子宫颈癌组织中miR-126异常表达的意义

陆义红，蒋莉莎，宋恩学(安徽医科大学第二附属医院，合肥230601)

子宫颈癌是女性最为常见的恶性肿瘤之一，研究表明其发生发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关[1～3]。microRNA(miRNA)是一类非编码小RNA分子，通过结合靶基因的3'非编码区而调节靶基因的表达，从而参与重要的生理病理过程[4，5]。miRNA在细胞增殖、分化、凋亡等过程中起重要作用，肿瘤组织中也存在大量的miRNA异常表达[6，7]。研究表明，miRNA与多种肿瘤进程相关，在不同肿瘤中存在特异性表达，可作为肿瘤发生及预后的重要生物标志物[8]。miR-126在乳腺癌、结肠癌、白血病、胰腺癌等多种肿瘤组织中表达下调，可抑制肿瘤细胞侵袭转移[9]，但miR-126在子宫颈癌组织中的表达鲜有报道。本研究探讨子宫颈癌组织中miR-126表达变化与患者临床病理特征、疗效及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 随机选取2008年11月～2016年11月本院收治的子宫颈癌患者98例，于入院后行肿瘤标志物及MRI检查，符合子宫颈癌的诊断标准[10]，均采用广泛子宫切除(EH)联合盆腔淋巴结清扫术(LPL)治疗，术中留取子宫颈癌组织，均经病理检查确诊。患者年龄29～71(53.17±3.56)岁，国际妇产科联盟(FIGO)临床分期为Ⅰa2期23例、Ⅰb1期21例、Ⅰb2期18例、Ⅱa期31例、Ⅱb期5例，鳞状细胞癌54例、腺癌30例、腺鳞癌14例，高分化25例、中分化66例、低分化41例，病理分级为G1 32例、G2 19例、G3 47例，无淋巴结转移66例、淋巴结转移32例。纳入标准：患者未行宫颈放化疗等抗肿瘤治疗，生殖道解剖结构正常，自愿签署知情同意书。排除标准：存在免疫缺陷相关合并症、合并其他恶性肿瘤。本研究经医院伦理委员会审核批准。

1.2 子宫颈癌组织中miR-126表达检测 采用荧光定量PCR法。将子宫颈癌组织标本匀浆破碎，按照TRIzol试剂(Invitrogen)说明书进行总RNA提取，DEPC水溶解RNA。RNA逆转录反应参照HairpinitTM miRNAs qPCR Quantitation Kit试剂盒说明书，反应体系20 μL：包括total RNA 1 μg、oligo(dT)0.5 μL、Random primer 0.5 μL、Random primer 0.5 μL、10 mmol/L dNTP 2 μL、RNase inhibitor 0.5 μL、5×buffer 4 μL、M-MLV 0.5 μL，剩余用H2O(RNase free)补齐；反应条件：16 ℃ 30 min合成RNA/DNA杂合双链，42 ℃ 30 min水解RNA链，85 ℃ 5 min合成DNA双链。采用Applied Biosystems 7500仪器进行荧光定量PCR，反应条件：95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 s， 60 ℃退火1 min，共40个循环。实验重复3次。逆转录与荧光定量PCR试剂盒均购自美国Applied Biosystems公司。采用2-ΔΔCt法计算miR-126的相对表达量，以U6 mRNA为内参。miR-126的相对表达量高于其平均值为高表达，低于或等于其平均值为低表达。

1.3 随访 两年内患者定期回医院复查。随访内容包括盆腔检查、阴道检查脱落细胞学检查、胸部X线检查、血常规及宫颈鳞状细胞癌抗原检测等。记录患者复发(出现新的病灶或肿大淋巴结)及生存情况。若2年内未复发为治疗有效，若复发为治疗无效)。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料用例数与百分数表示，比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-126表达与子宫颈癌患者临床病理参数的关系 miR-126的表达与子宫颈癌分化程度、临床分期、病理分级及淋巴结转移等有关(P均<0.05)，与年龄、分型、肿瘤直径无关(P均>0.05)。见表1。

表1 miR-126表达与子宫颈癌患者临床病理参数的关系[例(%)]

2.2 miR-126表达与疗效及预后的关系 术后2年，miR-126高表达41例中治疗有效34例(82.93%)、无效7例(17.07%)；低表达57例中治疗有效39例(68.42%)、无效18例(31.58%)；二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。术后2年，miR-126高表达41例中生存37例(90.24%)、死亡4例(9.76%)；低表达57例中生存46例(80.70%)、死亡11例(19.30%)，二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

近年来，子宫颈癌的发病率逐年升高，位于女性恶性肿瘤的第二位。人们生活工作压力增大、免疫力低、首次性生活年龄<16岁、生活习惯不良等，都会导致宫颈癌的发病率升高[1]。全球每年约有20多万女性死于子宫颈癌，严重威胁女性身心健康[2]。目前，子宫颈癌患者日趋年轻化。子宫颈癌的发展是一个渐变到突变的过程，因此早诊断早治疗是关键[12]。临床治疗子宫颈癌主要采取手术治疗，主要目的在于切除原发病灶及周围癌变组织，并且遵循避免盲目扩大手术范围、减少术后并发症的原则，提高患者的生存质量[13]。随着近年医学研究的发展，腹腔镜技术应用较为广泛，LRH治疗子宫颈癌技术越发成熟，患者更易于接受。因此本研究均采用LRH联合LPL的治疗方案[14]。

有关miRNA与肿瘤的研究越来越深入。miRNA在肿瘤的进程中起重要作用，尤其可对在肿瘤发生和侵袭转移中直接参与的基因进行表观调控[13]。部分miRNA在人类肿瘤组织中存在异常表达，被鉴定为癌基因、抑癌基因，为肿瘤特异性诊断和治疗提供了新的靶点[14]。miRNA位于基因组中常发生变异的区域，而这些区域的变异会伴随肿瘤的发生[15，16]。相关研究显示，miR-126在不同的肿瘤组织中均存在表达异常[17～20]，在胃癌组织中miR-126的表达与淋巴结转移和组织分化程度有关，此外miR-126可抑制胃癌细胞的侵袭[17]。Crk基因是miR-126的靶基因，miR-126可通过抑制Crk的表达而抑制非小细胞肺癌的侵袭转移[18]。

本研究结果显示，miR-126的表达与子宫颈癌分化程度、临床分期、病理分级及淋巴结转移等有关，与年龄、分型、肿瘤直径无关，提示miR-126可能在宫颈癌的进程中发挥重要作用。术后2年，miR-126高表达患者的疗效优于低表达患者，复发率、病死率低于低表达者。miR-126低表达的子宫颈癌患者易复发及死亡。可见miR-126在子宫颈癌组织中发挥抑癌基因样作用。本研究为miR-126成为子宫颈癌临床治疗靶点与预后预测的生物标记物提供了理论基础。

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