miRNA141通过抑制MAP2K4促进大肠癌增殖的研究

肖绪华

【摘要】 目的：探究miRNA141通过抑制MAP2K4对促进大肠癌增殖的效果。方法：本文共选取2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI检查被诊断为大肠癌的患者24例，提取总RNA，RNA浓度测量使用紫外分光光度法，取5μL RNA样品，运用RNase对离子水进行稀释，在对OD值进行测量时需使用紫外分光光度计进行测量。RTPCR扩增，cDNA模版的合成主要是应用PCR逆转录反应来实现，RTPCR扩增主要是应用ALLinOne试剂盒，具体的步骤及方法应严格按照试剂盒上的说明书开展。结果：大肠癌及肠黏膜的提取方法主要是应用Trizol方法。在对miR141的相对表达量进行检测时，主要是采用荧光实时定量PCR法。在对细胞转染WT FL质粒进行检验时，主要是使用荧光仪来检测荧光酶的活性，会发现FL活性下降，突变质粒的FL活性未发生明显的变化。结论：在大肠癌诊断中MRI发挥了重要作用，miR141的表达水平会随着大肠癌TNM分期而增高，miR141表达上调，说明大肠癌与miR141之间的发展有直接关系，有助于抑制癌细胞的快速生长。

【关键词】 miRNA141；MAP2K4；大肠癌增殖；大肠癌癌细胞

miRNA141 promotes the proliferation of colorectal cancer by inhibiting MAP2K4

Xiao Xuhua

Affiliated Hospital of Guilin Medical University， Guilin， Guangxi 541000

[Abstract] Objective：To explore the effect of miRNA141 on promoting the proliferation of colorectal cancer by inhibiting MAP2K4. Methods： this article selected from February 2016 to February 2016 in our hospital radiology department do MRI examination， a total of 24 patients with colorectal cancer was diagnosed， extracting total RNA， RNA concentration measurement using uv spectrophotometry， take samples of 5 mu lRNA applying RNase to dilution of ionized water， as measured in the OD value measurement should be carried out using ultraviolet spectrophotometer.Rtpcr amplification， cDNA template synthesis is mainly used PCR rtpcr reaction，RTPCR amplification is mainly applied ALLinOne kit， specific experimental steps and methods should strictly follow the instructions in the kit to carry out the experiment. Results： the extraction method of colorectal cancer and intestinal mucosa mainly used Trizol method. In the detection of the relative expression of miR141， fluorescence realtime quantitative PCR method was adopted. When the cells were transfected with WT FL plasmid， the activity of fluorescein was detected by fluorescence apparatus， and FL activity decreased and the FL activity of mutant plasmid did not change significantly. Conclusion： MRI plays an important role in colorectal cancer diagnosis， the expression of miR141 levels will be increased with colorectal cancer TNM staging， miR141 expression， indicates that the development of colorectal cancer between miR141 and has a direct relationship， helping to suppress cancer cell growth.

[Key words]miRNA141； MAP2K4； Colorectal cancer proliferation； Colorectal cancer cells

大肠癌是一种最常见的癌症病症，是引发患者死亡的主要原因，目前主要采用手术切除治療方法，但是在过去的十几年中，患者的生存率并未发生明显的变化。近年来，医学专家学者发现了生物标志物，针对大肠癌患者的疾病情况，制定出了个性化的治疗策略，促进了患者生存质量的大大提升。miRNA在抑制蛋白质及调整人类基因上作用显著，异常miRNA表达式对人类癌症的侵袭均造成了较大的影响。通过miRNA，有助于促进活化癌基因细胞的快速转化，对抑制肿瘤发展及增殖作用显著。本文作者将2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI检查被诊断为大肠癌的24例患者作为研究对象，探究miRNA141通过抑制MAP2K4对促进大肠癌增殖的效果，现报道如下。

1资料及方法

1.1一般资料

本文共选取于2016年2月至2018年2月在本院放射科做MRI检查被诊断为大肠癌的患者24例，男性患者为122例，女性患者为12例，年龄为42～76岁，平均年龄为（62.3±2.4）岁。

1.2方法

提取总RNA，RNA浓度测量使用紫外分光光度法，取5μL RNA样品，运用RNase对离子水进行稀释，在对OD值进行测量时需使用紫外分光光度计进行测量。RTPCR扩增，cDNA模版的合成主要是应用PCR逆转录反应来实现，RTPCR扩增主要是应用ALLinOne试剂盒，具体的步骤及方法应严格按照试剂盒上的说明书开展[12]。

1.3统计学处理

研究得出数据通过SPSS 18.0软件统计处理，计量资料采用（±s）表示，以t检验，P<0.05说明差异有统计学意义。

2结果

2.1大肠癌与miR141的miRNA表达水平

大肠癌及肠黏膜的提取方法主要是应用Trizol方法，在对RNA的纯度及浓度进行鉴定时，主要是使用琼脂糖凝胶及紫外分光光度法进行鉴定及测量。在对miR141的相对表达量进行检测时，主要是采用荧光实时定量PCR法。研究结果见图1，可见大肠癌组织中的miR14呈升高发展趋势，相对于癌旁的正常组织有统计学差异（P<0.05）。

主要是利用miR141 anatagomirs、Lipofectamin 2000转染miR 141模拟物对miR141与大肠癌癌细胞之间的生长关系进行研究，研究结果显示，miR141模拟物转染的提高水平是miR141表达水平的3～4倍。与此相反，miR141 anatagomirs是导致miR141浓度减少的主要原因。从图2中可以看出，miR414模拟物转染miR141表达水平明显提高，anatagomirs是引发miR141表达水平下降的主要原因。

2.3miR141对MAP2K4表达的影响

在对miR141的下游靶基因进行预测时，主要是应用MiRanda法做进一步的研究。在对细胞转染WT FL質粒进行检验时，主要是使用荧光仪来检测荧光酶的活性，会发现FL活性下降，突变质粒的FL活性未发生明显的变化。说明在调控MAP2K4中，miR141发挥了抑制性作用，说明miR141大肠癌自爆中的靶目标很有可能是MAP2K4。与相应的对照相比，突变型及转染野生型质粒的大肠癌细胞荧光素酶活性有统计学差异（P<0.05）。见图3。图2miR41表达水平

3讨论

大肠癌是我国癌症疾病中的常见类型，是引发患者死亡的主要原因。microRNA作为一项潜在的新型肿瘤标志物，受到了广大医学专家学者的高度关注[34]，加大对大肠癌进行早期诊断及治疗具有必要性，有助于提升患者预后质量。miRNA作为新一类的癌症基因调节因子，在大肠癌治疗中发挥了重要作用[56]。在过去的很多年中，医学专家学者对miRNA进行了大量的研究和分析，研究结果表明其为癌症基因的调节因子，miR141在促进癌症发展及抑制基因MAK2K4中作用显著，被广泛应用于结肠肿瘤治疗中。miRNA自身具有较强的稳定性，在抑制肿瘤及癌基因上效果显著，实现了对细胞凋亡及增殖过程的调节。miR141作为一种进化上保留，使miRNA基因远端长期处于异常的甲基化过程中，会降低DNA甲基转移酶的表达水平，提升miR141表达水平。

本研究结果显示，miR141能够有效抑制肿瘤及基因MAK2K4，在肿瘤治疗中发挥了重要作用。需要将miR141作为一类药物靶标，为大肠癌的诊断及治疗提供可靠依据。miRNA在肿瘤抑制基因及癌基因中作用显著，通过对细胞的凋亡及增殖进行调节，促进了肿瘤细胞的快速凋亡及分化[78]。miR141保留在不稳定的miRNA家族中，在大肠癌中的分子机制是导致DNA甲基转移酶基因表达水平下降的主要原因，因此需要加大对miR141的表观遗传学机制进行调节[910]。

综上所述，在大肠癌诊断中MRI发挥了重要作用，miR141的表达水平会随着大肠癌TNM分期而增高，miR141表达上调，说明大肠癌与miR141之间的发展有直接关系，有助于抑制癌细胞的快速生长。

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