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氧化石墨烯萃取花旗参茶饮料中的拟除虫菊酯类农药残留

2018-07-19李绪文杨艳萍刘佳慧金永日时晓磊

吉林大学学报(理学版) 2018年4期
关键词:除虫菊酯类菊酯

张 璐, 李绪文, 王 博, 杨艳萍, 刘佳慧, 金永日, 时晓磊

(1. 吉林大学 食品科学与工程学院, 长春 130062; 2. 吉林大学 化学学院, 长春 130012)

参类饮料是一种功能性饮料, 具有缓解体力疲劳、增强免疫力等功效. 其原材料为参类植物的根茎叶和果实[1], 工艺流程一般为浸提、调配、精滤、杀菌等. 为防治参类在种植过程中病虫害的发生, 提高产量, 一般在参类植物生长过程中大量施用农药, 其中低毒、广谱、低残留的拟除虫菊酯类农药[2-4]在参类植物的种植过程中广泛使用. 由于拟除虫菊酯类农药在参类和土壤中有一定的富集[5-7], 因此, 饮料中农药残留的测定是保证参类饮料质量的主要指标. 目前, 拟除虫菊酯类农药残留的测定方法主要有气相色谱法和液相色谱法. 气相色谱法检测灵敏度高, 但不适于具有热不稳定的农药残留测定; 由于液相色谱法的检测仪器存在最低检出限, 因此需对液体样品中的拟除虫菊酯类农药预先富集. 液体样品中拟除虫菊酯类农药残留富集的前处理方法有液-液提取法、高效体积排阻色谱法、固相萃取柱纯化法、基质固相分散法和固相萃取法等. Macedo等[8]采用基质固相分散萃取(MSPD)法进行样品的前处理, 测定了牛奶中的拟除虫菊酯类农药残留; 高晓昇等[9]采用改进的QuEChERS法进行样品前处理, 分析了牛奶中拟除虫菊酯类农药残留; 刘国平等[10]以凝胶渗透色谱净化系统(GPC)作为前处理方法, 测定了食品中的7种拟除虫菊酯类农药残留. 上述前处理方法存在需大量有机试剂以及操作繁琐等问题, 工作量巨大且易导致污染.

氧化石墨烯[11-12]是将含氧基团修饰到石墨烯表面后制得的一种吸附材料, 具有与石墨烯相似的单原子二维结构, 其表面还有大量的活性官能团[13], 如羧基、羰基、环氧基和羟基等, 这些活性官能团为吸附过程提供了更多活性位点, 因此氧化石墨烯是一种良好的吸附剂[14]. 由于其具有良好的化学稳定性、热稳定性和高比表面积等特性, 因此氧化石墨烯广泛应用于对有机小分子、金属离子与生物大分子的吸附[15-18]. 本文采用氧化石墨烯为吸附剂, 改良传统固相萃取中操作复杂、大量使用有机试剂等问题, 并通过正交实验和单因素实验, 对萃取条件进行优化, 建立了一种液体样品前处理的新方法, 为液体样品中微量农药残留的萃取和测定提供一种新思路.

1 实 验

1.1 仪器和试剂

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司); YDO-OIR型电子天平、ZF-20D型暗箱式紫外分析仪和RE-201C型旋转蒸发仪(巩义市英峪予华仪器厂).

拟除虫菊酯类农药标准品均购于美国Sigma公司, 包括氟氯氰菊酯、七氟菊酯、氯戊菊酯、氯菊酯和联苯菊酯. 甲醇、乙腈均为色谱纯, 购于美国Sigma公司; 丙酮、氯仿、环己烷均为分析纯, 购于北京化工厂; 纯净水购于某食品公司; 花旗参茶饮料购于长春市某超市. 空白某品牌花旗参茶饮料样品(标准品)为未检出拟除虫菊酯类农药色谱峰的样品.

1.2 色谱条件

色谱柱: ZORBAX SB-C18型(5 μm, 4.6 mm×250 mm); 流动相:V(乙腈)∶V(水)=7∶3; 检测波长220 nm; 流速1 mL/min; 进样量10 μL. 5种拟除虫菊酯标准品和样品的色谱如图1所示.

1,2. 氟氯氰菊酯; 3. 七氟菊酯; 4. 氯戊菊酯; 5,6. 氯菊酯; 7. 联苯菊酯.图1 标准品与样品的色谱Fig.1 Chromatograms of standards and samples

1.3 标准溶液配制

准确称取一定质量的氟氯氰菊酯、七氟菊酯、氯戊菊酯、氯菊酯和联苯菊酯农药标准品, 用色谱级乙腈稀释, 配制成终质量浓度为2.000 mg/mL的溶液, 4 ℃备用. 在建立标准曲线的过程中, 将2.000 mg/mL的溶液用色谱级乙腈稀释, 配制质量浓度为0.008,0.040,0.200,1.000,2.000 mg/mL的溶液.

1.4 样品的制备

将一定体积的加标花旗参茶饮料和一定量的氧化石墨烯(南京先丰纳米材料科技有限公司)置于50 mL离心管中, 混合均匀后置于摇床上振荡一定时间后离心, 用洗脱剂超声洗脱; 超声结束后, 再次离心, 取上清液, 先用氮气吹干仪吹干, 再用色谱级甲醇定容至200 μL, 经0.4 μm微孔滤膜过滤, 待测.

2 结果与讨论

2.1 回归方程的建立

分别取1.3中的标准品溶液各10.0 μL注入高效液相色谱仪(HPLC)中, 以峰面积积分值(y)为纵坐标, 5种拟除虫菊酯类农药混合标准品的进样质量浓度(x, mg/mL)为横坐标, 绘制标准曲线, 得到标准曲线方程. 氟氯氰菊酯的标准曲线方程为

y=41 635x-199.63,r=0.999 9;

七氟菊酯的标准曲线方程为

y=29 339x-34.20,r=0.999 9;

氯戊菊酯的标准曲线方程为

y=38 245x-217.86,r=0.999 9;

氯菊酯的标准曲线方程为

y=46 441x-182.47,r=0.999 9;

联苯菊酯的标准曲线方程为

y=46 616x+572.16,r=0.999 0.

2.2 单因素实验

2.2.1 洗脱剂的优化 用20 mg氧化石墨烯萃取25 mL花旗参茶饮料中的拟除虫菊酯类农药残留, 萃取时间设为20 min. 萃取结束后, 分别选择2 mL的纯溶剂甲醇、丙酮、乙腈、环己烷和混合溶剂V(丙酮)∶V(环己烷)=1为洗脱剂, 超声辅助洗脱拟除虫菊酯类农药, 结果如图2所示. 由图2可见: 甲醇对氧化石墨烯吸附的5种拟除虫菊酯类农药的洗脱效果最差; 与环己烷相比, 乙腈对氟氯氰菊酯、氯戊菊酯和氯菊酯的洗脱效果好, 对七氟菊酯和联苯菊酯的洗脱效果差; 与纯溶剂丙酮和环己烷相比, 混合溶剂V(丙酮)∶V(环己烷)=1对5种拟除虫菊酯类农药的洗脱效果较好. 综上可见,V(丙酮)∶V(环己烷)=1的洗脱效果最好, 即5种拟除虫菊酯类农药的回收率最高, 因此将V(丙酮)∶V(环己烷)=1作为洗脱剂.

2.2.2 洗脱体积的优化 以V(丙酮)∶V(环己烷)=1为洗脱剂, 其他条件不变, 分别选择2,3,5,8,10 mL洗脱剂超声辅助洗脱, 结果如图3所示. 由图3可见, 当洗脱体积为8 mL时, 洗脱效果最优, 此时5种拟除虫菊酯类农药的回收率最高, 因此将洗脱剂的体积定为8 mL.

a. 氟氯氰菊酯; b. 七氟菊酯; c. 氯戊菊酯; d. 氯菊酯; e. 联苯菊酯.图2 不同洗脱剂对5种拟除虫菊酯类农药残留提取回收率的影响Fig.2 Effect of different eluents on extraction recovery rate of five pyrethriod pesticide residues

a. 氟氯氰菊酯; b. 七氟菊酯; c. 氯戊菊酯; d. 氯菊酯; e. 联苯菊酯.图3 不同洗脱剂体积对5种拟除虫菊酯类农药残留提取回收率的影响Fig.3 Effect of different eluent volumes on extraction recovery rate of five pyrethriod pesticide residues

2.2.3 氧化石墨烯用量的优化 以V(丙酮)∶V(环己烷)=1为洗脱剂, 洗脱体积为8 mL, 其他条件不变, 分别用2,5,10,15,20 mg氧化石墨烯进行萃取, 考察氧化石墨烯用量对回收率的影响, 结果如图4所示. 由图4可见, 在2~20 mg内, 随着氧化石墨烯用量的增加, 5种拟除虫菊酯类农药的吸附效果降低. 主要原因为氧化石墨烯为单层氧化石墨烯粉末, 密度小, 加入的石墨烯质量越大, 越易对已洗脱并溶于洗脱剂中的拟除虫菊酯类农药进行二次吸附, 使其吸附效果变差, 导致回收率降低. 因此选择石墨烯的用量为2 mg.

2.2.4 萃取时间的优化 采用2 mg氧化石墨烯萃取25 mL花旗参茶饮料中的拟除虫菊酯类农药, 以V(丙酮)∶V(环己烷)=1为洗脱剂, 洗脱体积为8 mL, 选择萃取时间分别为10,20,30,40,50 min, 结果如图5所示. 由图5可见, 氧化石墨烯对5种拟除虫菊酯类农药的吸附效果随萃取时间的增加而降低. 当萃取时间为10~20 min时, 随着萃取时间的增加, 氧化石墨烯对饮料中氯戊菊酯和氯菊酯的吸附效果略有增加, 对氟氯氰菊酯、七氟菊酯和联苯菊酯的吸附效果略有降低; 当萃取时间为20~50 min时, 5种拟除虫菊酯的回收率均下降. 这是由于花旗参茶饮料中含有大量的葡萄糖等物质, 氧化石墨烯的吸附没有选择性, 随着萃取时间的增加, 氧化石墨烯会对其他物质进行吸附, 影响了其对拟除虫菊酯类农药的吸附, 导致5种拟除虫菊酯的回收率下降. 因此选择萃取时间为20 min.

a. 氟氯氰菊酯; b. 七氟菊酯; c. 氯戊菊酯; d. 氯菊酯; e. 联苯菊酯.图4 氧化石墨烯用量对5种拟除虫菊酯类农药残留提取回收率的影响Fig.4 Effect of amount of oxide graphene on extraction recovery rate of five pyrethriod pesticide residues

a. 氟氯氰菊酯; b. 七氟菊酯; c. 氯戊菊酯; d. 氯菊酯; e. 联苯菊酯.图5 萃取时间对5种拟除虫菊酯类农药残留提取回收率的影响Fig.5 Effect of extraction time on extraction recovery rate of five pyrethriod pesticide residues

2.3 正交实验

2.3.1 正交实验设计 采用正交实验研究石墨烯用量(A)、洗脱剂体积(B)、洗脱剂(C)和吸附时间(D)对5种拟除虫菊酯类农药残留洗脱效果的影响. 实验共设上述4个因素, 每个因素设3个水平, 选取L9(34)正交表进行正交实验, 实验结果列于表1, 其极差分析结果列于表2, 方差分析结果列于表3.

2.3.2 正交实验结果分析 由表1~表3可见:

1) 氟氯氰菊酯的回收率受氧化石墨烯用量影响最大, 洗脱剂种类和洗脱剂体积次之, 受吸附时间影响最小, 即A>C>B>D, 由R值可知最优水平为A1B2C2D3; 氧化石墨烯用量对氟氯氰菊酯回收率的影响极其显著, 洗脱剂对其影响显著, 洗脱剂和吸附时间对其影响不显著.

2) 七氟菊酯的回收率受洗脱剂体积影响最大, 石墨烯用量和洗脱剂种类次之, 受吸附时间影响最小, 即C>A>B>D, 由R值可知最优水平为A1B3C2D2; 洗脱剂对七氟菊酯回收率的影响显著, 氧化石墨烯用量、洗脱剂体积和吸附时间对七氟菊酯回收率的影响不显著.

3) 氯戊菊酯的回收率受氧化石墨烯用量影响最大, 洗脱剂种类和洗脱剂体积次之, 受吸附时间影响最小, 即A>C>B>D, 由R值可知最优水平为A1B3C2D2; 氧化石墨烯用量对氯戊菊酯回收率的影响极其显著, 洗脱剂对其影响显著, 洗脱剂体积和吸附时间对其影响不显著.

4) 氯菊酯的回收率受氧化石墨烯用量影响最大, 洗脱剂种类和洗脱剂体积次之, 受吸附时间影响最小, 即A>C>B>D, 由R值可知最优水平为A1B3C2D3; 氧化石墨烯用量和洗脱剂对氯菊酯回收率的影响极其显著, 洗脱剂体积对其影响显著, 吸附时间对其影响不显著.

5) 联苯菊酯的回收率受氧化石墨烯用量影响最大, 洗脱剂种类和洗脱剂体积次之, 受吸附时间影响最小, 即A>C>B>D, 由R值可知最优水平为A1B3C2D3; 氧化石墨烯用量对联苯菊酯回收率的影响极其显著, 洗脱剂对其影响显著, 洗脱剂和吸附时间对其影响不显著.

表1 正交实验结果

表2 5种拟除虫菊酯类农药残留回收率的极差分析†

†k1,k2,k3为各水平的平均值.

表3 5种拟除虫菊酯类农药残留回收率的方差分析†

† **表示影响极其显著; *表示影响显著; 未标志表示影响不显著.

综上, 本文以氧化石墨烯材料为固相萃取的吸附剂, 研究了其对5种拟除虫菊酯类农药的萃取性能, 建立了一种液体样品前处理方法. 通过对影响固相萃取实验参数(氧化石墨烯用量、洗脱剂、洗脱剂体积和萃取时间等)的考察, 得到了最优萃取条件. 在最优萃取条件下, 加标回收率为65.93%~105.17%, 回收率(RSD)为0.66%~1.90%. 实验结果表明, 该方法简单、快速、高效, 可用于其他液体样品中拟除虫菊酯类农药残留的富集和检测.

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