微小核糖核酸-21、金属基质蛋白酶-9、骨桥蛋白水平变化在PCI患者术后再狭窄中的预测价值

王全河，翟关群

经皮冠状动脉介入治疗（PCI），是指经心导管技术疏通狭窄甚至闭塞的冠状动脉管腔，是冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）治疗的一个里程碑。但随之而来的冠状动脉支架内再狭窄一致是困扰PCI术后患者康复的一个难题。PCI患者术后冠状动脉支架内再狭窄的发生严重影响冠心病患者PCI术后的临床疗效以及威胁患

者生命安全[1]。尽管近年来，药物洗脱支架的应用降低了短期支架内再狭窄的发生率，但最终支架内再狭窄的发生率仍很高[2]。如何早期判断支架内再狭窄的发生，以调整术后用药方案及进一步对症治疗，对提高PCI患者术后的临床疗效具有重要意义。有研究表明，冠状动脉支架内再狭窄的发生与血管平滑肌细胞的过度增生关系密切，微小核糖核酸（miRNA）是一类内源性的非编码RNA，其在血管组织中稳定表达并在血管功能紊乱、血管新生内膜形成中具有重要作用[3]。OPN为细胞外基质中的一种功能性蛋白，其在血管平滑肌细胞的增殖、迁移过程中发挥着重要作用[4]。MMP-9是细胞外基质中的一种水解酶，既往研究证实其参与了血小板激活、血管平滑肌细胞的迁移、内膜增生与外膜重构等过程，其与PCI术后支架内再狭窄的发生密切相关[5]。本研究通过分析PCI患者术后的临床资料和血清中miRNA-21、MMP-9及OPN表达水，探讨其与PCI患者术后支架内再狭窄的关系，并未再狭窄的早期诊断提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象选择2014年1月～2016年1于郑州市中心医院心内科收治的PCI支架置入术后复查冠状动脉造影患者110例作为观察对象。110例患者中男性62例，女性48例，平均年龄59.97±11.06岁，包括：急性冠脉综合征68例，稳定性心绞痛42例，均为首次接受PCI支架置入术患者。再狭窄判定标准：无心绞痛发作患者，1年后复查冠状动脉造影，如心绞痛发作及时复查冠状动脉造影；依据冠状动脉造影结果，支架内及支架周围5 mm范围血管管腔直径狭窄≥50%，将观摩对象分为再狭窄组（n=17例）和未再狭窄组（n=93例）。排除标准[6]：①合并肝肾等重要脏器功能不全，严重心功能不全者（左室射血分数＜40%）；②存在PCI史、心肌梗死病史或冠状动脉旁路移植史者；③恶性肿瘤或自身免疫性疾病者。两组患者的年龄、性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本次研究经患者签署知情同意书，并得到我院伦理委员会核准。

1.2 方法

1.2.1 临床信息采集患者入组后详细记录年龄、性别、既往病史及合并症等临床资料，所有患者均适合并进行PCI药物洗脱支架治疗。详细记录置入支架数量、直径及长度等资料，术后随访1年，记录用药情况。

1.2.2 实验室指标检测110例患者均于复查冠状动脉造影的第2 d，空腹12 h后清晨静脉采集血压标本10 ml分为2份，1份医用离心机3000 r/min离心10 min分离血清，取上清液置于-80℃待测；1份行血常规测定：C反应蛋白（CRP）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）及血糖等检测。OPN及MMP-9采用用酶联免疫吸附法进行测定，试剂盒购自美国ARD公司。

1.2.3 miRNA表达水平检测miRNA-21表达水平采用实时逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）进行检测。采用美国Invitro-gen公司产品进行RNA提取及保存，确保纯度符合要求，以总RNA为模板进行逆转录反应，以cDNA为模板荧光定量PCR，琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，然后以miR39为外参基因，采用相对定量方法计算。

1.3 统计学分析本研究采用SPSS 19.0进行数据分析。计量资料用（±s）表示，两组间比较采用t检验，计数资料用例数（百分比）表示，两组间比较采用卡方检验。对可能影响PCI患者支架置入术后再狭窄的影响因素进行多变量Logistic回归分析。采用受试者工作曲线（ROC曲线）评价miRNA-21、OPN及MMP-9表达水平在预测PCI患者术后再狭窄中的区分价值。以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的临床基线资料比较再狭窄组患者的支架置入数量较未再狭窄组少，支架直径较未再狭窄组小，累及前降支、三支病变例数明显多于未再狭窄组，组间比较上述差异均有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

2.2 两组患者的miRNA-21表达水平及各生化指标比较与未再狭窄组比较，再狭窄组患者的miRNA-21、CRP、MMP-9及OPN表达水平均显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表1 两组患者的临床基本资料比较

表2 两组患者的miRNA-21表达水平及各生化指标比较（±s）

表2 两组患者的miRNA-21表达水平及各生化指标比较（±s）

注：miRNA-21：微小核糖核酸-21；CRP：C反应蛋白；MMP-9：金属基质蛋白酶-9；OPN：骨桥蛋白；TG：三酰甘油；TC：总胆固醇

（n=17）（n=93）miRNA-21 0.86±0.15 0.35±0.07 22.315 0.000 CRP（mg/L） 8.31±1.69 6.62±2.56 2.614 0.010 MMP-9（ng/ml） 448.23±47.52 381.74±64.61 4.041 0.000 OPN（ng/ml） 4.85±0.96 3.13±1.13 5.893 0.000血糖（mmol/L） 6.39±4.49 6.83±1.34 0.785 0.434 TG（mmol/L） 1.41±0.45 1.38±0.37 0.297 0.767 TC（mmol/L） 5.16±1.79 4.56±1.42 1.536 0.127

2.3 患者术后再狭窄的多因素Logistic回归分析将可能影响PCI患者支架置入术后再狭窄的影响因素，包括：年龄、性别、合并症、高血压、糖尿病、高脂血症史、累及前降支、三支病变、置入支架情况、术后用药种类、miRNA-21表达水平及各生化指标作为协变量，以术后发生狭窄为因变量，进行多因素Logistic回归分析，结果显示，miRNA-21、OPN、MMP-9及支架直径均对支架置入术后再狭窄具有预测价值，而miRNA-21、OPN及MMP-9有独立的预测价值（P均＜0.05），较大的支架直径是支架置入术后再狭窄的保护因素（P＜0.05）（表3）。

表3 患者术后再狭窄的多因素Logistic回归分析结果

2.4 miRNA-21、OPN及MMP-9单项及联合检测对术后支架内再狭窄的预测能力评价ROC曲线分析血清miRNA-21、OPN及MMP-9是否可以区分支架置入术后再狭窄。血清miRNA-21的AUC为0.898，95%CI（0.825～0.947）（P＜0.05）；血清OPN的AUC为0.782，95%CI（0.723～0.855）（P＜0.05）；血清MMP-9的AUC为0.739，95%CI（0.647～0.818）（P＜0.05）；联合检测的AUC为0.977，95%CI（0.952～0.999）（P＜0.01）（图1）。对血清miRNA-21、OPN及MMP-9表达水平预测支架置入术后再狭窄进行效果评价（表4）。

3 讨论

研究表明，冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的发病率逐年上升，其已成为威胁人类健康及生命安全的重要疾病之一，其病理机制主要是冠状动脉粥样硬化、阻塞或狭窄所引起的心肌细胞缺血或坏死[7]。目前，对于冠心病引起的血管狭窄，最可靠、有效的治疗方式为在药物治疗的基础上进行PCI术，PCI在临床上得到广泛应用。然而，术后再狭窄的发生严重影响了PCI的治疗效果，研究表明，PCI术半年后扩张部位有20%～30%几率出现再狭窄[8]。虽然药物洗脱支架的使用降低了再狭窄的发生，但仍有5%～10%的发生率[9]。因此，对PCI患者术后再狭窄的筛查及早期诊断尤为重要。

图1 血清miRNA-21、OPN及MMP-9单项及联合检测的ROC曲线

表4 miRNA-21、OPN及MMP-9预测术后再狭窄的效果评价

本研究将可能影响PCI患者支架置入术后再狭窄的影响因素进行多因素Logistic回归分析，结果显示，miRNA-21、OPN及MMP-9表达水平升高均是发生术后支架内再狭窄的独立危险因素（P均＜0.05），与相关文献报道结果一致[10]。研究表明，PCI术后支架的置入，易引起血管内皮细胞损伤，机体损伤自我修复过度则可引起血管再狭窄[11]。PCI术中导致的血管壁损伤可引起炎症反应、血管内膜过度增殖及血栓形成等，这些因素最终引起血管重塑，导致PCI术后再狭窄发生。骨桥蛋白（OPN）为细胞外基质中的一种功能性蛋白，其参与了骨代谢、炎症及免疫等过程[12]。研究发现，OPN在血管平滑肌细胞的迁移、增殖及黏附过程中均有重要作用，是血管损伤修复的重要始动因素[13]。近年来，有研究指出，OPN共同参与了血管新生内膜的形成，导致血管重塑及PCI术后支架内再狭窄的发生[14]。miRNA-21是微小RNA（miRNA）家族中的亚型之一，既往研究表明，其在肿瘤、心血管疾病等病理状态下呈高表达水平[15]，其对平滑肌细胞增殖具有促进作用，可拮抗细胞凋亡，影响血管壁新生内膜形成，从而参与了血管狭窄发生的病理过程。MMP-9是金属基质蛋白酶家族中的一员，是细胞外基质中的一种内源性水解酶，大量临床研究表明其参与PCI术后支架内再狭窄的发生[16,17]。以上均显示miRNA-21、OPN及MMP-9表达水平与PCI术后支架内再狭窄发生的病理过程关系密切，在本研究中，我们观察到再狭窄组患者的miRNA-21、OPN及MMP-9表达水平均明显高于未再狭窄组，且多因素Logistic回归分析显示均为术后支架内再狭窄的独立危险因素。在miRNA-21、OPN及MMP-9单项及联合检测对术后支架内再狭窄预测能力的ROC曲线中，其曲线下AUC面积分别为0.898、0.782、0.739及0.977，联合检测可增加预测的特异性（94.62%）、准确性（90.91%）及阳性预测值（94.62%）。这进一步证实了miRNA-21、OPN及MMP-9与术后支架内再狭窄的发生关系密切，联合检测可作为PCI患者术后支架内再狭窄的可靠预测指标。

综上所述，miRNA-21、OPN及MMP-9表达水平升高与PCI患者术后支架内再狭窄关系密切，联合检测对PCI患者术后支架内再狭窄具有较高的预测价值。

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