穴位注射和中药茶对渐衰去势雌性大鼠血液流变学的影响*

臧　凯,罗小光,李　伟,陈　睿,周睿娴

(1.贵州医科大学，贵州 贵阳 550004；2.贵州医科大学附属医院，贵州 贵阳 550004)

更年期是女性从生育旺盛的性成熟阶段向非生育阶段的衰老过程，在此期间由于女性内分泌改变，雌激素水平波动或减少，下丘脑-垂体-卵巢轴平衡失调，出现一系列以植物神经功能代谢紊乱的一组症候群，称为更年期综合症(Menopausal Syndrome,MPS)[1]。研究显示[2]，约84%女性不能通过机体自我调节达到神经内分泌新的平衡而出现更年期综合症相关症状。随着社会人口结构老龄化，该病有发病年龄提早、发病率上升的趋势[3]。MPS虽不危及生命，但其症状反复发作、持续时间或长或短，严重影响患者的生活质量，且远期可导致冠心病、高血压、骨质疏松、糖尿病、阿尔兹海默症等疾病的发生[4]。因此对其早期预防和及时诊治,使患者平稳度过更年期有重要意义。在临床工作中运用穴位注射和中药茶治疗更年期取得了较满意的效果，但其作用机制尚未明确，故本课题采用SD大鼠建立更年期动物模型模拟女性卵巢功能逐渐衰竭的过程，在此基础上观察穴位注射和中药茶对血液流变学以及对雌性激素、子宫形态学的影响，为临床应用及早期预防治疗提供实验依据。

1　材料与方法

1.1　实验动物

选取3月龄雌性未孕SD大鼠156只，体质量(250±20)g，贵州医科大学动物实验中心提供，实验动物许可证号：SCXK(黔)2002-0001。饲养于贵州医科大学附属医院临床试验中心-SPF级小动物实验中心。

1.2　实验药物

中药方剂:自制茶方，符合《中国药典》2010年版项下标准(由贵州医科大学附属医院中药房提供)，组成: 红花、玫瑰花、金银花各12 g,佛手10 g,合欢皮15 g,浮小麦12 g,菟丝子、旱莲草、枸杞各15 g,菊花12 g,百合15 g，水煎,4℃冰箱中储存备用；丹红注射液(山东丹红制药有限公司,产品批号：16012001,20 mL/支);10%水合氯醛(贵州医科大学自制)；80万单位注射用青霉素钠(中诺药业,产品批号：017150442)。

1.3　实验试剂和仪器

试剂：雌二醇E2酶联免疫吸附测定试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)；卵泡刺激素FSH酶联免疫吸附测定试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)。仪器：JY2001电子计重称(上海浦春计量仪器有限公司)；MSE-25型台式大型高速冷冻离心机(广州市流式生物科技有限公司)；LBY -N6K型血液粘度计 (北京普利生有限公司)；BCD-215WDGC立式低温冷藏箱(青岛海尔有限公司)。

1.4　实验分组

将156只实验大鼠，随机选取12只作为假手术组，常规饲养。其他分为3大组群：次切组群、次全切组群和全切组群(每个组群里分别包含：模型组、中药茶组、穴位注射组和中药茶+穴位注射组4个小组，每组各12只)。

1.5　造模

禁食不禁水24 h后，按0.3 mL/100 g的剂量标准予10%水合氯醛腹腔麻醉大鼠，腹部剪毛、消毒后逐层切开暴露腹腔。次切组群：右侧卵巢全切，左侧卵巢切除约50%；次全切组群：右侧卵巢全切，切除左侧卵巢体积约80%；全切组群：切除双侧卵巢；假手术组：不切除卵巢，仅切除卵巢周围少量脂肪组织。术后连续3天予青霉素注射液肌注预防感染,术后1周开始行阴道涂片检查，1次/天，连续5天。次切组群：以角化上皮细胞指数≤50%为造模成功；次全切组群：以角化上皮细胞指数≤30%为造模成功；全切组群：以不出现角化上皮细胞为造模成功。

实验造模过程中假手术组大鼠死亡2只;次切组群大鼠共死亡5只,造模失败剔除3只;次针刀组群大鼠共死亡4只,造模失败剔除4只;全切组群大鼠共死亡7只,造模失败剔除1只。故最后每小组各10只。

1.6　干预治疗

中药茶组:自由饮药，饮用8周。穴位注射组：根据《实验针灸学》[5]动物标准穴位图谱提供的定位方法，选取肾俞(双)、肝俞(双)、气海、关元，注射丹红注射液0.02 mL/穴，1周1次，共8次。中药茶+穴位注射组：方法同上，联合治疗。假手术组与各模型组: 自由饮食，无干预措施。

1.7　检测指标及方法

1.7.1E2、FSH的标本收集与测定治疗结束后，腹主动脉取血4 mL，提取血清，-20℃冰箱保存待测，血清雌二醇(E2)、卵泡雌激素(FSH)用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测，具体按试剂盒说明操作。

1.7.2血液流变学测定取4 mL血液于抗凝管内，立即摇匀后送往贵州医科大学附属医院中心实验室由该科专人检测血液流变学。

1.7.3子宫组织形态变化大鼠处死后，取子宫组织用10%的福尔马林液固定，石蜡包埋切片，HE染色观察组织形态学。

1.8　统计学处理

2　结果

2.1　血清E2、FSH水平比较

与假手术组相比，各模型组E2均下降，FSH均升高，差异有统计学意义(P<0.01)，提示造模成功；观察各模型组、次切组、次全切组及全切组E2呈依次递减趋势，FSH呈依次递增趋势，这一过程体现了卵巢功能渐衰。与模型组比较，各治疗组大鼠E2均明显升高，FSH均显著降低，差异均有统计学意义(P<0.01)，提示穴位注射和中药茶均能提高去势大鼠E2水平，降低FSH水平，其中以次切中药茶+穴位注射组雌激素水平改善更为明显。见表1。

表1　各组大鼠E2、FSH比较

2.2　全血粘度的比较

与假手术组相比，各模型组全血粘度(高、中、低切变率)均明显升高(P<0.01)。治疗后与模型组比较，各治疗组全血粘度(高、中、低切变率)均显著降低，差异均有统计学意义(P<0.01)，提示穴位注射和中药茶均能降低去势大鼠不同切变率下全血粘度，其中以次切中药茶+穴位注射组全血粘度改善更好,见表2。

2.3　血浆粘度的比较

各模型组血浆粘度较假手术组明显升高(P<0.01)；治疗后治疗组血浆粘度均明显下降(P<0.01)，提示穴位注射和中药茶均能改善去势大鼠血浆粘度，其中以次切中药茶+穴位注射组血浆粘度改善更好，见表2。

2.4　红细胞压积的比较

与假手术组相比，各模型组红细胞压积均升高(P<0.01)；与模型组比较，各治疗组的红细胞压积均显著降低，差异均有统计学意义(P<0.01)，提示穴位注射和中药茶均能降低去势大鼠红细胞压积，以次切中药茶+穴位注射组改善更好。见表2。

2.5　子宫组织形态学病理变化

假手术组：子宫内膜以高柱状上皮为主，腺体多，血管丰富。各模型组：子宫内膜多为单层扁平上皮，呈不同程度萎缩组织象，腺体数目和血管稀少。各治疗组均能使子宫内膜上皮增厚，间质致密，腺体和血管数量增多；其中次切组群治疗组大鼠子宫内膜改善情况优于次全切组群及全切组群治疗组大鼠。中药茶：子宫内膜多为单层柱状上皮，腺体数目稍多，血管增加。穴位注射组：子宫内膜以单层柱状上皮为主，固有层腺体和血管数目增多，但不如中药茶+穴位注射组明显。中药茶+穴位注射组：子宫内膜厚度明显增加，被覆单层柱状上皮，腺体数目明显增多，分泌较好，间质致密，血管较丰富。见封三彩图1。

表2　各组大鼠血液流变学比较

3　讨论

目前更年期动物模型以去势模型[6]最为常用，但其体内雌激素水平是突然下降的，与人类更年期卵巢功能渐衰雌激素分泌功能逐渐降低的过程有着本质的不同。为了更贴切描述更年期生理变化特征，故本实验采取右侧卵巢全部摘除，左侧卵巢分别摘除50%、80%、100%的造模方法来模拟卵巢功能渐衰的过程。结果表明：与假手术组相比，各模型组大鼠E2水平均降低，FSH水平均升高，与女性更年期内分泌水平变化一致，提示大鼠进入更年期；次切、次全切及全切模型组FSH水平呈升高趋势，而E2水平呈下降趋势,大致模拟了卵巢功能逐渐衰退的过程。同时检测大鼠子宫组织形态学及阴道脱落细胞均有更年期变化，进一步表明成功地复制了更年期渐衰大鼠模型，但由于样本量少不能明确处于更年期具体哪个时期，只能粗略地模拟人类更年期的生理变化特征。

现代医家[7-9]认为，除肝肾亏虚外，血瘀也是更年期的一个重要病机。妇女七七天癸竭，冲任亏虚，脏腑气血阴阳平衡失调，气机不畅、血行无力、脉道失和，从而影响气血运行，致血流瘀阻。更年期综合症以肝肾亏虚为致病之本，血瘀为标，而血瘀作为病理产物同时也是致病因素，影响机体功能和状态。现代研究也表明，更年期与血液流变学之间有着互为因果的内在联系[10]，女性进入更年期时，性激素水平明显下降的同时出现血液流变学各项指标的改变，血液呈不同程度的“稠、粘、聚、凝”状态，结合更年期后女性心血管等疾病的发病率逐渐升高,说明更应重视血瘀的病理变化。此外，雌激素是女性最重要的性激素，对心血管系统、生殖系统、骨骼系统、中枢神经系统等有重要保护作用[11]。实验结果提示：与假手术组相比，各模型组大鼠血液流变学全血粘度、血浆粘度及红细胞压积明显增高，大鼠血液处于高黏、高聚、高凝状态，这也与女性更年期病理变化相一致。经治疗后，与各模型组相比，各治疗组大鼠血清中E2水平明显上升，全血粘度、血浆粘度及红细胞压积水平显著下降，其中以次切治疗组群疗效最佳，说明穴位注射和中药茶均能提高去势雌性大鼠的雌激素水平，降低去势大鼠血液流变学的异常水平，且在卵巢渐衰的过程中，早期干预治疗有效。根据女性更年期的主要病机, 以调理脏腑、平衡阴阳为治疗法则，穴取肾俞、肝俞、气海、关元穴进行穴位注射。肾俞、肝俞为背俞穴，为脏腑气血输注的部位，能调肝补脾滋肾。气海、关元穴归属任脉，又与冲脉相通，可补益冲任、调经理宫、调血补气。丹红注射液有活血化瘀、通脉舒络之功效，由丹参和红花组成，丹参活血祛瘀、调经止痛、清心除烦、养血安神；红花性温、味辛，能通经散瘀、活血止痛。研究证实二者在含药血清中均具有雌激素样活性[12]，能在一定程度上调节更年期的激素水平紊乱。穴位注射疗法通过中医经穴-脏腑相关体系注射给药,将经络、腧穴、药物效应相结合，综合穴效和药效，以“疏其气血、令其条达”通过改善卵巢子宫组织的血液供应，维持卵巢分泌雌激素的功能，从而防治更年期综合征。中药茶方以红花活血化瘀、散郁开结，配以枸杞、菟丝子、旱莲草以补肾益肝、养精安神，佛手、合欢皮、玫瑰花、菊花疏肝理气解郁，浮小麦、百合宁心安神，共奏滋养肝肾、交通心肾、调和气血、调整脏腑之功效。中药茶方[13]以沸水为溶剂,既能防止成分挥发或酶解损失,又可使有效成分充分溶出；本茶方多采用花药，口感较传统中药方香甜，既具有中药复方的功效，又能发挥药物雌激素样作用，并减少了煎煮及服用中的不便之处，操作简单方便，更符合现代人的生活方式。

综上，穴位注射和中药茶可能通过降低血液粘稠度，改善卵巢子宫组织血液供应，维持卵巢分泌雌激素功能而提高去势大鼠E2水平，降低FSH水平，改善子宫组织形态从而治疗更年期。在卵巢渐衰的过程中，越早进行干预治疗，疗效更佳，为临床应用和早期干预治疗提供了理论依据。