口腔鳞癌组织SOX4、E-cadherin表达及其临床意义

张建全，张翀

(1天津医科大学宝坻临床学院，天津301800；2中国医科大学口腔医学院)

据统计，口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)约占头颈部肿瘤的1/3[1]。口腔鳞癌患者5年生存率为50%～60%[2]。肿瘤细胞的上皮间质转化(EMT)过程是肿瘤细胞转移的关键步骤。性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(SOX4)属于转录因子SOX家族成员，其编码基因定位于染色体6q22.3，参与调节肿瘤细胞的EMT过程，进而促进肿瘤细胞转移[3,4]。E钙黏附蛋白(E-cadherin)是一种重要的EMT相关蛋白，在多种肿瘤组织中异常表达[5]。本研究观察了口腔鳞癌组织SOX4和E-cadherin表达变化，现分析结果并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2014年1月～2015年12月天津医科大学宝坻临床学院收治并行手术治疗的口腔鳞癌患者91例(观察组)。纳入标准：①术后病理检查诊断为口腔鳞癌；②术前未接受放化疗；③临床病理资料完整。排除标准：合并其他恶性肿瘤、全身感染性疾病、严重肝肾功能不全等。其中，男48例、女43例，年龄≤55岁51例、>55岁40例；肿瘤直径≤3 cm 45例，>3 cm 46例；分化程度为低分化31例，中高分化60例；肿瘤形态为外生型39例，浸润型52例；有淋巴结转移61例，无淋巴结转移30例；临床分期Ⅰ、Ⅱ期69例，Ⅲ、Ⅳ期22例。对照组为50例同期健康志愿者，男28例、女22例，年龄≤55岁26例、>55岁24例。两组性别比例、年龄分布具有可比性。本研究已获天津医科大学宝坻学院医学伦理委员会批准，患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 口腔癌组织及正常组织SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA检测 采用实时荧光定量PCR法。取手术切除的口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织标本(取自两颊)，置于EP管中，加入TRIzol溶液1 mL，采用微量电动组织匀浆器进行组织匀浆，然后依次加入氯仿、异丙醇、75%乙醇，提取组织总RNA。微量分光光度计检测总RNA纯度及浓度。取500 ng总RNA，参照反转录试剂盒说明书将总RNA反转录为cDNA，置于- 80 ℃冰箱中保存备用。取cDNA采用实时荧光定量PCR法检测SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA相对表达量。SOX4、E-cadherin、GAPDH引物序列由上海吉玛制药技术有限公司合成。 PCR反应体系及反应条件均参照实时荧光定量 PCR试剂盒(SYBR Green)说明书。采用2-ΔΔCt法计算目的mRNA相对表达量。

1.3 口腔鳞癌组织SOX4 mRNA与E-cadherin mRNA表达的相关性分析 采用Spearman相关分析。分析口腔鳞癌组织SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA相对表达量与患者临床病理参数关系及二者表达的关系。

2 结果

2.1 两组SOX4、E-cadherin mRNA相对表达量比较 观察组SOX4 mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05)，E-cadherin mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA相对表达量比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.2 口腔鳞癌组织SOX4、E-cadherin mRNA表达与患者临床病理参数的关系 口腔鳞癌组织SOX4 mRNA表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、类型均无关(P均>0.05)，与组织分化程度、淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05)；组织分化程度低、有淋巴结转移和临床分期Ⅲ、Ⅳ期患者肿瘤组织SOX4 mRNA相对表达量较高(P均<0.05)。口腔鳞癌组织E-cadherin mRNA表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤形态不相关(P均>0.05)，而与组织分化程度、淋巴结转移、临床分期显著相关(P均<0.05)；组织分化程度低、有淋巴结转移和临床分期Ⅲ、Ⅳ期患者肿瘤组织E-cadherin mRNA表达水平较低(P均<0.05)。见表2。

表2 口腔鳞癌组织SOX4、E-cadherin mRNA表达与患者临床病理参数的关系

2.3 口腔鳞癌组织SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA表达关系 口腔鳞癌组织SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA表达呈负相关(r=-0.735，P=0.000)。

3 讨论

EMT是指上皮细胞向间质细胞的转化过程，细胞转化后具备转移和侵袭能力。EMT不仅在生长发育过程中起着关键作用，还与组织愈合、器官纤维化和肿瘤转移等密切相关[6]。SOX4是介导肿瘤细胞EMT的关键因子之一[7]。正常情况下，SOX4可促进胚胎发育和细胞分化[8]。SOX4在多种肿瘤细胞中表达升高，且SOX4高表达与肿瘤恶性进展、不良预后密切相关[9]。多种机制可调控SOX4基因表达，如微小RNA(miRNA)和长链非编码RNA(lncRNAs)可通过增强SOX4基因表达诱导EMT，进而促进肿瘤细胞发生淋巴结转移或远处转移[10～12]。E-cadherin表达缺失为EMT的关键步骤之一。E-cadherin表达缺失可导致上皮细胞间的极性消失，细胞骨架重构，转移能力增强，最终导致肿瘤发生淋巴结转移或远处转移[13]。本研究结果显示，口腔鳞癌组织SOX4 mRNA表达升高而E-cadherin mRNA表达降低，提示在口腔鳞癌发生过程中SOX4发挥促癌作用而E-cadherin则发挥抑癌作用。本研究相关分析显示，口腔鳞癌组织SOX4 mRNA与E-cadherin mRNA表达呈负相关关系，提示两者在口腔鳞癌形成过程中发挥拮抗作用。SOX4作为转录因子，可能通过调控EMT相关基因表达，参与并促进EMT。由此推测，SOX4可能参与调控E-cadherin基因表达，后续研究将对此推论进行验证。

本研究还发现，口腔鳞癌组织SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA表达与组织分化程度、淋巴结转移和临床分期均相关。提示SOX4 mRNA高表达者肿瘤分化程度较低、可能存在淋巴结转移以及可能处于较晚的临床分期。Watanabe等[14]研究亦证实，SOX4 高表达与口腔鳞癌组织分化程度和淋巴结转移相关，本研究结果与其一致。多项研究证实，E-cadherin低表达与口腔鳞癌组织分化程度、淋巴结转移有关[15,16]。本研究组织分化程度较低、有淋巴结转移和临床分期较晚患者口腔鳞癌组织E-cadherin表达较低。提示SOX4高表达和E-cadherin低表达的口腔鳞癌患者预后较差。

综上所述，SOX4高表达和E-cadherin 低表达可促进口腔鳞癌的发生、发展；SOX4和E-cadherin具有作为口腔鳞癌治疗靶标的潜力。

参考文献：

[1] Torre LA,Bray F,Siegel RL,et al. Global cancer statistics,2012[J]. CA Cancer J Clin,2015,65(2):87-108.

[2] Lewis CM,Weber RS. Performance improvement in head and neck cancer[J]. Curr Oncol Rep,2018,20(1):1.

[3] Wang L,Zhang J,Yang X,et al. SOX4 is associated with poor prognosis in prostate cancer and promotes epithelial-mesenchymal transition in vitro[J]. Prostate Cancer Prostatic Dis,2013,16(4):301-307.

[4] Xiao L,Zhou X,Liu F,et al. MicroRNA-129-5p modulates epithelial-to-mesenchymal transition by targeting SIP1 and SOX4 during peritoneal dialysis[J]. Lab Invest,2015,95(7):817-832.

[5] Zhou J,Tao D,Xu Q,et al. Expression of E-cadherin and vimentin in oral squamous cell carcinoma[J]. Int J Clin Exp Pathol,2015,8(3):3150-3154.

[6] Guo M,Mu Y,Yu D,et al. Comparison of the expression of TGF-β1,E-cadherin,N-cadherin,TP53,RB1CC1 and HIF-1α in oral squamous cell carcinoma and lymph node metastases of humans and mice[J]. Oncol Lett,2018,15(2):1639-1645.

[7] Parvani JG,Schiemann WP. Sox4,EMT programs,and the metastatic progression of breast cancers: mastering the masters of EMT[J]. Breast Cancer Res,2013,15(4):R72.

[8] Poncy A,Antoniou A,Cordi S,et al. Transcription factors SOX4 and SOX9 cooperatively control development of bile ducts[J]. Dev Biol,2015,404(2):136-148.

[9] Wang B,Li Y,Tan F,et al. Increased expression of SOX4 is associated with colorectal cancer progression[J]. Tumour Biol,2016,37(7):9131-9137.

[10] Bai JW,Wang X,Zhang YF,et al. MicroRNA-320 inhibits cell proliferation and invasion in breast cancer cells by targeting SOX4[J]. Oncol Lett,2017,14(6):7145-7152.

[11] Xi J,Feng J,Zeng S. Long noncoding RNA lncBRM facilitates the proliferation,migration and invasion of ovarian cancer cells via upregulation of Sox4[J]. Am J Cancer Res,2017,7(11):2180-2189.

[12] Wang D,Gao ZM,Han LG,et al. Long noncoding RNA CASC2 inhibits metastasis and epithelial to mesenchymal transition of lung adenocarcinoma via suppressing SOX4[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci,2017,21(20):4584-4590.

[13] Ozaki-Honda Y,Seki S,Fujiwara M,et al. Prognostic prediction of oral squamous cell carcinoma by E-cadherin and N-cadherin expression in overall cells in tumor nests or tumor cells at the invasive front[J]. Cancer Microenviron,2017,10(1-3):87-94.

[14] Watanabe M,Ohnishi Y,Wato M,et al. SOX4 expression is closely associated with differentiation and lymph node metastasis in oral squamous cell carcinoma[J]. Med Mol Morphol,2014,47(3):150-155.

[15] Mohtasham N,Anvari K,Memar B,et al. Expression of E-cadherin and matrix metalloproteinase-9 in oral squamous cell carcinoma and histologically negative surgical margins and association with clinicopathological parameters[J]. Rom J Morphol Embryol,2014,55(1):117-121.

[16] Jiang Y,Liao L,Shrestha C,et al. Reduced expression of E-cadherin and p120-catenin and elevated expression of PLC-γ1 and PIKE are associated with aggressiveness of oral squamous cell carcinoma[J]. Int J Clin Exp Pathol,2015,8(8):9042-9051.