聚山梨酯80对维生素K1注射液质量的影响

陈辰 顾春燕 黄臻辉

摘 要 目的：考察不同厂家聚山梨酯80对维生素K1注射液质量的影响。方法：采用气相色谱法测定聚山梨酯80中脂肪酸的含量，并考察使用不同厂家聚山梨酯80制备的维生素K1注射液的稳定性。结果：聚山梨酯80中油酸含量越高，其他脂肪酸含量越低表明其纯度越高，质量越好，制备的维生素K1注射液产品越稳定。结论：聚山梨酯80的质量是影响维生素K1注射液质量的重要因素。

关键词 聚山梨酯80 维生素K1注射液 气相色谱法 脂肪酸

中图分类号：R944.12 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2018）13-0084-03

Effect of polysorbate 80 on the quality of vitamin K1 injection

CHEN Chen*， GU Chunyan， HUANG Zhenhui**

（SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 200240， China）

ABSTRACT Objective： To evaluate the effect of polysorbate 80 on vitamin K1 injection by comparing the quality of polysorbate 80 from different manufacturers. Methods： The content of fatty acids in polysorbate 80 was determined by gas chromatography and the stability of vitamin K1 injection prepared with polysorbate 80 from different manufacturers was investigated. Results： The higher the oleic acid content in polysorbate 80， the lower the other fatty acid content， the higher is the quality of vitamin K1 injection and furthermore the prepared vitamin K1 product is more stable. Conclusion： Polysorbate 80 is an important factor affecting the quality of vitamin K1 injection.

KEY WORDS polysorbate 80； vitamin K1 injection； gas chromatography； fatty acid

藥物制剂是由活性成分和辅料组成。辅料是制剂生产过程中必不可少的重要组成部分，药用辅料不但赋予药物具体的用药形式，而且常常影响药物的稳定性、药效发挥及制剂质量，可以说没有辅料就没有制剂[1]。

聚山梨酯80（polysorbate 80）化学名聚氧乙烯20山梨醇酐单油酸酯，为淡黄色至橙黄色的黏稠液体，是由山梨醇、脂肪酸和环氧乙烷等聚合形成的高分子混合物。聚山梨酯80是一种常用的药用辅料，可作为乳化剂、增溶剂、润滑剂或稳定剂等，在注射剂中的应用极为广泛。近年来含聚山梨酯80的维生素K1注射剂等多有不良反应发生，甚至出现严重不良反应现象，越来越引起人们的重视。研究表明，聚山梨酯80是引起不良反应的主要原因之一，其安全性越来越引起人们的关注[2-4]。

由于维生素K1水溶性很弱，稳定性较差，故须在注射剂中添加聚山梨酯80作助溶剂[5]，且用量较大，占该制剂辅料用量的61%（w/w）。因此，维生素K1注射液的质量（稳定性）除了与原料本身性质有关外，还与加入的辅料如聚山梨酯80质量有关。目前我国提高了对聚山梨酯80的质量要求，现行《中国药典》2015版将聚山梨酯80作为药用辅料、增溶剂和乳化剂等，较2010版药典新增加了对脂肪酸含量的要求，并且对聚山梨酯80（供注射用）也有了明确的质量要求，从而进一步提高了注射剂中聚山梨酯80的质量[6]。本研究以制剂的稳定性为评价指标，对不同来源的聚山梨酯80经相同工艺制备的维生素K1注射液进行考察，评价聚山梨酯80质量对制剂稳定性的影响。

1 材料和方法

1.1 实验材料

聚山梨酯80（A公司，批号：20140502；B公司，批号：20141001；C公司，批号：309363C）；14%三氟化硼甲醇溶液、肉豆蔻酸甲酯、棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、硬脂酸甲酯、亚油酸甲酯、亚麻酸甲酯以及油酸甲酯对照品（Sigma-Aldrich公司）；正庚烷（国药集团化学试剂有限公司）；维生素K1（山东广通宝药业有限公司，批号：20140502）；维生素K1对照品（英国药典，批号：003041）。

1.2 实验仪器

7890A气相色谱仪、石英毛细管柱（0.25 mm×100 m，以88%氰丙基聚硅氧烷为固定液）、氢火焰离子化检测器（美国Agilent公司）；2695高效液相色谱仪、Kromasil-C18色谱柱（4.6 mm×100 mm，3.5 mm）（美国Waters公司）。

1.3 方法

1.3.1 聚山梨酯80的检测方法

按照《中国药典》2015版四部中对聚山梨酯80（供注射用）项下进行色谱分析[6]。

1.3.1.1 标准曲线

分别精密移取油酸甲酯对照品（30 mg/ml）0.5，1.5，2.5，4.0，6.0，10.0 ml、亚油酸甲酯对照品（8.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml、硬脂酸甲酯对照品（10.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.5，4.0 ml、肉豆蔻酸甲酯对照品（6.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml、棕榈油酸甲酯对照品（11.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml、棕榈酸甲酯对照品（11.0 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml和亚麻酸甲酯对照品（12.0 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml，置于各10 ml量瓶中，取样进行色谱测定。以相应脂肪酸甲酯浓度（mg/ml）为x，峰面积为y，绘制标准曲线，并以最小二乘法计算得回归方程。

1.3.1.2 精密度试验

取20141001批聚山梨酯80配制供试品溶液，连续进样6次，计算RSD。

1.3.1.3 重复性试验

取20141001批聚山梨酯80，经过甲酯化处理后进行气相色谱测定。分别处理6批，考察试验的重复性。

1.3.1.4 不同厂家聚山梨酯80的测定

分别取A公司，B公司，C公司的聚山梨酯80样品，按照《中国药典》2015年版四部[6]中对聚山梨酯80（供注射用）项下的检测方法进行检查。

1.3.2 维生素K1注射液的制备方法

将处方量的无水醋酸钠，醋酸加入适量的注射用水中，搅拌均匀，形成缓冲溶液。按顺序将处方量的聚山梨酯80，维生素K1，丙二醇于烧杯中，不断搅拌，使其乳化后加入醋酸钠溶液中，接着称取处方量的焦亚硫酸钠于上述药液中，并用注射用水将药液稀释至终体积，经微孔滤膜过滤后，灌封即得维生素K1注射液。制备的维生素K1注射液，批号为150301采用A公司的聚山梨酯80，批号为150302采用B公司的聚山梨酯80，批号为150303采用C公司的聚山梨酯80。

1.3.3 维生素K1注射液有关物质的检测方法

维生素K1注射液有关物质的检测方法按照《中国药典》2015年版二部[7]中对维生素K1注射液项下有关物质的检查方法。

1.3.4 高温影响因素试验

将样品按照《中国药典》2015年版四部中原料药物与制剂稳定性试验指导原则[6]354-356中的方法置于高温60℃条件下进行试验。

1.3.5 加速和长期稳定性试验

加速和长期稳定性试验均按《中国药典》2015年版操作[6]354-356。

2 结果

2.1 聚山梨酯80的检测结果

2.1.1 各脂肪酸标准曲线

以相应脂肪酸甲酯浓度（mg/ml）为x，峰面积为y，绘制标准曲线，并以最小二乘法计算得回归方程，结果线性均良好（表1）。

2.1.2 精密度和重复性试验

精密度试验结果油酸甲酯、亚油酸甲酯、棕榈酸甲酯峰面积的RSD值为1.1%，1.5%，0.8%，重复性试验结果油酸甲酯、亚油酸甲酯、棕榈酸甲酯峰面积的RSD分别为0.9%，1.1%，1.3%。

2.1.3 不同廠家聚山梨酯80的检测结果

不同厂家的聚山梨酯80中除脂肪酸外的其他项测定结果均无显著性差异（表2），而脂肪酸检测结果有显著性差异，根据《中国药典》2015年版四部[6]的要求判断，A公司产品的各项指标均不符合药典要求，B公司产品中的油酸和亚油酸超过了药典要求，而C公司产品的各项指标均符合药典要求，表明C公司的聚山梨酯80质量最好（表3）。

2.2 聚山梨酯80对维生素K1注射液中有关物质的影响

自制3批维生素K1注射液中有关物质的测定结果表明150301和150302批维生素K1注射液经过60 ℃存放10 d后有关物质均超过《中国药典》2015版规定的要求，而用C公司的聚山梨酯80制备的制剂同条件下有关物质虽略有增加，但仍符合药典要求（表4）。

2.3 加速和长期稳定性试验

加速和长期稳定性试验表明，使用A、B公司的聚山梨酯80制备的维生素K1注射液，不仅含量降解较快、单个杂质增加比较明显，且有关物质含量均超过了药典规定的要求；只有C公司制备的维生素K1注射液经过长达24个月存放后有关物质含量均符合《中国药典》2015版的要求（图1）。表明使用油酸含量较高的聚山梨酯80制备的维生素K1注射液的质量较稳定。

3 讨论

不同来源的聚山梨酯80对维生素K1注射液的质量有着重要的影响。其原因是聚山梨酯80中的游离脂肪酸主要来自合成原料油酸，而油酸存在于植物或动物中，不同来源油酸的纯度和价格差别很大。目前国内生产的聚山梨酯80的公司较多，产品质量包括外观性状、颜色等参差不齐，为了最大程度地攫取经济利润，部分辅料供应商会选择劣质的油酸合成聚山梨酯80，使得聚山梨酯80中含有较多的脂肪酸杂质[8-9]。因此，制备维生素K1注射液应该选择纯度高、杂质含量低的聚山梨酯80，以最大限度地保障聚山梨酯80产品的安全性，从而提高维生素K1注射液的质量，保证注射剂的安全性。本研究主要对聚山梨酯80的组成成分进行了分析，但其各成分与制剂的溶血和致敏等不良反应的关系尚有待于进一步研究阐明。

参考文献

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