鹌鹑不同采血方法对比与评价

2018-06-26李高玺林志健王海鸽

中国比较医学杂志 2018年6期

李高玺，林志健，张　冰，王海鸽

(北京中医药大学中药学院，北京　100029)

鹌鹑生长速度快，体型适中，是鸡形目中最小的品种，易于饲养管理，作为一种新型实验动物，鹌鹑已广泛应用于生物学与医学研究[1]。鹌鹑血液的获取是检测血清中相关生化指标的前提和基础。而简便、快速、有效的采血技术是获取实验用足够血液量、成功分离血清及准确测定指标的保证。本研究以雄性迪法克鹌鹑为研究对象，通过对鹌鹑翼根静脉、左颈静脉、右颈静脉三部位采血操作，评价鹌鹑不同采血方法，进而为医学研究中实验鹌鹑血液获取提供基础技术支持。

1　材料和方法

1.1　实验动物

迪法克鹌鹑300只，5周龄，雄性，体重(170±10)g，均购自北京市德岭鹌鹑养殖场，生产许可证号：110113600218082。饲养于北京中医药大学普通级动物实验室[SYXK(京)2016-0038]。伦理审查证号：1100000013479。饲养环境：室温20℃～26℃，相对湿度40%～60%。

1.2　主要试剂

一次性使用无菌注射器2 mL(山东颐兴医疗器械有限公司)；酒精消毒液(邯郸市捷利康商贸有限公司)。

1.3　实验方法

1.3.1实验分组

鹌鹑随机分为3组，分别为翼根静脉组、左颈静脉组、右颈静脉组，每组100只；各组均正常饮食饮水，每10 d对三组鹌鹑分别采用翼根静脉、左颈静脉、右颈静脉采血部位采血1次，实验重复5次。动物采血前称重并禁食不禁水12 h，在实验人员统一、操作环境一致的情况下，对鹌鹑三部位进行采血操作。

1.3.2鹌鹑捉持与固定方法

右手捉持鹌鹑，右手食指和中指分别扣于鹌鹑左右两肩之上，右掌心贴鹌鹑背，右手拇指和无名指、小指扣于鹌鹑腹部左右两侧，力度适中，避免鹌鹑死亡。左手自然平伸，上覆20×40 cm2清洁白布，软硬适中；使鹌鹑蜷腿卧于左掌心，左手拇指顺势带布绕过鹌鹑，右手向左裹住鹌鹑，交叉重复，完成包裹。(如图1)

注：(A)鹌鹑捉持；(B)鹌鹑固定。图1　鹌鹑捉持与固定Fig.1　The capture (A) and fixation (B) of a quail

1.3.3右颈静脉采血法

鹌鹑包裹完成后，使鹌鹑呈45°角放置腿部。左手食指与中指将鹌鹑脖颈夹于两指根缝部，中指微上挑，食指弯曲如半圆形整体向后推拂羽毛并略微下按，左右手拇指辅助食指将颈部羽毛按于食指之下，清除障碍，暴露血管，拇指轻压颈静脉近心端。此时，鹌鹑右颈部静脉血管怒张，若无怒张或怒张不显时，可左右拇指推移血管、指尖轻轻点压血管，同时左手食指下压、中指上挑微用力使鹌鹑颈部弯曲，暴露血管。在进针周围用碘伏或酒精消毒干燥后，右手持带针头2.0 mL注射器(6号针头)沿与静脉血管10°角进针0.3 cm左右，右手中指缓缓后移注射器管塞，食指稍放松，血量达到要求后，拔出针头，用棉球稍按压针口止血数秒至无出血，不能揉动采血部位，以防出血或瘀青。(如图2)

1.3.4左颈静脉采血法

鹌鹑左颈静脉采血手法与右侧相似；左手以食指和中指夹住鹌鹑头部，鹌鹑头部偏左，无名指、小指、手掌固定鹌鹑身体，拇指轻压颈部使血管怒张，在进针周围用消毒后，右手持带针头2.0 mL注射器(6号针头)沿与静脉10°角进针0.3 cm左右，抽取血液，采血结束后，棉球稍按压针口止血数秒至无出血，不能揉动采血部位，以防出血或瘀青。左颈静脉采血手法同理。(如图3)

1.3.5鹌鹑翼根静脉采血法

鹌鹑固定后，将其翅膀展开，露出腋窝，将细绒羽毛拔去，即能见到翼根静脉。在进针周围用碘伏或酒精消毒干燥后，左手拇指、食指压迫血管向心端，血管怒张后，右手用2.0 mL带针头注射器(6号针头)沿与静脉10°角进针0.3 cm左右，即可采血，采血成功后，用棉球按压止血数秒至无出血。(如图4)

1.3.6评价原则

在实验人员统一、操作环境一致的情况下，对鹌鹑三部位进行采血操作。对比三种采血方式，以短、中、长分别代表每只鹌鹑采血平均用时，以1～2 min、2～4 min、>4 min评价采血用时；以优劣代表血清质量，以血清析出量和血清是否溶血评价血清质量；以少、一般、多分别代表采血后皮下出血量，以每只鹌鹑进针位置平均出血圆周直径0～0.5 cm、0.5～1 cm、>1 cm评价皮下出血量。

2　结果

2.1　不同采血方式评价

每只鹌鹑平均采血用时：翼根静脉法>左颈静脉法>右颈静脉法；其中，如能熟练掌握右颈静脉采血技术，可将每只鹌鹑采血时间控制在3 min以内，此法创伤小，短时间内可对鹌鹑循环采血。血液质量：左右颈静脉法优于翼根静脉法；皮下出血量：翼根静脉法>左颈静脉法>右颈静脉法。(见表1)

注：(A)鹌鹑右颈静脉进针；(B)鹌鹑右颈静脉采血。图2　右颈静脉采血法Fig.2　Puncture into the right jugular vein (A) and after blood collection (B) of a quail

注：(A)鹌鹑左颈静脉；(B)鹌鹑左颈静脉采血。图3　左颈静脉采血法Fig.3　The exposed left jugular vein (A) and drawing blood from it (B) in a quail

注：(A)鹌鹑翼根静脉；(B)鹌鹑翼根静脉采血。图4　鹌鹑翼根静脉采血法Fig.4　The wing root vein is exposed (A) and blood sample is collected from it (B) in a quail

采血方法Blood sampling methods评价Evaluation采血用时Time for blood collection血清质量Serum quality 皮下出血量Subcutaneous bleeding翼根静脉法The wing root vein method长Long一般Fiar多A lot左颈静脉法Left jugular vein blood一般Fair优Good一般 Fair右颈静脉法Right jugular vein blood短Short优Good少Scanty

2.2　鹌鹑采血30 min后鹌鹑状态、饮食、活动情况

实验观察到翼根静采血后，鹌鹑状态一般，活动减少，食欲降低,饮水量增加；左颈静脉采血后，鹌鹑状态一般，闭眼次数较少，俯卧时间长，食欲降低, 饮水量增加；右颈静脉采血后，鹌鹑状态正常，活动情况与采血前无明显差异，食欲正常,饮水量增加。

2.3　鹌鹑不同采血部位比较

鹌鹑左、右两侧脖颈部均有约3×3 cm2面积皮肤均无羽毛生长，其表皮完全裸露，可看到清晰颈静脉。其中右颈静脉血管全部存于右侧，较为粗壮，存于浅表，血流量大，皮下脂肪较少，容易采血，操作简便，但其血管位置靠近气管，易使针头刺到气管，导致鹌鹑死亡；左侧颈静脉由右侧斜绕过脖颈至左侧，存于浅表，但血管相对较细，血流量相对少，针头易刺穿血管，引发血管周围血肿，同时也容易刺入颈椎，导致鹌鹑死亡；翼根静脉存于翅膀下，浅表皮下，血管微细且软嫩，血流量较少，皮下脂肪多，采血困难，易刺破血管，血流量较少，采血速度慢，易使血液注射器中堵塞，采血效率不高，采血后也极易形成进针口周围血肿。但操作对鹌鹑可保证其生命安全，不会因刺入颈椎或刺破气管而死亡。

3　讨论

鹌鹑，学名为Coturnixjaponica，具有体型小、易饲养、生长发育快、适应性广、耐密集型饲养、抗病力强、世代间隔短等优点。鹌鹑已被应用于遗传学、营养学、疾病防疫学、组织学、胚胎学、药理学的研究[2-3]。结合饲养以及实验操作的可行性，鹌鹑可作为实验动物塑造各种动物模型，如高尿酸血症模型[4-5]、高血尿酸高甘油三酯血症模型[6]、动脉粥样硬化治疗模型[7]、高脂血症[8-9]、脂肪肝模型等[10]。鹌鹑血清中各项生化指标常被作为评价药物的药效以及疾病模型的评价标准。如血清蛋白(TP)、血尿酸、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、总胆固醇(CHO)黄嘌呤氧化酶(XOD)等一系列尿酸、脂、糖代谢指标[13-16]。本课题组长期从事鹌鹑疾病模型塑造与中药防治研究，鹌鹑证候模型已被《中药药效研究方法学》《痛风病学》等工具书收载[11-12]。作为新型实验动物，鹌鹑的采血技术在文献中少见记载。成年鹌鹑体重在150～180 g之间，血液总量约占体重的6.5%。若采血操作不规范，会导致出血量过大，既危及鹌鹑的生命安全同时对后期血清中各项指标的检测产生影响。

本研究采用图文形式对鹌鹑采血方法对比展示，既适用于鹌鹑采血初学者，又对改良禽类采血方法有积极启示作用。通过对鹌鹑三个采血部位的对比与评价，研究人员可根据需要选择合适的取血部位。

3.1　鹌鹑采血部位选择

操作熟练的情况下，鹌鹑左、右颈静脉采血技术均简便、快速、采血量均可至1.0 mL以上，也可微量采血；能满足对不同日龄鹌鹑固定周期内连续采血的需求；对采血部位的损害相对小；适用于对需长期大批量采血的鹌鹑进行采血操作。鹌鹑翼根静脉翼根静脉血管微细且娇嫩，血流量较少，采血较困难，可进行微量或采血量0.5 mL以下的采血操作。

鹌鹑大量采血时可选用左右颈静脉采血法，少量或微量采血时三种方法均可采用。建议需血量0.5 mL以下采血操作熟练时，可以根据情况选择三者任一采血方法均可，若采用翼根静脉采血，建议使用4号针头或毛细点样管采血。若采血量需大于0.5 mL时，可选用左右颈静脉部位采血。