曲霉菌感染对雏鸡血液生理生化指标的影响

李新正，肖曙光，黄安群，陈理盾，宋玉萍，张桂枝，黄炎坤

(河南牧业经济学院 动物科技学院，河南 郑州 450046)

禽曲霉菌病是一种严重危害家禽生产的真菌性疾病[1]，近年来因免疫抑制性疾病频发以及临床中大量使用抗生素引起曲霉菌感染频发，导致家禽死亡率增加。同时发病后机体产生霉菌毒素，引起免疫器官萎缩，免疫细胞数量减少，使机体抵抗体力下降，产生免疫失败[2]，易感其他疾病，且引起肝脏、肾脏机能受损，影响生长发育，降低养殖效益。曲霉菌病主要病原有烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉等[3-4]。鸡感染曲霉菌病后，因霉菌的增殖产生大量毒素，如黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮毒素、呕吐毒素、T-2毒素及付马毒素等[5]，这些毒素引起肝实质细胞坏死，变性，胆管上皮细胞及纤维细胞增生，形成再生结节和脂肪肝，剖检可见肝脏肿胀，黄染，呈斑驳状，质脆易碎。并能引起肾脏肿胀，尿酸盐沉积等，同时肝功能和肾功能出现异常，如血液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶活性降低；球蛋白、白蛋白、非蛋白氮、肝糖原降低，尿素尿酸含量增加。因此研究曲霉菌感染对血液理化指标影响，对判断该病感染程度和该病的防控具有十分重要意义。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 14日龄健康海兰褐蛋公鸡80只，由郑州某种鸡场提供；新城疫低毒力活疫苗(IV系)购自哈药集团生物疫苗有限有限公司(生产批号201659，生产日期：20160921)；曲霉菌孢子，由本实验室从病禽体内分离培养并鉴定为烟曲霉菌，培养制成孢子悬液。

1.1.2 仪器设备 Monarch全自动生化分析仪(美国实验仪器公司)，Coulter JT-IR血细胞分析仪。

1.2 试验方法

1.2.1 烟曲霉菌孢子悬液制备 用金属接种环挑取烟曲霉菌接种于沙氏琼脂培养基上，37 ℃培养3 d，30 ℃培养3 d，用10 mL含有0.1%吐温的PBS液冲洗琼脂表面并收集孢子悬液，用8层无菌纱布过滤，将过滤后的悬液用含0.1%吐温的PBS液清洗2次，然后转入离心管中，3 500 r/min离心15 min，去除上清液，在显微镜下用血细胞计数板计数，调整孢子悬液浓度为1.0×108/mL。

1.2.2 试验分组 将14日龄80只海兰褐商品代公雏鸡，随机分成2组，试验组从14日龄开始用制好的霉菌孢子悬液嗉囊注射1 mL，1次/d，连续注射3 d，接种后正常饲养管理，每日观察精神状态、采食、粪便和有无呼吸困难等症状并进行记录。对照组不接种。两组的饲养管理措施和条件、卫生防疫措施均相同。

1.2.3 饲养管理与免疫 采用网上平养方式，前三周舍温控制在32～35 ℃，鸡舍内湿度60%～65%。鸡自由采食，自由饮水，正常免疫，对照组和试验组鸡1日龄注射马立克氏疫苗，7日龄新城疫疫苗点眼滴鼻，14日龄传染性法氏囊疫苗饮水。按鸡场的管理程序进行饲养管理。

1.2.4 称重与采血 21日龄从试验组选择典型临床症状鸡和对照组各抽取10只鸡，空腹称重，心脏采血5 mL置于含抗凝剂采血管和不含抗凝剂采血管中。凝血管待凝血后，3 000 r/min离心10 min，取上清液于-20 ℃保存，抗凝血放入4 ℃冰箱中待检。

1.2.5 测定项目 血液生理指标项目：红细胞总数(RBC)、血红蛋白(HGB)、白细胞总数(WBC)、中间细胞数量(MID)、淋巴细胞数量(LYM)、粒细胞数量(GRA)、淋巴细胞比率(LR)、中间细胞比率(MXD)、单核细胞比率和血小板数量(PLT)。

血液生化指标项目：总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)、直接胆红素(DB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、谷氨酰转肽酶(r-GT)和尿酸(UA)。

1.2.6 数据处理 数据用SPSS15.0软件进行t检验，数据均采用Mean±SD表示。

2 结果与分析

2.1 曲霉菌感染对鸡只生长速度的影响

由表1可知，两组间差异极显著(P<0.01)，试验组比对照组鸡体重减少18%，说明曲霉菌感染影响鸡生长发育。

表1 曲霉菌感染对鸡只生长速度的影响Table 1 The influence of aspergillus infection on chicken growth

注:肩标小写字母表示差异显著(P<0.05)，大写字母表示差异极显著(P<0.01)。下同。
Note: Values with different lowercase superscripts show significant difference, different capital superscripts show extremely significant difference.The same below.

2.2 曲霉菌感染对血液生理指标的影响

由表2可知，试验组白细胞总数、淋巴细胞数明显高于对照组，且差异显著(P<0.05)；红细胞、血红蛋白浓度明显低于对照组且差异显著(P<0.05)；试验组淋巴细胞比率、中间细胞比率、中间细胞、粒细胞、血小板含量明显高于对照组，且差异极显著(P<0.01)；而血红蛋白含量明显低于对照组，且差异极显著(P<0.01)。

表2 曲霉菌感染对血液生理指标的影响Table 2 The influence of aspergillus infection on blood physiological indexes

2.3 曲霉菌感染对血液生化指标指数的影响

由表3可知，试验组谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、氨酰转肽酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素及尿酸指标均高于对照组，差异显著(P<0.05)；而血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白数量低于对照组且差异显著(P<0.05)。

表3 曲霉菌感染对血液生化指标指数的影响Table 3 The influence of aspergillus infection on blood biochemical indexes

3 讨 论

曲霉菌感染雏鸡，引起急性肺水肿且产生烟曲霉毒素，使体温升高，采食量下降，精神委顿、嗜睡，呼吸困难，拉稀等症状[6]，除导致死亡率增高外，严重影响到雏鸡生长发育。试验组体重比对照组低18%，且差异显著，说明曲霉菌感染，直接影响雏鸡生长发育。

曲霉菌感染可引起发热，采食量减少，羽毛松乱，拉稀，引起贫血[7]。试验中试验组红细胞、血红蛋白明显低于对照组，说明曲霉菌感染引起贫血，这与试验中雏鸡感染曲霉菌体重差异相一致。

肝脏是家禽最大的腺体，是最重要的消化器官和机体新陈代谢的枢纽，肝脏的生理功能包括解毒功能、代谢功能、造血功能、分泌功能和免疫功能等[8]，实验表明，曲霉菌感染引起雏鸡血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、氨酰转肽酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素浓度增高，总蛋白、球蛋白、白蛋白明显降低，说明曲霉菌感染可引起肝脏损伤和坏死，这与临床曲霉病病例剖检肝脏肿胀、出血、颜色发黄相一致。

肾脏是动物的主要泌尿器官和排泄器官[9]，曲霉菌感染可引起肾脏肿胀，尿酸盐在肾脏排泄受阻，形成花斑肾，其中血清中尿酸含量是反映肾功能的主要指标[6]。试验表明试验组尿酸明显增高，说明曲霉菌感染对肾脏损伤严重。