粉葛中淀粉含量与葛根素含量的相关性研究※

赵婧文 张建逵 魏 巍 李晓晨 李 丽 牛 蕾

（辽宁中医药大学药学院 ，辽宁 大连 116600）

粉葛为豆科植物甘葛藤（Pueraria thomsonii Benth）的干燥根，具有解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络，解酒毒等功效[1]。粉葛淀粉含量较高，粉性较强，其主要药用成分为葛根素；传统鉴定经验认为粉葛“凡粉性足者为佳”，而在市场上销售的大多为栽培药材，淀粉含量较高，此结论是否依然成立？本实验采用分光光度法与HPLC法分别测定淀粉含量与葛根素含量，探讨两者之间的相关性，为粉葛栽培药材提供质量控制依据。

1 实验材料

1.1 仪器 UV-3010紫外可见双光束扫描分光光度计（日本日立集团）；BP 211D型电子分析天平 (德国赛多利斯公司)；水浴锅（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司），包括G1314A型VWD检测器，G1311A型四元泵。AT-130型柱温箱（大连中汇达科学仪器有限公司），KQ-250型超声清洗器 (昆山超声仪器有限公司)，FW100型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司），TD6001C型电子天平（天津天马衡基仪器有限公司)。

1.2 试剂与试药 甲醇色谱纯（天津市大茂化学试剂厂）；甲醇分析纯（天津市恒兴化学试剂制造有限公司）；其它试剂均为分析纯。无水乙醇（天津市富宇精细化工有限公司）；高氯酸（天津市西青鑫源化工厂）；蒽酮（上海源叶生物科技有限公司）；浓硫酸（国药集团化学试剂有限公司）；乙酸乙酯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；可溶性淀粉（Solarbio科技有限公司）；葛根素（上海源叶生物科技有限公司，批号：YM0510YA14）

1.3 样品 在2017年9月，从不同药店购进10批不同产地的粉葛饮片，所有样品均为生饮片，未经炮制。均经辽宁中医药大学药学院张建逵副教授鉴定粉葛为豆科植物甘葛藤（Pueraria thomsonii Benth） 的干燥根。具体来源见表1。

表1 粉葛饮片样品来源

2 实验方法

2.1 粉葛淀粉含量测定

2.1.1 试液的配制 2%蒽酮试剂：精密称取1 g蒽酮，加入50 mL乙酸乙酯，超声使全部溶解，4℃避光保存备用。80%乙醇；9.2 mol/L高氯酸[2]。

2.1.2 供试品溶液的制备 精密称量0.01 g样品粉末于15 mL离心管中，加入80%乙醇溶液8 mL，80℃水浴30 min，静置或离心，沉淀后弃上清液，此步骤重复3次，后2次分别水浴10 min，残留物加入6 mL的9.2 mol/L高氯酸，快速振荡摇匀，反应5 min，静置或离心，沉淀后上清液移入100 mL容量瓶中，重复3次，用6 mL蒸馏水洗涤残渣2次，清洗液移入容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀，即得。

2.1.3 样品测定 精密量取1 mL供试品溶液于15 mL离心管中，蒸馏水补足至2 mL，空白对照试管中只加入2 mL蒸馏水。每只试管中加入0.5 mL 2%蒽酮试剂，并缓慢加入5 mL 98%的浓硫酸，迅速摇匀，于沸水浴中准确计时1 min显色，取出迅速置于冰水浴中冷却5 min，取出后室温放置5 min，于630 nm处测定吸光度值。

2.1.4 标准曲线的绘制 精密称取0.05 g淀粉于小烧杯中，加入18 mL 9.2 mol/L高氯酸，完全溶解后转移到100 mL容量瓶中，蒸馏水冲洗，移入容量瓶，定容，即为标准品溶液，待用。分别量取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL标准品溶液于15ml离心管中，用蒸馏水补充至2 mL，检测方法同“2.1.3”项下的样品测定方法，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=3821.8X+0.287，r=0.9993。结果表明，淀粉含量在0～0.25 mg/mL内具良好的线性关系。

2.1.5 方法学考察

2.1.5.1 重现性实验 精密称取S2样品粉末0.01 g，按“2.1.2”项下方法制备成供试品溶液，显色后在630 nm处测定吸光度，平行测量5次，结果见表2。测得粉葛淀粉的RSD值为0.36%，表明仪器重现性良好。

表2 重现性实验考察结果

2.1.5.2 稳定性实验 精密称取S2样品粉末0.01 g，按“2.1.2”项下方法制备成供试品溶液，分别于0、5、10、15、20、25、30 min在630 nm处测定吸光度。结果见表3。测得粉葛淀粉的RSD值为1.02%。表明此方法在30 min内稳定。

表3 稳定性实验考察结果

2.1.5.3 重复性实验 精密称取S2样品粉末5份，每份0.01 g，按“2.1.2”项下方法制备成供试品溶液，显色后在630 nm处测定吸光度，结果见表4。测得粉葛淀粉含量RSD值为2.4%，表明此方法重复性良好。

表4 精密度实验考察结果 (%)

2.1.5.4 加样回收率实验 精密称取S2样品粉末5份，每份10 mg（淀粉含量为38.7%），按“2.1.2”项下方法制备成供试品溶液，精密吸取1 mL供试品溶液（含淀粉0.0387 mg）于15 mL离心管中，并加入0.4 mL淀粉标准品溶液，蒸馏水补足至2 mL，将混合液进行显色并测定吸光度，结果见表5。测得粉葛淀粉的平均回收率为103.1%，RSD值为1.6%[3]。

表5 加样回收率测定结果

2.2 葛根素含量测定

2.2.1 色谱条件 采用Waters symmetry-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-水 （25∶75） 为流动相，检测波长为250 nm，流速为1.0 mL·min-1，柱温为25℃。在该色谱条件下，对照品溶液和供试品溶液色谱图见图1。

图1 对照品溶液(A)和供试品溶液(B)的色谱图

2.2.2 对照品溶液的制备 取葛根素对照品适量，精密称定，加30%乙醇制成每1 mL含80 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%的乙醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.2.5 标准曲线的绘制 精密称定5 mg葛根素标准品，置于5 mL容量瓶中，用30%乙醇定容，即为标准品溶液，待用。分别量取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL标准品溶液于5 mL容量瓶中，用30%乙醇定容，按“2.2.4”项下方法进行测定。以浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=37925X-83.926，r=0.99990。结果表明葛根素含量在0～0.1 mg/mL内具良好的线性关系[1]。

3 实验结果

表6 粉葛淀粉及葛根素含量测定结果 (%)

对表6中淀粉含量及葛根素含量进行相关性分析，得到回归方程为:Y=-0.002X+0.375 r=0.8019（P<0.05），因此，淀粉含量与葛根素含量呈负相关。

4 讨论

按照2015版《中国药典》的规定[1]，粉葛中葛根素含量不得少于0.30%，照此标准，上述10批药材中仅有3批合格，合格率仅为30%，因此。相关部门对该药材的质量应加强监管。

经相关性分析表明，粉葛淀粉含量与药用成分呈负相关。粉葛药材中，淀粉含量越多则有效成分越少，因此对于目前的粉葛药材，“粉性足者为佳”这一经验并不完全适用，本实验说明栽培药材淀粉含量越高，其药用成分含量就越低，两者含量关系密切。这是因为栽培药材的生长环境条件优越，淀粉作为初生代谢产物积累就较多，而葛根素作为次生代谢产物含量就较低，因此，在中药材栽培过程中，不能一味追求产量，还要考虑到人工栽培技术对药材质量的影响。可以通过控制其淀粉生成量或消耗自身淀粉，如剪秧、逆境等环境加速淀粉消耗[4]，来提高栽培粉葛药材中葛根素的含量。