5；氟虫腈亚砜y=38 578 439.296 9x+60 909.559 6，R2=0.997 2。

2.2 添加回收 在鸡蛋样品中分别添加氟虫腈及其代谢物的标样，做0.002、0.02、0.5 mg/kg，3个浓度的添加回收，每个添加浓度重复5次，充分混匀后静置2 h，用上述方法检测。氟虫腈在鸡蛋中添加0.002～0.5 mg/kg，回收率为86.6%～108%，变异系数为3.4%～15.9%;氟甲腈在鸡蛋中添加0.002～0.5 mg/kg，回收率为80.7%～114.3%，变异系数为3.9%～10.2%;氟虫腈砜在鸡蛋中添加0.002～0.5 mg/kg，回收率为82%～110.6%，变异系数为6.5%～12.5%;氟虫腈亚砜在鸡蛋中添加0.002～0.5 mg/kg，回收率为85.8%～110%，变异系数为5.6%～11.4%。符合农药残留分析方法要求。回收率及相对标准偏差(表3)。

表3 回收率及相对标准偏差

续表

2.3 定量限 在上述条件下，根据添加回收试验，氟虫腈及其代谢物在鸡蛋中的定量限为0.002 mg/kg。

3 结论

采用乙酸乙酯-环己烷(1:1)提取，GPC净化，液质检测，建立了鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的检测方法，并对方法的回收率和精密度进行了探究。本方法氟虫腈及其代谢物在3个添加水平下，回收率在80.7%～114.3%之间，相对标准偏差在3.4%～15.9%之间，符合《农药残留检测方法国家标准编制指南》(农业部2386号公告)要求[4]，可满足鸡蛋中氟虫腈及其代谢物检测的需求。