乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平与肠道屏障功能损害的关系分析

周文浩，蒋晓忠，王昌松，黄斌

乙型肝炎是乙型肝炎病毒感染导致的肝脏炎性病变。随着乙型肝炎病情的发展，部分患者肝脏逐渐发生纤维化致使肝脏变形，病情发展为肝硬化，出现腹水、感染、肝性脑病、消化道出血和肝癌等并发症[1]。胰岛素样生长因子Ⅰ（insulin-like growth factorsⅠ，IGF-Ⅰ）是一种单链多态，主要由肝细胞分泌合成，肝脏功能病变可直接影响血清IGF-Ⅰ水平变化。近年来，研究主要集中于IGF-Ⅰ在子宫肌瘤、宫颈癌、胃癌、结直肠癌等病变中的表达及临床意义[2-4]，也有部分动物实验证实IGF-Ⅰ对多种细胞因子具有调节作用[5，6]，关于IGF-Ⅰ对肠道屏障功能的临床研究较少，因此本研究检测了107例乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-1水平，分析其与肠道屏障功能损害的关系，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 病例来源 2015年1月～2017年1月我院收住的乙型肝炎肝硬化患者107例，男73例，女34例；年龄25～69岁，平均年龄（47.1±8.4）岁。符合《慢性乙型肝炎防治指南》的诊断标准[7]，其中Child-Pugh A级35例，B级42例，C级30例。排除标准:（1）合并有严重心、肺、肾等器官疾病；（2）合并有恶性肿瘤；（3）合并自身免疫性疾病。另选同期在我院体检的健康志愿者40例，男26例，女14例；年龄23～70岁，平均年龄（46.5±8.2）岁。受试者对本研究知情并签署知情同意书。本研究经我院医学伦理委员会审核通过。

1.2 血清检测 所有受检者清晨抽取空腹脉血9 ml，3000 r/m离心10 min，将分离血清置入-20℃冰箱保存。采用酶联免疫吸附法检测血清IGF-Ⅰ水平（上海森雄科技实业有限公司），操作步骤严格按照试剂盒说明书进行；采用化学比色法检测血清二胺氧化酶（damine oxidase，DAO）；采用改良酶学分光光度法检测血清D-乳酸；采用显色基质鲎实验法检测血清内毒素。

1.3 肠道屏障功能检测 清晨，嘱患者冲服乳果糖口服溶液（荷兰Abbott Healthcare Products B.V.，批准文号：H20120387）15 ml，收集6 h尿液，记录总量。取尿液20 ml，置入-20℃冰箱保存。采用高压液相色谱分析法检测尿液乳果糖/甘露醇（lactulose/mannitol，L/M）排出比。

1.4 统计学方法 应用SPSS 19.0统计学软件对研究数据进行处理和分析，计数资料以率（%）表示，采用 x2检验，计量资料以（±s）表示，组间 IGF-Ⅰ、DAO、D-乳酸、内毒素、L/M比值的比较采用t检验，采用Pearson相关分析，以P＜0.05为有显著性统计学差异。

2 结果

2.1 不同Child-Pugh分级肝硬化患者与健康人血清IGF-Ⅰ水平比较 肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平显著低于健康人（P＜0.05）；Child-Pugh A级患者血清IGF-Ⅰ水平显著高于B级或C级（t=4.09，t=7.49，P＜0.05），Child-Pugh B级血清IGF-Ⅰ水平显著高于 C 级（t=4.33，P＜0.05，表 1）。

2.2 不同Child-Pugh分级肝硬化患者与健康人肠道屏障功能比较 肝硬化患者血清DAO、D-乳酸、内毒素、L/M比值水平显著高于健康人（P＜0.05）；Child-Pugh A级患者血清DAO、D-乳酸、内毒素、L/M比值水平显著低于B级或C级（t=6.97，t=5.43，t=8.74，t=7.25 或 t=11.80，t=8.81，t=13.02，t=11.49，P＜0.05））；Child-Pugh B 级患者血清 DAO、D- 乳酸、内毒素、L/M比值水平显著低于Child-Pugh C级（t=5.32，t=4.34，t=8.38，t=5.15，P＜0.05，表 2）。

表1 肝硬化患者与健康人血清IGF-Ⅰ水平（±s）比较

表1 肝硬化患者与健康人血清IGF-Ⅰ水平（±s）比较

与健康人比，①P＜0.05；与B级比，②P＜0.05；与A级比，③P＜0.05

例数 IGF-Ⅰ（ng/ml）肝硬化 Child-Pugh A级 35 180.3±33.4①②B 级 42 152.4±26.5①③C 级 30 126.9±21.8①②健康人 40 217.1±40.2

表2 肝硬化患者与健康人肠道屏障功能指标（±s）比较

表2 肝硬化患者与健康人肠道屏障功能指标（±s）比较

与健康人比，①P＜0.05；与B级比，②P＜0.05；与A级比，③P＜0.05

例数 DAO（U/ml） D-乳酸（μg/ml） 内毒素（EU/ml） L/M比值（%）Child A级 35 3.3±0.7①② 9.0±1.6①② 0.6±0.1①② 9.2±1.7①②B级 42 4.6±0.9①③ 11.2±1.9①③ 0.8±0.1①③ 12.6±2.3①③C级 30 5.8±1.0①② 13.4±2.4①② 1.1±0.2①② 15.7±2.8①②健康人 40 2.5±0.5 7.1±1.3 0.4±0.1 6.3±1.1

2.3 乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平与肠道屏障功能指标相关性分析 乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平与血清DAO、D-乳酸、内毒素和L/M比 值 均 呈 负 相 关（r=-0.845、r=-0.808、r=-0.867、r=-0.839，P＜0.01）。

3 讨论

肝硬化是一种慢性进行性肝病，病因包括病毒性肝炎肝硬化、酒精性肝硬化、血吸虫病性肝硬化和胆汁性肝硬化等，在我国慢性乙型病毒性肝炎是门静脉性肝硬化的主要病因[8-10]。IGF-Ⅰ是一种活性蛋白多肽物质，由70个氨基酸组成，分子量约为7500D，其编码基因位于12号染色体短臂。IGF-Ⅰ广泛存在于机体各组织系统中，主要由肝脏合成，其分子结构与胰岛素相似，具有丰富的生物学功能，可以促进细胞增殖、分化，抑制细胞凋亡，在机体生长发育方面具有重要的作用[11，12]。近年来研究发现，IGF-Ⅰ与肝脏疾病存在一定的关系。有人[13]发现IGF-Ⅰ可以抑制糖尿病大鼠肝星状细胞活化，延缓肝纤维化进程。研究[14]指出，肝硬化发生时机体肝脏功能受损，肝脏合成IGF-Ⅰ能力下降，导致血液循环中IGF-Ⅰ含量减少。IGF-Ⅰ能反映肝脏的合成能力，血清IGF-Ⅰ水平显著降低提示肝硬化患者出现蛋白质分解代谢障碍，可能出现营养不良等症状[15]。本研究发现，不同Child-Pugh分级肝硬化患者与健康人血清IGF-Ⅰ水平比较差异有统计学意义，血清IGF-Ⅰ水平随肝硬化程度加重而下降，可能由于IGF-Ⅰ主要由肝实质细胞合成和分泌，而乙型肝炎肝硬化患者肝细胞受到长期慢性损害，随肝纤维化进程加重肝细胞数量减少，其合成IGF-Ⅰ的能力显著降低，导致血清IGF-Ⅰ水平越来越低。

肠道屏障功能指肠道上皮分隔肠腔内物质，防止细菌、毒素等有害物质穿过肠黏膜侵入人体内其他器官、组织的功能总称[16]。肠道屏障由机械屏障、免疫屏障、生物屏障、化学屏障等4部分组成，任一部分受损均可造成肠道屏障功能破坏[17]。随着对肝脏与肠道关系的研究不断深入，部分学者指出肝硬化患者可能存在肠道屏障功能被破坏。研究[18]发现非酒精性脂肪肝大鼠肠道黏膜屏障功能受损，小肠细菌过度生长，肠道微生态紊乱。由于肝硬化患者存在门静脉高压，肠黏膜血流速度减缓，肠黏膜易发生缺血性损伤[19]。肝硬化患者肠黏膜细胞受损，肠道黏膜通透性增加，肠黏膜结构功能受损，具有较高的内毒素血症发生风险[20]。肝硬化患者肠黏膜屏障功能减退，存在不同程度的肠道菌群失调，机体易发生细菌感染和内毒素血症等，加剧肝硬化病情进展[21]。

DAO是一种具有高度活性的细胞内酶，主要分布于哺乳动物小肠黏膜上层绒毛中，在外周血中活性稳定。当肠黏膜屏障被破坏时，DA0大量进入血液循环，导致血清DA0水平显著上升。D-乳酸是细菌代谢产物，哺乳动物体内缺乏快速降解D-乳酸的酶系统。在机体正常情况下，-乳酸很少被吸收。当肠道屏障受损时，细菌大量滋生，D-乳酸在肠道内积累。内毒素是存在于革兰氏阴性细菌菌体的一类毒性物质的总称。在机体正常情况下，内毒素局限于肠道内。当肠黏膜受损时，内毒素穿过肠黏膜进入血液循环，导致内毒血症[22]。乳果糖和甘露醇在人体中含量极少，口服后从尿液中排出，通过两者比值可以反映肠黏膜的屏障功能。本研究显示，不同Child-Pugh分级肝硬化患者与健康人血清DAO、D-乳酸、内毒素和尿L/M比值比较差异有统计学意义，乙型肝炎肝硬化患者普遍存在肠道屏障功能受损，可能与免疫机能被破坏、门静脉高压、肠蠕动减缓、肠黏膜受损等因素相关，而肠道屏障功能受损，肠道通透性增加，可能导致细菌和内毒素移位增加，引起肠道局部和全身炎症反应，加重肝功能损伤，以此形成恶性循环。本研究发现，乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平与DAO、D-乳酸、内毒素水平和尿L/M比值均呈负相关，提示IGF-Ⅰ在维持肠道屏障方面具有一定的作用。一方面可能由于肝硬化发生后，肠道屏障功能受损，内毒素进入血液，抑制垂体释放IGF-Ⅰ[23-25]；另一方面，IGF-Ⅰ可以通过调节肠上皮环氧双酶表达，抑制肠道炎症反应，降低肠黏膜通透性，保护肠黏膜上皮细胞，减轻肠道屏障功能的损伤[26-30]。

综上所述，乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平与血清DAO、D-乳酸、内毒素水平和尿L/M比值呈负相关关系。IGF-Ⅰ对乙型肝炎肝硬化患者肠道屏障功能可能具有一定的保护作用，通过检测其血清水平可以大致反映患者肠道屏障功能，值得进一步研究。