表皮生长因子受体、人表皮生长因子受体-2在骨肉瘤组织中的表达及其临床价值

徐宏辉，岳　煜，宋相建

(郑州市骨科医院小儿骨科,河南 郑州 450001)

骨肉瘤多发生在青少年人群，目前无有效根治方法，化疗是治疗骨肉瘤的主要措施，但因化疗时间较长，容易出现转移及化疗抵抗，预后较差，5 a生存率不足30%[1]。临床研究认为通过骨肉瘤分子标志物检测能显著提高预后，指导临床开展靶向治疗[2]。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor ,EGFR)广泛参与肿瘤的发生、转移，促使细胞恶变。人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)是一种基因蛋白，同样广泛参与肿瘤的发展。本文选取我院2016年1月至2017年1月收治的骨肉瘤患者，应用免疫组化技术检测EGFR、HER-2表达情况，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料入组我院2016年1月至2017年1月收治的50例骨肉瘤患者作为观察组，其中男37例，女13例；年龄18～63(25.47±1.47)岁；病程15～21(18.59±1.47)a；病理类型：低级别骨肉瘤10例，普通骨肉瘤40例。另选48例癌旁正常骨组织作为对照组，其中男31例，女17例；年龄19～62(25.47±1.69)岁；病程15～20(17.59±1.54)a。2组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：1)知情同意；2)病情稳定。排除标准：1)合并其他骨类疾病；2)凝血功能障碍；3)伴有血液感染性疾病。

1.2方法所有患者接受病理活检，获得组织接受质量分数4%的中性多聚甲醛固定，石蜡包埋，连续切片后进行脱水处理。磷酸盐缓冲液冲洗，滴加EGFR、HER-2一抗，置于4 ℃恒温环境中，过夜处理，而后再次接受冲洗，滴加二抗，37 ℃恒温下孵育20 min，磷酸盐缓冲液冲洗，DAB显色，自来水冲洗，复染，脱水透明，封存。本文所使用测试盒及试剂均购自上海纪宁实业有限公司。为保证检测的正确性，需对同一患者的活检组织进行2次检查。

1.3结果判断EGFR、HER-2阳性表达位置：前者表达于细胞膜或细胞质，后者表达于细胞膜。阳性判断标准：信号呈现淡黄色或棕褐色。结果判断使用定量计分法：阳性肿瘤细胞÷总细胞数×100%。染色强度定量计分标准：细胞呈现弱着色，除低倍视野不清晰外阳性细胞清晰可见，此为1分；细胞呈现中度着色，应用40倍视野可清晰发生细胞，此为2分；细胞强着色，40倍视野下清晰可见，3分。统计结束后，按照阳性细胞百分比积分：≤5%计为0分；6%～18%计为1分；19%～45%计为2分；≥46%计为3分。两者所得积分相乘为总分，表达标准如下：0分为不表达；1～2分为弱表达；3～6分为中度表达；7～9分为强表达。阴性：不表达+弱表达；阳性：中度表达+强表达。

2　结果

2.1不同骨组织中EGFR表达情况比较观察组骨肉瘤组织中EGFR阳性表达率为70.00%，而对照组癌旁正常骨组织未见EGFR表达，阳性表达率为 0.00%，差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

2.2不同骨组织中HER-2表达情况比较观察组骨肉瘤组织中HER-2阳性表达率为22.92%，高于对照组癌旁正常骨组织中的0.00%，差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

3　讨论

骨肉瘤多发生在间叶组织，其主要特点是梭形肿瘤细胞产生的骨样性基质。该病主要发生在青少年群体，且病灶部位集中在股骨远端、肱骨近端，临床症状为疼痛、肿胀、局部酥麻、疼痛，少部分患者合并病理性骨折。有研究[3]认为，骨肉瘤的形成、生长与生长因子有密切关系。不同的生长因子对不同阶段的骨肉瘤形成起作用，且相互之间有较好的协同作用。不同的肿瘤组织受体蛋白或可预示临床分期。EGFR、HER-2在肿瘤发生、发展过程中起到至关重要的作用，两者在与相应的配体结合后，能快速形成同源二聚体，发生自磷酸化[4]，激活细胞内的信号传导通路，调解细胞增殖及凋亡。有研究[5]认为，约54%的肿瘤发生与EGFR、HER-2有关。其中EGFR是原癌基因表达产物，与肿瘤细胞增殖、分化密切相关。EGFR在结直肠、肺癌、乳腺癌、骨肉瘤组织中高表达。HER-2与肿瘤患者预后情况有关，HER-2高表达的患者总生存时间及疾病无进展生存时间较短，大部分肿瘤患者负荷较大，淋巴结转移率较高，组织学分级较差，肿瘤增殖指数较高[6]。HER-2能通过激活信号通路使肿瘤细胞增殖活性增高，凋亡受体得到抑制，从而使肿瘤细胞获得较强的生长优势。HER-2还可调控细胞生长分化，影响正常细胞运动及黏附能力，促使肿瘤细胞发生转移。HER-2表达可促进基质金属蛋白酶分泌，降解细胞外基质，增强肿瘤细胞的浸润能力，诱导血管生成及血管植入，往往预示患者预后不佳。俞华等[7]研究认为，结直肠癌患者EGFR阳性表达率明显高于正常人，提示EGFR与结直肠癌恶性程度有关。目前，靶向药物是肿瘤治疗领域的研究热点，分子靶向药物多集中于上皮来源的肿瘤组织，合理选择杀伤细胞治疗药物，能提高肿瘤治疗效果。靶向药物与传统化疗药物相比，具有较高的特异性和较轻的不良反应。EGFR、HER-2可成为治疗骨肉瘤的新靶点[8]。

图1　骨肉瘤组织中EGFR(A)和HER-2(B)的阳性表达情况

本文结果显示，观察组EGFR、HER-2阳性率较高，而对照组未见EGFR、HER-2表达，提示EGFR可作为肿瘤恶性程度判断指标，HER-2可作为预后判断指标。潘东升等[9]认为，人体肿瘤的癌基因异常变化影响肿瘤发生、发展，癌基因的扩增及蛋白产物异常表达能作为人体肿瘤诊断及治疗的重要依据。而且EGFR表达越高，预示HER-2表达可能性越高。但本文研究样本量较少，未涉及EGFR、HER-2相关性，这尚需进一步研究。

综上所述，骨肉瘤组织中EGFR、HER-2表达较高，与骨肉瘤患者的病情恶化程度及疾病分期有关，可作为诊断骨肉瘤的重要指标。