SLE患者外周血单个核细胞miR-21、miR-155表达变化及其机制

喻少波，范小杰，周子朋，朱建新

(1 常州市第一人民医院，江苏常州 213003；2 河南省中医院)

系统性红斑狼疮(SLE)是临床较为常见的自身免疫性疾病，具有临床表现复杂、易累及多脏器系统的特点，其主要的免疫性特征是B淋巴细胞异常活化、大量自身抗体产生以及免疫复合物沉积[1，2]。SLE的具体发病机制尚未完全明确，临床治疗急性活动期SLE主要以诱导缓解、控制病情为主，待病情稳定后予以维持治疗[3]。糖皮质激素和免疫抑制剂是目前治疗SLE的主要药物，不但可增加患者感染风险，还会因感染而加剧病情[4]。寻找新的SLE治疗或监测靶点是目前临床研究的热点。微小RNA-21(miR-21)和微小RNA-155(miR-155)是近年研究较多的两个免疫相关微小RNA。本研究探讨miR-21、miR-155在SLE发生、发展中的作用及其机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2016年1月～2017年9月常州市第一人民医院收治的SLE患者45例(SLE组)。纳入标准：①符合1997年美国风湿病学会SLE诊断标准[5]；②年龄>18岁；③临床资料完整。排除标准：①有其他风湿性疾病；②合并其他全身性疾病；③妊娠期或哺乳期妇女；④伴神经系统疾病或交流沟通障碍。根据中华医学会风湿病学分会《系统性红斑狼疮诊断及治疗指南》[6]，患者病情为轻度24例，男4例、女20例，年龄20～68(38.52±11.57)岁；病情为中重度21例，男4例、女17例，年龄19～71(39.65±12.33)岁。另取同期在该院体检的健康者30例作为对照组，男3例、女27例，年龄22～69(38.15±11.62)岁。两组性别比例、年龄具有可比性。本研究已获常州市第一人民医院医学伦理委员会批准，入组者均签署知情同意书。

1.2 外周血单个核细胞miR-21、miR-155及骨形成蛋白2(BMP-2)、骨形成蛋白受体Ⅱ(BMPRⅡ)mRNA检测 采集两组清晨空腹静脉血6 mL，用梯度离心法分离外周血单个核细胞，用PBS重复洗涤3次，收集贴壁细胞，置入RPMI 1640培养液，37 ℃、5% CO2条件下培养。采用实时荧光定量PCR法检测两组外周血单个核细胞中miR-21、miR-155及BMP-2、BMPRⅡmRNA。miR-21、miR-155、BMP-2、BMPRⅡ及内参U6上下游引物均由Realgene公司设计合成。 PCR反应条件：94 ℃预变性60 s，94 ℃、45 s，56 ℃、30 s，74 ℃、30 s，共36个循环。采用2-ΔΔCt计算miR-21、miR-155、BMP-2 mRNA、BMPRⅡ mRNA相对表达量。分析SLE患者miR-21、miR-155相对表达量与BMP-2、BMPRⅡ相对表达量的关系。

2 结果

2.1 两组外周血单个核细胞miR-21、miR-155及BMP-2、BMPRⅡ mRNA相对表达量比较 SLE组外周血单个核细胞miR-21、miR-155及BMP-2、BMPRⅡ mRNA相对表达量均高于对照组(P均<0.05)，其中中重度患者高于轻度患者(P均<0.05)。见表1。

表1 两组外周血单个核细胞miR-21、miR-155及BMP-2、BMPRⅡ mRNA相对表达量比较

注：与对照组比较，#P<0.05；与同组轻度者比较，*P<0.05。

2.2 SLE患者外周血单个核细胞miR-21、miR-155 mRNA与BMP-2、BMPRⅡ mRNA相对表达量的关系 Pearson相关分析显示，miR-21 mRNA与BMP-2、BMPRⅡ mRNA相对表达量均呈正相关(r分别为0.532、0.618，P均<0.05)，miR-155 mRNA与BMP-2、BMPRⅡ mRNA相对表达量均呈正相关(r分别为0.552、0.649，P均<0.05)。

3 讨论

SLE患者普遍存在T细胞、B细胞活化异常，患者体内出现多种自身抗体。有研究认为，BMP通过作用于细胞膜上的受体，可参与B细胞分化，抑制B细胞成熟，其中BMP-2、BMPRⅡ是重要的受体类型，通过与BMP形成复合物，可发挥丝/苏氨酸激酶活性[13]；同时BMP信号通路可参与T细胞应答，进而影响T细胞功能。在SLE患者中，BMP通路下游Olf-1/EBF中Id3基因及相关锌指蛋白基因(OAZ)表达在骨髓及外周血单个核细胞中均升高，其与RNA相关抗体水平及疾病活动指数呈负相关，阻断OAZ后，患者Id3基因表达明显下降，随之降低抗核抗体的表达，提示BMP通路异常活化在SLE发病过程中发挥重要作用，可引起T细胞、B细胞功能失调[8]。miRNA是具有调节功能的一类小分子非编码RNA，在生命进程多个环节中均发挥着至关重要的作用，可通过对免疫细胞分化与信号传导等过程进行调节，实现对免疫系统的调控[9，10]。miR-21是主要由活化的T细胞及B细胞产生的小分子RNA，在多种免疫性疾病的发生、发展过程中起重要作用。国外学者[15]将BMP与人体肺动脉平滑细胞结合，培养24 h后，经基因芯片分析发现miR-21表达水平明显升高，说明经BMP刺激后，磷酸化R-Smad蛋白并进入核内，其MHI结构区域通过与pri-miRNA结合，促进其向pre-miRNA转化，进而影响疾病发生[11]。而miR-155是BIC基因的表达产物，与机体免疫功能密切相关，赵静等[16]研究表明，miR-155可参与B细胞增殖、分化，同时通过调节C-MAF等基因表达，可调控T细胞分泌的细胞因子[12]。陈芳等[13]研究发现，SLE重度活动期miR-155较稳定期上调；陈京京等[14]研究发现，中重度活动组SLE患者miR-21、miR-155表达均较轻度患者升高；提示外周血B细胞中miR-21、miR-155异常表达在SLE发生、发展过程中发挥重要作用。本研究结果显示，SLE组外周血单个核细胞中miR-21、miR-155 mRNA表达明显高于对照组，且中重度者高于轻度者，与上述报道相符。证实miR-21、miR-155在SLE的发生、发展中起重要作用，其高表达可加重病情。本研究结果显示，SLE组外周血B细胞中BMP-2、BMPRⅡ mRNA相对表达量均明显高于对照组，且中重度组>轻度组>对照组，说明SLE患者BMP信号通路异常活化，导致B细胞失控，与文献报道相符[15]。本研究相关性分析显示，SLE患者miR-21、miR-155 mRNA表达与BMP-2、BMPRⅡ mRNA相对表达量均呈正相关。提示miR-21、miR-155与BMP-2、BMPRⅡ均参与了SLE的发生、发展过程，miR-21、miR-155可能通过BMP通路参与SLE的发生、发展。

综上所述，miR-21、miR-155高表达可促进SLE的发生及发展；其机制可能为活化BMP信号通路，促进BMP-2 及BMPRⅡ 表达。

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