清火舒脉颗粒冲剂灌胃治疗家兔颈动脉粥样硬化效果观察

陈维达，宋婷，陈泽涛

(1山东中医药大学，济南250355；2山东中医药大学附属医院)

动脉粥样硬化(AS)是指脂质沉积附着在动脉壁内膜及内膜下，使内膜粗糙、增厚，同时伴有内膜下平滑肌细胞增生，形成如粥样物质的斑块。AS常累及颈动脉、冠状动脉，引起脑卒中、冠心病，国内外学者普遍认为AS是血管内皮损伤后的一种慢性炎症性增生性疾病，炎症贯穿于AS的始终。颈动脉粥样硬化(CAS)是脑卒中和短暂性脑缺血发作的重要原因之一，具有发病率高、致残率高的特点。炎症浸润、血管活性物质合成、氧化应激反应、内皮功能损伤、微血管新生、基质金属蛋白酶过表达等在CAS的发生和发展过程中起非常重要的作用。近年来研究表明，中医药在稳定易损斑块、防治CAS方面疗效确切。丁元庆教授基于多年临床经验，将传统“火热致中”理论与血脉病理论有机结合，应用于CAS的中医病机阐述中，创造性提出“火热灼脉”是CAS斑块形成的基本病机，在此基础上进行了清火舒脉颗粒干预CAS的相关临床研究。本研究在前期研究基础上，观察了清火舒脉颗粒治疗家兔颈动脉粥样硬化的效果，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物、药品及主要材料 雄性新西兰白兔30只，体质量2.0～2.5 kg，由山东中医药大学附属医院动物实验中心提供，饲养条件为温度20～26 ℃、湿度40%～60%。清火舒脉颗粒(免煎颗粒剂型)：葛根10 g、黄芩10 g、黄连3 g、天麻6 g、丹参10 g、醋鳖甲10 g、玄参10 g、牡蛎30 g，由江阴天江药业有限公司提供，成人每日服用生药量为80.9 g，制成免煎颗粒每袋重10.5 g；根据动物与人每千克体质量剂量折算系数表、实验动物与人体表面积比例计算家兔等效用药剂量，兔换算系数为3.27，换算兔每日给药剂量(成人临床剂量的8倍)为80.9 g/70 kg×3.27×8=30.2 g/kg。实验仪器：5 mL注射器、20 mL注射器、灌胃管、普通采血管、手术剪、刀片、开口器、手术镊。主要设备：切片刀、组织摊烤片机、病理切片机、盖玻片、载玻片、光学显微镜、数码相机、全自动生化分析仪、离心机。主要试剂：TC试剂盒、TG试剂盒、LDL试剂盒、HDL试剂盒。

1.2 CAS模型制作及清火舒脉颗粒用法 30只新西兰白兔以基础饲料适应性喂养1周后随机分为对照组、模型组、实验组，每组各10只。模型组和实验组采用高脂肪餐喂养配合颈动脉空气干燥法建立CAS模型。具体操作：模型组高脂喂养1周后行颈动脉内膜空气干燥术，术后高脂喂养4周；实验组给予高脂喂养1周，然后行颈动脉内膜空气干燥术，术后高脂喂养4周，同时给予清火舒脉颗粒冲剂(30.2 g/kg)100 mL灌胃4周；对照组普通兔料喂养5周，每天150 g，饮水不限。颈动脉空气干燥法：动物术前12 h禁食，不禁水；10%水合氯醛灌肠，动物颈部消毒脱毛，暴露右侧颈部，纵向切开后钝性分离右侧颈总动脉，用动脉夹同时夹闭动脉的近心端及远心端；用皮试针头从近心端夹闭处平行于血管纵轴方向穿刺入阻断血管两端，连接内含生理盐水的注射器，置换出血管腔内血液；连接医用氮气向夹闭段颈总动脉以120 mL/min的气流进行空气干燥，时长约10 min。对照组新西兰白兔正常摄食、饮水，生长良好，活动良好，无死亡情况；模型组及实验组造模期间共死亡4只，16只兔造模成功，未发现局部感染，创口愈合良好，但精神状态较差，活动量减少，体质量增加迅速，反应略迟钝。

1.3 血脂指标检测 血清样本于第7周采取，取材前禁食禁水，无菌环境下，将兔固定于手术台上，常规皮肤消毒后在兔耳缘静脉采血，用5 mL注射器抽取血液1～1.5 mL，检测血脂指标(TC、LDL-C、HDL-C、TG)。

1.4 颈动脉组织病理观察 暴露家兔右侧颈总动脉后，在无菌条件下取出颈动脉，剥离颈动脉外膜的结缔组织，用生理盐水冲洗干净，水平展开颈动脉内膜，肉眼观察颈动脉内膜的变化，包括粥样斑块形态、分布情况。取颈动脉组织加入10%中性甲醛缓冲液，脱水，做常规石蜡包埋切片，取每只实验兔的颈动脉组织进行相同方向的切面，切片厚5 μm，HE染色，光镜下观察组织病理改变。

2 结果

2.1 各组兔血脂水平比较 模型组及实验组血清TC、TG、LDL-C水平高于对照组；实验组血清TC、TG、LDL-C水平低于模型组，HDL-C高于模型组(P均<0.05)；详见表1。

2.2 各组兔颈动脉组织病理变化 肉眼观察发现，对照组兔颈动脉柔软有弹性，动脉管腔内膜光滑完整，细胞形态规则；模型组及实验组颈动脉内膜表面僵硬，随时间延长逐步加重，且有条纹状不规则隆起。对照组镜下可见颈动脉内膜完整，未见粥样硬化斑块及泡沫细胞，内膜下平滑肌细胞排列规整(见图1A)。模型组动脉内膜表面欠光滑，增厚，细胞形态、大小差异较大，内皮细胞排列混乱不规则，同时可见大量断断续续、排列不规则的胞质淡染和充满脂质空泡的泡沫细胞沉积(见图1B)。实验组内膜表面光滑，平滑肌细胞排列比较整齐，内膜未见增厚，镜下可见少量泡沫细胞及巨噬细胞包含在斑块内部(见图1C)。

表1 各组家兔血清TC、LDL-C、HDL-C、TG水平比较

注：A为对照组；B为模型组；C为实验组

3 讨论

丁元庆教授通过对中风及CAS危险因素及病理基础的临床研究发现，“火热灼脉”是CAS斑块形成的基础病机，痰、瘀是CAS斑块形成的重要病理产物，贯穿于CAS发生发展过程的始终[1]。同时指出，“火热邪气”具有阶段性，常挟痰挟瘀，导致本病呈现虚实夹杂的病机特点，使久病不复、缠绵难愈。故治疗应以清热泻火与活血化痰养阴配伍，采用清热泻火法稳定AS易损斑块，切合其病机关键。丁元庆教授在治疗CAS火热证的长期临床实践中总结出清火舒脉颗粒这一经验方，具体药物为葛根、黄芩、黄连、天麻、丹参、牡蛎、玄参、醋鳖甲。方中葛根辛凉可散阳明怫郁之火，亦能活血、生津；阳有余，以苦降之，黄连、黄芩相须而为使药，重在清上中二焦之痰热实火，苦寒降泄，正合阳明降浊之性，梳理中焦气机，恢复脏腑、三焦气化，则火热渐去，中焦清空，君火自降；天麻疏利肝气，丹参入肝行血，二者同用共除肝经火邪，具有气血双解之功；牡蛎软坚散结，可清除痰瘀结块之标；玄参、牡蛎、鳖甲有清热养阴之效，且牡蛎、鳖甲又能软坚散结，故可消退CAS斑块。

脂质过氧化是AS的重要机制，葛根、黄连、黄芩、丹参均有清除自由基、抗过氧化作用，故可有效延缓甚至逆转AS进程。研究[2，3]发现葛根提取物葛根黄酮、葛根素对自由基具有很强的清除能力，能改善高脂膳食引起的机体氧化应激，调节机体氧化平衡状态。黄连素可调节高脂血症模型小鼠的脂质代谢及其导致的AS与肝损伤，同时具有一定的抵抗脂质过氧化作用[4]。黄芩素、黄芩苷是黄芩中有效的抗氧化剂，对多种自由基有很好的清除作用[5～9]。酚酸类成分是丹参中的主要药效物质，研究[10]发现丹酚酸A可通过抗氧化作用从而抑制血管内皮细胞损伤。

药理研究发现葛根素、丹参、天麻具有抗血小板聚集、防止血栓、改善微循环的功效，对CAS有较好治疗作用。研究[11～13]表明丹酚酸B通过拮抗 P2Y12和抑制磷酸二酯酶(PDE)发挥抗血小板作用。丁诚实等[14]的实验表明PGEZ-l具有抗凝、抗栓作用，提示天麻具有预防血栓作用。现代药理研究[15～18]证实，天麻、丹参、葛根具有扩张脑血管，改善脑供血，促进脑代谢的作用，故能有效改善临床症状。现已证实葛根对脑缺氧小鼠具有明显改善作用[19，20]。黄芩、天麻、丹参可通过抑制兴奋性递质释放，或直接增强脑组织抗缺氧能力，从而达到改善脑代谢、保护脑组织、增强记忆力、改善患者生活质量的作用。葛根、黄连、丹参还能有效抑制内源性胆固醇的合成，降低TG、TC水平。

本研究观察了清火舒脉颗粒治疗家兔CAS的效果，结果显示，模型组及实验组血清TC、TG、LDL-C水平高于对照组，且实验组血清TC、TG、LDL-C水平低于模型组，HDL-C高于模型组，说明清火舒脉颗粒能降低家兔血清TC、TG、LDL-C水平。实验结束后，对家兔颈动脉组织进行病理切片及HE染色，可见对照组颈动脉内膜表面光滑完整，未见增厚，未见粥样硬化斑块及泡沫细胞，内膜下平滑肌细胞排列规整；而模型组内膜表面欠光滑，明显增厚，伴有断断续续、排列不规则的大量泡沫细胞沉积，大量平滑肌细胞迁移内膜，内皮细胞排列混乱不规则、不连续，细胞大小、形态差异大；实验组内膜表面完整光滑，未见增厚，平滑肌细胞排列较规范整齐，斑块内含有少量的巨噬细胞、泡沫细胞。上述结果表明清火舒脉颗粒可以延迟CAS家兔斑块形成、稳定斑块，从而达到治疗CAS的作用。

结合上述研究结果，我们认为清火舒脉颗粒能降低CAS家兔血清TC、TG、LDL-C水平，稳定CAS斑块，延缓CAS斑块形成，对治疗CAS具有积极作用。