霉菌性阴道炎患者体内真菌分布、T淋巴细胞及相关细胞因子水平变化特点及意义

雷　放，宋　玲

在35～45岁的育龄期女性中，霉菌性阴道炎的发病率呈显著的上升趋势[1]。流行病学研究证实，霉菌性阴道炎的发病率可达272/10万～372/10万，同时在长期使用抗生素的人群中，其发病率显著增加[2]。越来越多的研究显示，免疫细胞功能紊乱或者自身免疫因子的紊乱，是促进霉菌性阴道炎患者病情进展的重要因素[2]。CD3+、CD4+T淋巴细胞的激活，能够诱导抗原提呈表位的激活，促进自身T淋巴细胞免疫力的激活和维持，降低阴道内病原体感染的风险；CD8+T淋巴细胞的激活，能够直接分泌相关效应因子，增加自然杀伤性T淋巴细胞的细胞毒性作用，促进霉菌等病原体的清除[3-4]。为了进一步揭示不同的T淋巴细胞亚群及其分泌的细胞因子在霉菌性阴道炎中的作用，本次研究选取2017年1月—12月在我院治疗的霉菌性阴道炎患者182例，探讨霉菌性阴道炎患者T淋巴细胞及相关效应因子的水平、意义，从而为临床霉菌性阴道炎的诊疗和复发的预防提供参考。

1　对象与方法

1.1 对象 选取2017年1月—12月在成都市第二人民医院治疗的霉菌性阴道炎患者182例（观察组）。纳入标准：①符合霉菌性阴道炎诊断标准（外阴灼痛白带量多，呈凝乳状或豆腐渣样，分泌物光镜下可观察到芽生孢子及假菌丝）；②患者知情同意。排除标准：①合并有免疫缺陷疾病，糖尿病，肺结核，恶性肿瘤，严重肝、肾疾病等；②近1个月内使用过抗生素、糖皮质激素者；③妊娠期或哺乳期；④合并其他病原菌感染，如淋球菌等。同时选取女性健康志愿者110例作为对照组，2组受试者一般资料比较差异无统计学意义（P均＞0.05）。见表1。

表1 2组一般资料比较Table 1 Comparison of general data between 2 groups

1.2 材料 Bio-Bad全自动酶标仪购自美国飞利浦公司；IL-2、IL-4和IL-10抗体试剂盒购自南京建成生物工程研究所；TNF-α、INF-γ抗体试剂盒和流式细胞抗体购自罗氏检测公司；FACS流式细胞计数仪器购自美国ABI公司。

1.3 方法

1.3.1 病原菌培养及检测 用一次性毛刷采集患者的阴道分泌物，严格按照全国性的临床标本采集操作规程进行标本的采集和培养，采用南京伯塞康公司生产的真菌快速检测卡进行检测，检测卡由黄色变为红色为阳性。

1.3.2 T淋巴细胞及细胞因子检测 采用化学发光法检测IL-2、IL-4和IL-10。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测TNF-α和INF-γ；采用流式细胞技术检测CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞。

1.4 统计学处理 统计分析采用SPSS 19.0软件，计量资料采用±s表示，组间年龄、体质量指数、T淋巴细胞、细胞因子比较用成组t检验（组间方差齐），P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结　果

2.1 病原菌检测结果 182例患者阴道分泌物的真菌培养结果显示病原菌分布以白色念珠菌为主，占43.41%。见表2。

表2 真菌菌群分布Table 2 Distribution of fungal flora

2.2 2组阴道分泌物T淋巴细胞比较 观察组阴道分泌物中CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞水平明显低于对照组（P均＜0.05）。见表3。

表3 2组阴道分泌物T淋巴细胞比较（%）Table 3 Comparison of T lymphocytes in vaginal secretion of 2 groups(%)

2.3 2组阴道分泌物细胞因子比较 观察组阴道分泌物IL-2、TNF-α和INF-γ明显低于对照组（P均＜0.05），而IL-4和IL-10明显高于对照组（P均＜0.05）。见表4。

2.4 观察组不同患者T淋巴细胞及细胞因子比较 观察组中有26例患者为复杂性霉菌性阴道炎（反复发作）。复杂性霉菌性阴道炎患者阴道分泌物CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明显低于普通霉菌性阴道炎患者（P均＜0.05），而IL-4和IL-10明显高于普通霉菌性阴道炎患者（P均＜0.05）。见表5。

3　讨　论

长期使用抗生素、不洁性生活、自身免疫力下降等，均能够导致霉菌性阴道炎的发生。特别是自身免疫力的改变，能够增加霉菌感染的机会，降低阴道对于霉菌的清除能力[5]。霉菌性阴道炎的长期进展，能够增加宫颈病变的发生风险，导致继发性的人乳头瘤状病毒感染风险的增加[6-8]。近年来越来越多的随访研究显示，霉菌性阴道炎患者局部阴道内的免疫细胞或者免疫因子的改变是导致患者治疗敏感性下降及治疗后复发的重要因素。免疫细胞的功能紊乱，能够使霉菌对于阴道黏膜屏障的突破作用的增强，并增加其过度繁殖引起的阴道内菌群紊乱的发生率[9]。

本次研究中通过对阴道分泌物的培养发现，不同类型的真菌感染均能够促进霉菌性阴道炎的发生，其中以白色念珠菌的感染比例最高。临床上对于霉菌性阴道炎患者，应早期使用针对白色念珠菌较为敏感的氟康唑或者咪康唑等抗真菌药物；对于长期使用抗真菌药物后病情反复，或者抗真菌治疗效果不佳时，可以考虑进行细菌培养和药物敏感试验，根据试验结果进行抗真菌药物的调整。

同时本研究发现，霉菌性阴道炎患者阴道分泌物中，CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比均明显减少。CD3+、CD4+T淋巴细胞的下降提示阴道内环境对于霉菌等病原体的抗原提呈作用不足，失去了其诱导下游T淋巴细胞免疫效应因子激活的能力。而CD8+T淋巴细胞的下降则影响自然杀伤性T淋巴细胞或者巨噬细胞的活性，导致其抵抗外来病原体或者吞噬杀伤霉菌能力的下降。龚娅婷等[9]报道了在霉菌性阴道炎患者中，阴道分泌物中的CD3+、CD4+T淋巴细胞可平均下降20%以上，同时霉菌性阴道炎患者的病程越长，阴道炎症状表现越为严重，CD3+、CD4+T淋巴细胞的下降越为明显。但须要注意的是，部分研究者认为CD8+T淋巴细胞百分比在霉菌性阴道炎患者中可显著的上升，与本次研究存在一定的差异。这主要由于霉菌性阴道炎患者既往可能有不同的治疗病史，同时与相关研究T淋巴细胞的检测时机的不同等有关。IL-2和IFN-γ是Th1淋巴细胞分泌的细胞因子，其能够稳定T淋巴细胞的功能，降低因为CD4+T淋巴细胞功能过度活化导致的免疫性损伤[10-11]。IL-4、IL-10是Th2淋巴细胞分泌的细胞因子，IL-4、IL-10能够直接诱导下游TNF的激活，提高对病原体的吞噬能力[12]。稳定的Th1/Th2免疫功能的平衡对于提高患者的抵抗力，降低感染的风险均具有重要的价值[13-14]。本研究中IL-2和INF-γ的表达浓度明显下降，而IL-4和IL-10表达浓度明显上升，提示了Th1/Th2淋巴细胞免疫平衡的右移和紊乱，进一步提示了T淋巴细胞功能紊乱与霉菌性阴道炎的关系。复杂性霉菌性阴道炎患者阴道分泌物CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明显下降，而IL-4和IL-10水平明显的上升，提示了在复杂性霉菌性阴道炎患者中，相关淋巴细胞免疫紊乱的表现更为明显，这也表明淋巴细胞免疫功能的紊乱是影响阴道炎患者病情复发的重要因素[15]。

表4 2组阴道分泌物细胞因子比较（pg/ml）Table 4 Comparison of cytokines in vaginal secretion of 2 groups(pg/ml)

表5 观察组不同患者T淋巴细胞及细胞因子比较Table 5 Comparison of T lymphocytes and cytokines in different patients of the observation group