仙耆口服液对小鼠缓解体力疲劳作用的实验研究

刘素娟，郭换，陈鸿平，陈林 ，刘友平

仙耆口服液由枸杞子、淫羊藿、黄芪、沙棘4味中药组成，所选组分原料，全部收载于《中华人民共和国药典》，其中沙棘、枸杞为药食两用之品，另外淫羊藿、黄芪为：“可用于保健食品的物品”。以上原料作为药物，未见经口服引起不良反应的临床报道，更无在《中国药典》用量内引起中毒的记载。本品配方具有扶助正气，补肾益精，延年益寿、增强抗邪能力。据世界卫生组织报告，全球65岁以上的人口已超过6亿，在我国则超过1.2亿，并正以每年3.2%的速度上升，人口老龄化问题日趋严重。另据报道，我国约有15%的人是健康的，15%的人非健康，70%的人呈亚健康状态。按照中医理论，在亚健康人群中，以正气不足，肾精亏虚，而出现早衰和易感外邪者，最为多见。也就是为患有体弱早衰和免疫功能低下之人为主。因而，缓解体力疲劳和增强免疫对于所有成年人来讲，具有普遍意义，尤其是对处于亚健康状态的人群更有意义。因此本研究依据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）对仙耆口服液缓解体力疲劳作用进行研究，以期为研制相关产品提供理论依据。

1 材料

1.1 动物

SPF级健康KM小鼠，雌雄，18～22 g，购自成都成都达硕实验动物有限公司，动物合格证号：SCXK(川)2015-030。

1.2 药物与试剂

仙耆口服液由本实验提供、西洋参口服液（福建省幸福生物科技有限公司）。尿素氮试剂盒（BUN）（生产批号：20170627）；肝糖原试剂盒（生产批号：20170711）；超氧化物歧化酶SOD (生产批号：20170802)、丙二醛（MDA）（生产批号：20170712）测定试剂盒、BCA法蛋白定量试剂盒（生产批号：20170113），均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 仪器

游泳箱（50cm×50cm×40cm）、高速冷冻离心机（Thermo Scientific，ST16R）、酶标仪（美国Thermo公司， Varioska），电子分析天平BP211D（德国Sartorius股份有限公司）、铅皮、手术器械等。

2 方法

2.1 实验动物分组与给药方法

将小鼠随机分为5组，每组12只，分别为对照组、阳性组和低、中、高剂量组。据人体口服推荐量，设口服液低、中、高剂量分别为40 mL﹒kg-1、75 mL﹒kg-1、150 mL﹒kg-1（分别相当于人体推荐量的5、10、20倍），根据0.2 mL/10 g体积采给予小鼠不同剂量的受试物，空白对照组给予等量蒸馏水。每天给药1次，连续30 d。

2.2 负重游泳实验

小鼠60只，雌雄各半，最后一次给药后称重，计算小鼠给药前后的体重增长率。末次给予受试药30 min后，将尾部负荷5%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于30 cm，水温25℃，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间。

2.3 SOD、MDA 和肝糖原测定

小鼠60只，雌雄各半，末次给药 30 min 后，眼球取血，分离血清，检测血清 SOD、MDA，处死小鼠后迅速取出肝脏，制备肝组织匀浆，按试剂盒说明书测定肝脏SOD、MDA，及肝糖原。

2.4 血清尿素氮测定

小鼠60只，雄，根据体重随机分为 5 组。末次给药 30 min 后，在水深不少于 30 cm，水温( 25 ± 1.0 ) ℃ 水中游泳 90 min。运动后安静 60 min，摘眼球取血，置冰箱4℃约3 h，血凝固后2000r/min离心15 min，分离血清，按试剂盒说明书操作，测定血清尿素氮含量。

3 结果及分析

3.1 对小鼠体重及脏器指数的影响

如表1所示，受试物对小鼠体重增长没有明显影响。低剂量组、高剂量组对小鼠脾脏指数有显著影响，对胸腺指数影响不显著。

表1 受试物对小鼠体重及脏器指数的影响（ ±s，n=10）

表1 受试物对小鼠体重及脏器指数的影响（ ±s，n=10）

注：和空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量（mL﹒kg-1） 体重增长率 脾脏指数 胸腺指数空白组 - 29.9711.69 42.4213.13 16.068.67阳性组 75 26.882.45 38.982.09 16.575.77低剂量组 40 27.0511.28 32.178.1515.616.05中剂量组 75 27.466.75 32.585.56 16.811.98高剂量组 150 27.967.20 32.915.3117.756.26

3.2 对小鼠负重游泳时间的影响

如表2所示，受试物各剂量组及阳性组明显延长小鼠负重游泳时间，与空白对照组比较，低剂量组和阳性组具有明显差异。

表2 受试物对小鼠负重游泳时间的影响（±s，n=10）

表2 受试物对小鼠负重游泳时间的影响（±s，n=10）

注：和空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量（mL﹒kg-1） 游泳时间（min）空白组 - 4.330.92阳性组 75 7.651.88低剂量组 40 6.02029*中剂量组 75 5.901.72高剂量组 150 5.350.26*

3.3 对小鼠SOD、MDA及肝糖原含量的影响

如表3所示，受试物中剂量、高剂量组及阳性组可明显升高肝糖原含量，与空白组比较差异有显著性（P＜0.05），而低剂量组对小鼠肝糖原含量无明显影响。对SOD含量比较发现，阳性组及给药组均能显著升高小鼠SOD含量，与空白组相比，中剂量组、阳性组具有极显著差异（P＜0.01），低剂量组、高剂量组具有显著差异（P＜0.05）。给药组及阳性组均能降低小鼠MDA含量，与空白组比较，阳性组具有极显著差异（P＜0.01），高剂量组可显著降低MDA含量（P＜0.05）。

表3 受试物对小鼠SOD、MDA及肝糖原含量的影响(±s,n=10)

表3 受试物对小鼠SOD、MDA及肝糖原含量的影响(±s,n=10)

注：和空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量（mL﹒kg-1） 糖原含量 SOD含量 MDA含量空白组 - 5.880.11 205.9010.49 65.5410.46阳性组 75 6.080.19 270.21±27.59** 35.777.65**低剂量组 40 6.010.23 244.46±40.05* 54.2513.91中剂量组 75 6.030.14 242.77±23.38** 61.5912.28高剂量组 150 6.090.06 233.28±27.34* 52.935.94*

3.4 对小鼠血清尿素氮含量的影响

如表4所示，与空白组比较，各剂量组及阳性组西洋参口服液均能显著降低小鼠血清尿素氮含量（P＜0.05），且呈剂量依赖性。

表4 受试物对小鼠血清尿素氮含量的影响（±s，n=10）

表4 受试物对小鼠血清尿素氮含量的影响（±s，n=10）

注：和空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 剂量（mL﹒kg-1） 血尿素氮含量空白组 - 10.141.09阳性组 75 8.030.56低剂量组 40 7.621.11中剂量组 75 6.910.84高剂量组 150 5.150.45

4 讨论

负重游泳实验可以反映在自身耗氧量增加的情况下，机体的抗疲劳的能力，常被用于研究药物的抗疲劳作用。本实验结果显示，仙耆口服液能明显延长小鼠负重游泳时间，说明该口服液具有增强小鼠缓解体力疲劳的作用。疲劳是机体受到紧张性刺激后产生的一种应激性反应。机体缺氧可影响机体的各种新陈代谢，引起一系列的功能和形态结构的变化，特别是影响机体的氧化功能。机体内一系列氧自由基代谢会发生改变，表现为抗氧化能力下降和脂质过氧化反应增强。严重缺氧后会导致心脑等重要器官的损伤，引起死亡[1]。

机体疲劳时，主要表现为：氧自由基增多，SOD 是机体清除氧自由基的重要酶，可以直接反映机体抗氧化水平。MDA 是自由基引起的脂质过氧化的主要产物，MDA 含量可以间接反映机体抗氧化能力及清除氧化产物的能力[2]；糖原储备量降低。机体剧烈运动时，肌糖原耗竭增加，为维持血糖水平，肝糖原储备量也减少。体内的糖原是运动能量的来源，糖原的含量能说明疲劳发生的快慢或程度，糖原储备充足，供应的能量就多，抗疲劳能力就强；血液中尿素氮水平升高。机体剧烈运动时，蛋白质及氨基酸的分解代谢增强，氨基酸会代谢转化生成尿素进入血液，血尿素氮含量增加，血尿素氮也是疲劳时肌肉酸痛的主要原因。因此，血尿素氮水平的高低是判断机体疲劳程度的重要指标[3]，运动后血尿素氮清除越快，则疲劳消除得越快，抗疲劳的效果亦越明显。

本实验结果显示，仙耆口服液对小鼠体重的增长及胸腺指数无明显影响；能够增强小鼠血清和肝脏SOD 活性，降低 MDA 含量，增强了清除机体运动时产生自由基的能力；显著提高肝糖原储备量; 降低小鼠游泳后血尿素氮水平。

根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）[4]对缓解体力疲劳功能结果判定，说明仙耆口服液具有缓解体力疲劳功能的作用。该保健食品抗疲劳的作用机制可能与以下两点有关: 明显提高体内抗氧化系统酶活力，增强体内抗氧化防护能力，清除体内氧自由基，防止细胞膜脂质过氧化，有效预防细胞自由基损伤; 提高机体糖原储备，增强小鼠运动耐力及降低运动时血清尿素氮的堆积，加快消除疲劳。

[1]Yamaura S, Fukao M, Ishida K, et al.Effect of chronic hypoxic hypoxia on oxidation and glucuronidation of carvedilol in rats[J].European Journal of Drug Metabolism &Pharmacokinetics, 2014, 39(1):53.

[2]Chi A, Li H, Kang C, et al.Anti-fatigue activity of a novel polysaccharide conjugates from Ziyang green tea.[J].International Journal of Biological Macromolecules, 2015,80:566.

[3]黄诚胤, 潘建华, 李慧.表没食子儿茶素没食子酸酯对小鼠运动疲劳的拮抗作用[J].中国应用生理学杂志, 2015,31(1):85.

[4]卫生部卫生法制与监督司.《保健食品检验与评价技术规范》[S].北京:人民卫生出版社，2003:87.