人参皂苷Rg3对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和侵袭的影响

郭 琪，袁明慧，郭宇飞*

（1．河南中医药大学第二附属医院，河南 郑州 450002；2．河南中医药大学，河南 郑州 450002）

乳腺癌目前在临床上的发病呈逐渐上升并且倾向于年轻化的趋势，由于死亡率高、患者的远期预后差等，可严重影响女性生活质量和身心健康[1]。最长用的治疗方法为新辅助化疗法，但各种化疗药物均具有较强的毒副作用，给病人带来巨大的痛苦[2]。因此，寻求新的绿色天然抗癌药物就显得尤为重要，相关研究表明[3]，提取自人参的皂苷Rg3，具有增效解毒、提高免疫力的作用，并且对肿瘤细胞增殖、浸润和转移等有一定的抑制作用。因此据此本文通过具体实验方法观察人参皂苷Rg3对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖和侵袭的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

人乳腺癌MDA-MB-231细胞由北京中医药大学中心实验室提供，培养于RPMI-1640完全培养液（10%胎牛血清，青霉素-链霉素双抗溶液）中，取对数生长期的细胞进行实验。人参皂苷Rg3（98.5%）由吉林亚泰制药有限公司提供，用完全培养基配制成600 µg·mL-1的储存液，保存于-20℃冰箱中备用。

1.2 MTT 法分析细胞增殖

首先使用胰蛋白酶消化对数期生长的贴壁细胞，用含10%胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）的RPMI-1640（HyClone）培养液配制成细胞悬液（浓度为1×105个·mL-1），接种于96孔板中，每孔100 µL；实验组各加入不同浓度的人参皂苷Rg3（50、100、200、400、600 µg·mL-1），对照组为DMSO溶剂；24 h和48 h后每孔分别加入5 mg·mL-1MTT溶液（Sigma）20 µL，最终通过酶标仪于570 nm处测定每孔吸光度（OD）值，细胞增殖抑制率（%）计算公式为：（对照组OD值-实验组OD值/对照组OD值）×100%。

1.3 细胞划痕实验观察细胞的侵袭能力

取对数生长期的细胞，使用不同浓度的人参皂苷Rg3（50、100、200μg·ml-1）作用48 h后，将细胞进行消化、分离、离心沉淀、酒精固定，经过Annexin-V和碘化丙啶（PI）双染色法进行染色后在Elite ESP型流式细胞仪（美国Coulter公司）分析细胞周期分布情况和细胞凋亡率。

1.4 数据统计分析

采用SPSS 19.0软件进行数据统计分析，组间比较使用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结 果

细胞增殖影响分析中研究数据显示随着作用时间的延长以及药物浓度的增加，人参皂苷Rg3对人乳腺癌MDAMB-231细胞的增殖相关抑制作用亦逐渐增强，两者间呈正相关关系（表1）；MTT法分析中亦显示50、100、200 μg·mL-1浓度的人参皂苷Rg3能显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭指数（P＜0.01）。

表1 人参皂苷Rg3对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作（±s）

表1 人参皂苷Rg3对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作（±s）

组别/μg·mL-1 24 h 48 h OD值（n=3） 抑制率/% OD值（n=3） 抑制率/%0 0.941±0.019 - 1.035±0.387 -50 0.845±0.008 10.2 0.847±0.330 18.2 100 0.737±0.406 21.7 0.753±0.313 27.2 200 0.664±0.329 29.4 0.680±0.187 34.3 400 0.560±0.246 40.5 0.475±0.188 54.1 600 0.417±0.223 55.7 0.369±0.350 64.3

3 讨 论

本研究旨在探究人参皂苷Rg3对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及侵袭能力的影响，结果初步显示该试剂对癌细胞的生物活性具有较强的抑制作用。人参皂苷Rg3的抗肿瘤作用已经引起广泛重视，有研究证实[4]人参皂苷Rg3能够通过促进MGBA的表达从而抑制肿瘤细胞的增值；相关研究发现[5]MGBA在乳腺癌组织中过表达，在非乳腺癌组织中极少表达。本实验研究结果显示，人参皂苷Rg3能有效抑制MDA-MB-231细胞的增值和侵袭，其可能的作用机制为人参皂苷Rg3通过干扰乳腺癌细胞MDA-MB-231MGBA基因的表达，影响H2S/CSE系统的活性来最终得以实现，有必要行进一步研究证实具体的相关信号通路，以为临床的诊疗研究提供更为确切的证据。

[1] 黄立芳,芦文娟.乳腺癌合并抑郁症研究进展[J/OL].辽宁中医药大学学报,2017,(12):1-4.

[2] 江 昌,缪雨青,周文丽,王杰军.人参皂苷Rg3的抗肿瘤作用及研究进展[J].临床肿瘤学杂志,2017,22(07):664-667.

[3] 于 欢.人参皂苷Rg3脂质体的研究[D].吉林大学,2013.[2].

[4] 孙大鹏,顾立学,李晨光,张凤香.人参皂苷Rg3通过人乳腺珠蛋白A促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其可能的机制[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2017,24(06):615-619.

[5] 王会东.血清乳腺珠蛋白与乳腺癌相关性的初步研究[J].潍坊医学院学报,2016,38(02):138-140.