脑梗塞患者血清可溶性内皮细胞蛋白C受体和血管性假性血友病因子的表达及临床意义

赵志强,崔妍妍

(1.南京医科大学附属苏州医院 检验科,江苏 苏州215001;2.苏州大学附属儿童医院 检验科,江苏 苏州215003)

脑梗塞又称缺血性脑卒中,是由于局部脑动脉血流突然减少或停止,造成脑组织缺血缺氧,甚至坏死,引起脑功能缺损的血管性事件[1]。脑梗塞发病凶险、致残率和致死率高,对人类健康危害巨大。脑梗塞病变机制复杂,目前尚未完全阐明,研究发现脑梗塞患者大多有血管壁、血流变或血液性质的病变,引起血管管腔狭窄、闭塞或血栓形成[2]。可溶性内皮细胞蛋白C受体(soluble endothelial protein C receptor,sEPCR)是近年来发现的由大血管内皮细胞合成并分泌的新型蛋白受体[3]；血管性假性血友病因子(von Willebrand factor ,vWF)是主要由血管内皮细胞合成的糖基化蛋白[4]。两者在一定程度上反应内皮损伤,而内皮功能受损是许多血管事件的始动环节[5],但对两者生物学功能的研究仍不完全,在各种疾病尤其是心脑血管疾病中的作用尚未不明确。本研究对脑梗塞患者血清sEPCR和vWF水平检测分析,探讨其在病情判断、疗效和预后转归中的价值。

1 资料与方法

1.1一般资料选择我院2014年1月-2016年12月收治的50例急性脑梗塞患者为研究对象,其中男性27例,女性23例,男女比1.17∶1,平均年龄(58±9)岁。用美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS )评估患者神经功能缺损情况,NIHSS≤3分者为轻度脑梗塞,>3且≤8分为中度脑梗塞,>8分者为重度脑梗塞。所有患者均在发病24hr内就诊,均符合中华医学会关于急性脑梗塞中的诊断标准[6]并经影像学检查确认,2周内未服用过抗凝和抗血小板聚集药物。另选择我院同期50例退休体检人员为对照组,其中男35例,女15例,男女比2.33∶1,平均年龄(61±8)岁,无严重基础性疾病,2周内未服用过抗凝和抗血小板聚集药物。两组入选者各一般资料之间具有可比性。

1.2仪器和试剂sEPCR和vWF检测试剂盒购自南京建成生物科技有限公司。DNM-9606型全自动酶标仪购自北京普朗医用设备有限公司。

1.3方法

1.3.1标本采集 所有纳入本次研究者均晨起空腹抽取2 ml静脉血于干燥管,2 000 rpm离心5 min分离血清,置4℃冰箱保存待测。

1.3.2血清sEPCR和vWF检测 采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测sEPCR和vWF浓度,根据试剂盒规程说明进行操作。利用标准蛋白浓度绘制标准曲线,得到吸光度(OD值)与浓度的计算方程,根据公式计算各标本sEPCR和vWF浓度。

1.3.3治疗 所有患者在明确诊断后尽早给予溶栓治疗,起病3hr内的患者给予重组组织型纤溶酶原激活剂溶栓,按0.9 mg/kg体重给药(最大不超过90 mg),前1 min内推注10%,余者1 h内静脉滴注；起病3-6 h内患者给予尿激酶静脉滴注,将150万单位尿激酶溶于200 ml生理盐水,30 min内注射完。用药期间密切监护患者各项生命体征。如有必要,在溶栓24 h后进行进一步抗凝治疗,配合20%甘露醇降低颅内压,同时给予其他对症和支持治疗,治疗前和治疗2周后进行血清sEPCR和vWF检测。

1.4统计学方法用SPSS11.0软件对结果分析处理,计量资料用均数±标准差表示,两组间均值比较采用Student’s T检测,相关分析采用Pearson相关分析,P<0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1脑梗塞患血清sEPCR和vWF水平

由表1可见,与对照组相比,脑梗塞患者血清sEPCR(t=7.678,P=0.003)和vWF水平显著升高(t=10.565,P=0.001)。

表1 脑梗塞患者与对照组血清sEPCR和vWF(μg/L)

**与对照组相比P<0.005

2.2脑梗塞患者治疗前后血清sEPCR和vWF水平

由表2可见,经2周溶栓、抗凝等对症治疗后,脑梗塞患者血清sEPCR(t=5.465,P=0.004)和vWF(3.262,P=0.038)水平较治疗前显著下降。

表2 脑梗塞患者治疗前后血清sEPCR和vWF(μg/L)

**与治疗前相比P<0.005,*与治疗前相比P<0.05

2.3不同严重程度的脑梗塞患者血清sEPCR、vWF水平

根据NIHSS评分,轻度、中度和重度脑梗患者治疗前血清sEPCR浓度分别为(113.76±7.47)μg/L、(125.43±9.62)μg/L和(148.23±8.57)μg/L,vWF 浓度分别为(8.65±2.47) μg/L、(10.43±3.62) μg/L和(14.72±4.56) μg/L(表3)。结果显示,随着脑梗塞严重程度升高,血清sEPCR和vWF浓度升高,两者呈正相关,相关系数分别为0.628和0.496,P<0.05。

表3 不同严重程度的脑梗塞患者血清sEPCR、vWF水平(μg/L)

根据出院6月后随访结果,经治疗后患者血清sEPCR和vWF浓度越低,肢体运动功能和神经功能恢复越好,后遗症越轻,提示我们治疗后血清sEPCR和vWF与脑梗塞患者预后密切相关。治疗后的血清sEPCR和vWF水平越高,后遗症越重,表现出一定程度正相关性,相关系数分别为0.437和0.378,P<0.05(表4)。

表4 治疗后血清sEPCR和vWF水平与后遗症(μg/L)

3 讨论

脑梗塞是发展中国家引起成人致死和致残的第二大因素,据报道我国每年有超过150万脑梗塞新发病例,且这一数字还在逐年增长。脑梗塞发病机制复杂,其中动脉粥样硬化引起的脑梗塞最为常见[7]。近来研究表明,内皮损伤和凝血系统失衡可能在脑梗塞中发挥重要作用。

蛋白C(PC)是一类维生素K依赖性蛋白酶原,与细胞表面EPCR结合后,激活成为APC。APC不但能使凝血因子Va和VIIIa失活,发挥抗凝作用[8]；还可以与膜连内皮细胞蛋白C受体或蛋白酶活化受体结合,发挥抗感染作用。免疫组化显示,仅在表达EPCR的血管表面检出PC,说明蛋白C的活化依赖膜连EPCR,无论APC发挥抗凝或抗炎作用,都必须要有膜连内皮细胞蛋白C受体的参与[9]。动脉粥样硬化(AS)是脑梗塞的基础病变,而炎症反应在AS中起重要作用。在脑梗塞小鼠模型中发现APC能通过下调血脑屏障粘附因子的表达,阻断白细胞通过血脑屏障,减轻脑梗塞后的脑组织炎症反应[10]。一些研究发现,血清sEPCR与膜连EPCR的功能相反,这也与我们的研究结果吻合。我们的研究中脑梗塞患者血清sEPCR浓度显著升高,经有效治疗后血小板在病损处过度活化聚集被纠正,炎症反应减轻,sEPCR浓度显著降低,且血清sEPCR浓度直接关系患者的预后,提示sEPCR可能参与体内高凝状态的形成和局部炎症损伤,是反应脑血管病变程度的良好指标。Yesilirmak DC等认为血清sEPCR可作为评估大血管疾病进展和治疗效果的一个指标,但其在脑梗塞中的作用和机制目前仍未完全明确,需进一步深入研究[11]。

vWF是反映内皮损伤和功能障碍的另一重要标志。AS斑块可引起血小板粘附和聚集,在狭窄部位促进vWF与血小板膜糖蛋白受体结合,促进局部形成血栓[12]。脑梗急性发作前,患者大多已处于高血压、高血脂、糖尿病等异常状态,内皮细胞受损时,vWF大量释放,引起血小板在损伤部位粘附和聚集[13]。畅慧君等研究发现,除了引起病理性纤维蛋白形成和血小板激活,vWF升高还和脑梗塞的分型、分期有关[14]。我们的研究发现,脑梗塞患者血清vWF水平显著高于正常对照组,表明脑梗塞急性发作时存在严重的内皮损伤,血小板活化,导致其聚集率显著增高；经过有效治疗,血小板的聚集率明显降低,vWF浓度也明显下降；vWF水平与脑梗塞神经功能评分结果有关,vWF水平越高,神经功能缺损越严重。vWF的监测对于脑梗溶栓、抗凝治疗均有重要价值,可能作为病情预测及判断的一个指标。

结合文献报告和我们的研究结果,我们提出sEPCR和vWF可能通过引起血小板活化、聚集,使血液呈高凝状态,并加重梗塞部位炎症反应,参与脑梗塞的损伤过程,未来需要更多实验对sEPCR和vWF参与脑梗塞损伤的机制做进一步研究。

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