血清cf-DNA定量检测对宫颈癌早期辅助诊断及预后判断中的价值

(三亚市中医院妇产科，海南 三亚 572000)

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，本病由人类乳头瘤病毒引起，可经皮肤传播，人感染后有十几年的潜伏期，因此早期感染的临床症状并不明显，因此，在医院就诊的患者多为表现出明显症状的癌症晚期患者。同时本病在临床上具有极高的漏诊率和误诊率[1]，早发现、早治疗对于该类患者的治疗与病情发展的控制极为关键，因此对于该类患者，有效的早期诊断方法就显得尤为重要[2-3]。近年来，血清肿瘤标志物的联合检测在宫颈癌的诊断中发挥了重要的意义，有大量研究显示，在宫颈癌患者血清中可检测到无细胞状态的和肿瘤相关的游离DNA(cf-DNA)。本文旨在探讨血清cf-DNA对宫颈癌患者早期诊断和临床预后判断的应用价值，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料将本院自2014年1月～2015年1月间收治的宫颈癌患者48例作为研究组，年龄27～61岁，中位年龄45.28±4.12岁；同时选取在本院妇科门诊体检的健康女性50例作为对照组，年龄24～63岁，中位年龄44.82±5.19岁，根据国际妇产科联盟(FIGO)的分期标准对所有患者进行分期。两组患者年龄等一般资料之间比较，差异无显著性(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1肿瘤标志物的检测所有研究对象在清晨空腹的状态下，抽取3 mL静脉血，1 000 r/min离心5 min后取血清备检。使用电化学发光分析仪监测糖类抗原125(CA125)、糖类抗原19-9(CA19-9)、鳞状细胞癌抗原(SCC)、β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)。

1.2.2cf-DNA定量检测将获得的血清使用双蒸水按照1∶20倍稀释，使用Tris-DNA缓冲液将DNA标准液稀释为0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00、400.00 μg/L，按照标准液的吸光度和浓度描绘出标准曲线，求得回归方程，即Y=1.689X，根据标准曲线计算出每孔cf-DNA的浓度，每个样本的游离DNA含量等于20倍浓度值。

1.3观察指标观察两组研究对象血清CA125、CA19-9、SCC、β-HCG的浓度，比较两组研究对象血清cf-DNA水平，并观察不同病理特征宫颈癌患者血清cf-DNA水平的差异。

1.4统计学方法使用统计学软件SPSS17.0对数据进行分析处理，计量资料以均数±标准差表示，使用t检验，组间比较使用X2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2　结　果

2.1两组血清肿瘤标志物水平比较研究组宫颈癌患者SCC、β-HCG的浓度明显升高(P<0.05)，但血清中CA125、CA19-9的水平差异不大(P>0.05)，见表1。

2.2两组血清cf-DNA比较研究组血清cf-DNA的浓度(1 561.29±248.61 μg/L)明显高于对照组(169.20±45.84 μg/L)，两组比较，差异有显著性(t=36.741，P<0.05)。

表1　两组研究对象各项指标比较

2.3血清肿瘤标志物及cf-DNA诊断结果比较血清肿瘤标志物CA125、CA19-9、SCC、β-HCG灵敏度分别为56.5%(13/13+10)、50.0%(12/12+12)、62.8%(22/22+13)、60.6%(20/20+13)；特异度为53.3%(40/40+35)、51.3%(38/38+36)、58.7%(37/37+26)、56.9%(37/37+28)；cf-DNA灵敏度及特异度分别为68.0%(32/32+15)、68.6%(35/35+16)，cf-DNA灵敏度及特异度高于CA125、CA19-9、SCC、β-HCG。见表2。

表2　血清肿瘤标志物及cf-DNA诊断结果比较

2.4病理参数、临床分期及病理组织学分级和血清cf-DNA的关系不同临床病理特征的宫颈癌患者检测血清cf-DNA水平，发现宫颈癌患者临床分期为Ⅱ期、Ⅲ期的患者和癌细胞低分化程度的患者血清中cf-DNA水平显著高于Ⅰ期患者和中、高分化程度的患者(P<0.05)，血清cf-DNA和临床病理组织分型无明显的相关性，见表3。

表3　病理特征和血清cf-DNA的关系

3　讨　　论

在全球范围内，每年约有20万女性死于宫颈癌[4]。在发展中国家本病的发病率呈逐年上升的趋势，由于本病的早期临床症状并不明显，大部分患者就诊时已经发展为晚期，因此早期诊断和治疗对提高患者生存质量具有重要的意义。据文献报道，血清肿瘤标志物如CA125、CA19-9、SCC、β-HCG的浓度进行联合检测在宫颈癌患者的诊断中具有良好的敏感性[5-6]。

近年来，有研究显示宫颈癌患者DNA含量可明显升高，定量检测DNA含量可作为辅助诊断宫颈癌的有效手段，但该方法需获取正常上皮组织的DNA，易影响检测结果。而检测血清cf-DNA相比于癌细胞DNA更为准确和简单。血清cf-DNA是广泛存在于脑脊液、滑膜液、血液等液体中的无细胞状态的DNA，其主要来源为坏死及凋亡的肿瘤细胞。早在1977年，学者Leon发现肿瘤患者体内存在cf-DNA，此后，其作为一个研究的热点得到了深入的研究，大量研究结果证实，在健康人体内cf-DNA维持在一个相对比较低的稳定水平，但是癌症患者体内cf-DNA的水平会明显升高，因此他们提出血液中cf-DNA的水平和肿瘤发生、发展、好转具有很大的相关性，因此可通过测定血清cf-DNA的水平变化辅助恶性肿瘤诊断、疗效判定和预后预测等[7-8]。定性分析血中游离DNA有助于诊断肿瘤，定量分析血中游离DNA则有助于判定肿瘤分级，确定肿瘤组织处于的发展阶段，为判定预后包括转移风险和制定治疗方案提供参考，目前，血液游离DNA的检测方法包括荧光免疫法、放射免疫法和ELISA等，但是现在的DNA提取技术限制了提取的纯度，导致结果不够理想并且费时，从而限制了游离DNA在临床的应用，本次实验采用的检测方法避免了洗涤造成的样品损耗，使检测过程更为灵敏和简单。

本文结果显示，宫颈癌患者血清中SCC、β-HCG、血清cf-DNA的浓度明显升高(P<0.05)，因此，cf-DNA水平的变化和宫颈癌发生具有密切的关系，这一结果与李晓琳等[9]研究一致；在宫颈癌患者临床分期为Ⅱ期、Ⅲ期的患者和癌细胞低分化程度的患者血清中cf-DNA水平显著高于Ⅰ期患者和中、高分化程度的患者，这就说明宫颈癌的临床分期越高，cf-DNA的浓度越高，在癌组织分化程度越低使cf-DNA的浓度越高，这对预测患者预后有很大的临床意义，说明患者血清cf-DNA的浓度越高，患者病情进展越快，预后不良，文献报道恶性肿瘤发病、发展、复发、好转和血清cf-DNA的水平密切相关，本文结果和陈湧彧[10]研究一致。

综上所述，血清cf-DNA水平可作为宫颈癌早期诊断和预后判断的一个标准，检测其水平对宫颈癌诊断具有较好的特异性和敏感度，且操作方法简单易行，可在临床上推广使用。