刺玫果不同提取方式对小鼠抗疲劳抗衰老的实验研究

怀雪，孟永海，吴丽红,马智超，孟祥瑛，王艳艳

(黑龙江中医药大学，教育部北药基础与应用研究重点实验室，黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室，黑龙江　哈尔滨　150040)

蔷薇科植物刺玫果果实营养价值极高，内含丰富的黄酮类、甾醇、三萜类、脂肪油、有机酸、香豆素类、皂苷、蛋白质、糖类、挥发油[1-3]和17种氨基酸[4]，其中苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸等7种为人体所必需而又不能自身合成的氨基酸；含有28种微量元素，有丰富的生物活性，其中比较明确的有锌、铁、硒等14种人体必须的微量元素[5]。号称“生命之花”的天然刺玫果被视为天然浓缩的多种维生素[6],是饮料和保健品的重要原料。为此，我们对刺玫果抗疲劳抗衰老作用进行了研究，现将研究结果报告如下。

1　材料与方法

1.1　动物

ICR小鼠60只，雄性，体质量(20±2)g；ICR 老龄鼠50只，雄性，均由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供。

1.2　药物与试剂

刺玫果产自大兴安岭；肝/肌糖原试剂盒，丙二醛(MDA)试剂盒，总超氧化物歧化酶(T-SOD)试剂盒，蛋白定量(BCA)试剂盒，还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒(南京建成生物研究所)。

1.3　仪器

水浴锅(HWS24)；低温离心机(Eppendorf 5840R)；分析天平(型号：MS105，梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；Thermo紫外分光光度计(美国)；Thermo酶标仪(美国)。

2　方法

2.1　刺玫果提取物的制备

水煎液的制备：用8倍体积蒸馏水煎煮刺玫果，文火煎煮1 h，反复煎煮3次，合并滤液，配成浓度为0.4 g/ml的水煎液，冷藏备用。

醇沉和上清液的制备：水煎煮同上，将浓缩后的水煎液用80%的乙醇醇沉24 h，过滤，分别收集滤渣和滤液，滤渣过滤冻干，滤液浓缩冻干。需要时配置成含生药量为0.4 g/ml的溶液。

回流组分的制备：浓度为80%醇回流提取刺玫果，回流1 h，反复回流3次，合并滤液，浓缩，冻干，需要时配制成含生药量为0.4 g/ml的溶液。

2.2　实验分组与方法

2.2.1抗疲劳实验[7]

每组10只，分为5组即对照组、水煎液组、醇沉组、上清组、回流组，给药体积为20 mg/kg,给药浓度均为含生药量8 g/(kg· d)。对照组给等体积的生理盐水，上午10时给药，连续给药10天，末次给药30 min后，将小鼠放入50×40×40 cm大水箱中，水温(30±2)℃，以小鼠沉入水中10 s内头不浮出水面视为力竭，记录其开始游泳时间至力竭时间为力竭游泳时间。力竭后立即断头，在冰上迅速取肌肉组织和肝组织，取胸腺和脾用分析天平称量，按照试剂盒说明书测其肌糖原和肝糖原含量。

2.2.2抗衰老实验

每组10只，共分6组即青年组、老年组、老年水煎液组、老年醇沉组、老年上清组、老年回流组。给药剂量同上,青年、老年组给等体积的生理盐水，连续给药30天，末次给药后，分别眼球取血，低温离心血清，测定SOD、MDA。冰上取肝组织，测定BCA、GSH。

2.3　统计学处理

3　结果

3.1　抗疲劳鼠体质量变化、脾脏指数、胸腺指数比较

结果见图1。给药组的体质量变化明显低于对照组，水煎液、上清、回流组脾重和脾脏指数高于对照组，上清、回流组胸腺和胸腺指数高于对照组。

图1　抗疲劳鼠体质量变化、脾脏指数、胸腺指数比较

3.2　抗疲劳实验鼠力竭游泳时间、肝糖原、肌糖原比较

表1　抗疲劳实验鼠力竭游泳时间、肝糖原、肌糖原含量比较

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

结果见表1。与对照组相比，水煎液组力竭游泳时间明显长于对照组，且有显著性差异(P<0.05)，回流组小鼠力竭游泳时间明显长于对照组，且有极显著差异(P<0.01)。与对照组相比，水煎液组肝糖原含量明显高于对照组，有极显著差异(P<0.01);上清组和回流组肝糖原含量明显高于对照组，有显著性差异(P<0.05)。与对照组相比，水煎液组肌糖原含量明显高于对照组，有极显著差异(P<0.01)，回流组肝糖原含量明显高于对照组，有显著性差异(P<0.05)。

3.3　抗衰老实验小鼠血清SOD、MDA含量以及肝组织10%匀浆GSH含量比较

结果见表2。青年组MDA、SOD、及肝组织10%匀浆GSH含量与各组相比有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。老年水煎液组和老年回流组MDA含量与老年组相比有显著性差异(P<0.05)。老年水煎液组和老年醇沉组SOD含量与老年组相比有极显著性差异(P<0.01)。老年水煎液组和老年上清组GSH含量与老年组相比有极显著性差异(P<0.01)。

表2　小鼠SOD、MDA、肝组织10%匀浆GSH含量比较

注：与老年组比较，*P<0.05，**P<0.01；与青年组比较，ΔP<0.05,ΔΔP<0.01

4　讨论

本实验研究刺玫果不同提取方式对实验小鼠抗疲劳抗衰老的药理作用。研究结果表明，刺玫果4种提取方式均有抗疲劳，延缓衰老的作用。数据显示，在实验期间，在投食相同饲料时，给药组的体质量变化没有对照组体质量变化明显，刺玫果提取物能调节机体自身代谢，维持体质量相对稳定。上清组和回流组的脏器指数高于对照组，可见刺玫果对免疫功能的影响有待深入研究[8]。抗疲劳试验中，力竭游泳实验作为耐力指标[9]，肌糖原和肝糖原含量与耐力指标密切相关[10]。刺玫果提取物对小鼠力竭游泳时间，肝、肌糖原含量均有显著的提高，显示了刺玫果良好的抗疲劳作用。现代研究表明，刺玫果具有一定的体外抗氧化活性[11]，近年来研究认为,抗衰老的一种机制为清除自由基延缓衰老[12]，自由基的代谢产物MDA和机体内抗氧化物质SOD是衰老的两项生化指标[13-16]。本实验显示，抗衰老试验中老年水煎液组与老年组相比，MDA含量明显降低，SOD、GSH含量明显升高，说明刺玫果水煎液有良好的抗衰老效果。而其他组分对其效果也有一定的趋势，但不全有显著性差异，可能是同等剂量下不同提取方式药物有效成分含量不同，有待于进一步考证。

综上所述，刺玫果提取物对抗疲劳和抗衰老有一定的功效，尤以水提物效果最为明显。