高效液相色谱法测定石岐乳鸽中氟喹诺酮类药物残留

马世柱 陈楠 黎小鹏 周嘉诚 梁锦填 高文彬 林俊杰

摘要 研究了石岐乳鸽中环丙沙星、达氟沙星、沙拉沙星和恩诺沙星4种氟喹诺酮类药物残留量的高效液相色谱测定方法。采用磷酸缓冲液提取，水饱和正己烷除脂，C18固相萃取小柱净化分离，LC-FLD检测器检测。结果表明，氟喹诺酮类药在15 min内获得良好的分离，线性相关系数r2为0.999 5～0.999 6，检测限可达0.02 mg/kg，回收率范围为74.2%～93.2%。该方法净化效果良好，操作简便。

关键词 高效液相色谱法；石岐乳鸽；氟喹诺酮类药物

中图分类号 O657.7+2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）11-0241-02

Abstract A HPLC method for the determination of 4 kinds of fluoroquinolones in Shiqi pigeons such as ciprofloxacin，danofloxacin，sarafloxacin and enrofloxacin was studied，extracting by phosphoric acid buffer solution，degreasing by water saturated hexane，purifing and separating by C18 solid phase extraction column，detecting by LC-FLD detector. The results showed that the fluoroquinolones were separated well in 15 min，the linear corr-elation coefficient r2 was 0.999 5-0.999 6，the detection limit was 0.02 mg/kg，and the recovery rate was 74.2%-93.2%.This method have good purifi-cation effect and simple operation.

Key words HPLC；Shiqi pigeon；fluoroquinolones

石岐乳鸽是中山市著名特色小吃，为20世纪30年代后期中山市先后从日本、澳大利亚引进的钦麻鸽和澳洲地鸽与本地优良鸽种杂交而获得的优良品种。石岐乳鸽在孵化后饲养22～25 d，体重达600～700 g即可食用。因其羽翼未丰，故名乳鸽[1]。石岐乳鸽因具有体形大、胸肉厚、肌肉饱满、肉质嫩滑爽口的特点而饮誉广东省以及港澳市场。

氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones，FQNS）是新一代广谱全合成抗菌素，高效低毒，价格低廉，少量使用还具有一定的促生长作用[2]，近年来逐渐在预防和治疗畜禽及鱼类疾病中广泛应用。但是该类药物在动物体内代谢缓慢，过量或不当使用易导致细菌耐药性问题，并对中枢神经系统造成不良反应[3]。本方法采用水饱和正己烷进行除脂，回收效果良好，能高效准确检测石岐乳鸽中所含氟喹诺酮类药物的残留[4-5]。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260高效液相色谱仪，配Agilent 1260 FLD检测器；百分之一电子天平（CP2102，Ohaus）；高速分散均质机（T-18 digital，IKA）；poxwar漩涡混合器（TZL-5009，苏州珀西瓦尔实验设备有限公司）；台式冷冻高速离心机（A2316R，上海安戈仪器有限公司）；固相萃取装置（天津奥特赛思仪器有限公司）；多功能超纯水系统（Spring-S20，厦门锐思捷科学仪器有限公司）；pH计（STARTER 3100，Ohaus）。

前处理所用试剂磷酸二氢钾、氢氧化钠、正己烷均为分析纯，广州化学试剂厂生产；流动相用85%磷酸，为色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司生产；三乙胺，阿拉丁试剂；C18固相萃取小柱（Agilent Bond Elut 100 mg，3 mL）、0.22 μm有机滤膜，天津津腾实验室设备有限公司生产。标准品由农业部环境保护科研监测所生产，浓度均为100 mg/L，使用前用甲醇将其稀释成所需浓度的混合标准溶液。

1.2 试验方法

1.2.1 样品提取与净化。称取2.0 g捣碎的乳鸽试样，置于30 mL匀浆杯中，加磷酸盐缓冲溶液10 mL，5 000 r/min匀浆5 min。匀浆液转移到离心管中，中速振荡5 min，5 000 r/min离心5 min后取其上清液待用。用磷酸盐缓冲溶液10 mL清洗刀头及匀浆杯，转入离心管，混合均匀，中速振荡5 min，5 000 r/min离心5 min，合并2次上清液，加入15 mL水饱和正己烷混合均匀，待用[6]。

固相萃取柱依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2 mL预冲洗。取上清液5.0 mL过柱，用1 mL水淋洗，挤干。用1.0 mL流动相洗脱，挤干，收集洗脱液，经滤膜过滤后作为试样溶液，待检测。

1.2.2 色谱条件。色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm，粒径5 μm；流动相：0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（V∶V=82∶18），使用前经微孔滤膜过滤；流速1 mL/min；检测波长：激发波长280 nm；发射波长450 nm；柱温：25 ℃；进样量：10 μL；定量方法：外标法。

2 结果与分析

2.1 氟喹诺酮类药物标准色谱图

由于待测氟喹诺酮类药物极性较低，故选择C18柱（250 mm×4.6 mm）作为分析色谱柱，结合药物结构和化学性质，按照上述色谱条件进行测定，得到氟喹诺酮类药物标准色谱图（图1）。结果表明，氟喹诺酮类药物在15 min内可实现良好分离，且峰形对称，满足检测要求。

2.2 标准曲线、线性范围及检出限

将不含待测药物的鸽肉空白基质溶液稀释标准品分别配制成为50、75、100、500 μg/kg的氟喹诺酮药物混合标准溶液，过0.45 μm滤膜后，按上述色谱条件进行测定。

2.3 回收率和精密度

在上述色谱条件下，采用标准加入法，在不含氟喹諾酮药物的空白鸽肉样品中，添加50～500 μg/kg氟喹诺酮药物混合标准溶液进行加标回收试验，测定加标回收率和试验精密度。结果表明，氟喹诺酮药物的加标回收率在74.9%～93.2%之间，其相对标准偏差在3.2%～11.8%之间（表1）。表明该方法具有较好的回收率和精密度，满足测定要求。

3 结论

本文采用高效液相色谱法测定石岐乳鸽中氟喹诺酮药物残留量，应用溶剂提取，固相萃取净化，浓缩定容后即可进行测定。该方法前处理简单，试验精密度和准确度均满足要求，适用于氟喹诺酮药物残留的快速测定，可进一步在更大范围的样品测定中推广应用。

4 参考文献

[1] 周艳明，李湘宁，胡睿. 无公害蔬菜中39种农药的气相色谱-质谱多残留检测[J]. 江苏农业科学，2008（2）：241-244.

[2] 李鹏，张子德，王琦，等.氟喹诺酮药物残留降解的研究[J].食品科学，2008（4）：86-88.

[3] 戴自英.实用抗菌药物学[M].上海：科学技术出版社，1992：268-276.

[4] 陈新谦，金有豫.新编药物学[M].北京：人民卫生出版社，1994：101-103.

[5] 孙曼琴.喹诺酮类抗菌药的安全性评价[C]//全国抗感染药物临床评价学术研讨会论文集.北京：中华医学会临床药物评价专家委员会，1996：67.

[6] 温贤有，陈坚文，李拥军，等.动物性食品中药物残留分布规律[J].杂草科学，2010（1）：36-38.