发情前期和发情期格力犬的血清孕酮水平及其适配期的冻精人工授精

郝志明,雷 磊

(天津农学院动物科学系,天津 西青 300384)

母犬的配种失败的原因有很多,其中配种时间把握不准是最重要的原因。母犬的发情排卵表现差异很大,有的母犬在发情前期仅有少量血性分泌物排出,甚至不排出,这种情况下很难准确估计排卵时间;有的母犬在整个发情前期都表现出“偏尾”并接受公犬交配;有的则直至排卵后都不愿意接受交配;有的母犬在发情前期开始后的第12天排卵,有的可早至第5天排卵,有的则可晚至第25天排卵。所有这些原因常常使母犬错失最佳的配种时间,导致怀孕失败。

近些年的研究表明,犬的卵泡在发育期间就能产生孕酮,且其水平与LH峰和排卵紧密相关,可以准确判断排卵时间,能确定最佳配种时间[1-5]。一般认为,排卵前LH峰时血清孕酮浓度为1～2.5 ng/mL[2]或2～4 ng/mL[1],排卵时血清孕酮浓度则为4～10 ng/mL[3]或4 ～7.5 ng/mL[5];也即孕酮水平达到1～2.5 ng/mL或 2～4 ng/mL时,母犬处在排卵前LH峰期,孕酮浓度为4～10 ng/mL或4～7.5 ng/mL时,母犬处在排卵期。因此可以通过测定孕酮水平来确定母犬的生殖状态所处的时期,是LH峰期、LH峰后期、排卵前半期、排卵后半期、排卵后期还是适配期。为了更好地指导生产实践,本文就天津帝豪犬业利用血清孕酮水平测定进行输精指导的工作进行了总结,以期更准确地了解处于发情前期和发情期母犬的血清孕酮水平及各期间的间隔时间的变化规律,更好地指导排卵鉴定和配种工作。

1　材料与方法

1.1试验动物 来天津帝豪犬业进行人工授精的格力犬,年龄1～10岁,共61只。

1.2孕酮测定仪 法国梅里埃公司生产的mini-VIDAS全自动荧光免疫分析仪。

1.3测定方法

1.3.1打开mini-VIDAS全自动荧光免疫分析仪电源开关,预热;冰箱冷藏室取出梅里埃专用孕酮测定试剂条和SPR放室温0.5 h以上。

1.3.2犬只前肢正中静脉采血,放入离心机3 000 r/min离心10 min。

1.3.3将梅里埃专用孕酮测定试剂条和SPR放入仪器,吸取200 μL血清加入孕酮测定试剂条的加样孔中。

1.3.4按压运行和仓位即开始测定 约50 min后,自动打印测定结果。

1.4生殖状态分期 按照孕酮水平,将发情前期和发情期分为LH峰前期、LH峰期、LH峰后期、排卵前半期、排卵后半期、排卵后期和适配期,其孕酮水平分别为 ＜1.0 ng/mL、1.0 ～2.5 ng/mL、2.5 ～4.0 ng/mL、4.0 ～7.0 ng/mL、7.0 ～10.0 ng/mL、10.0 ～20.0 ng/mL 和20.0 ～30 ng/mL。

1.5冻精人工授精 冻精解冻后,用可视化过子宫颈人工授精技术将其注入子宫腔内,所用输精设备为森达牌过子宫颈人工授精系统,具体方法见犬可视化过0子宫颈人工授精技术[6]。

1.6结果统计 测定结果除按发情天数进行统计外,为了确定孕酮测定的间隔时间,本文还对各个时期的平均间隔时间和间隔时间的范围进行了统计。

2　试验结果

2.1发情前期和发情期格力犬血清孕酮水平变化规律 从图1可以看出,随着发情天数的增加,格力犬血清孕酮水平在逐渐增加,且增加的速度越来越快,总的来说,在前14 d孕酮水平的增加较为缓慢,但在第15天和第16天,孕酮水平的升高显著加快,第16天时血清孕酮水平平均达到24 ng/mL以上。

图1　发情前期和发情期格力犬血清孕酮水平变化

2.2至适配期所需要的平均时间和范围 从表1可以看出,在正常情况下,处在LH峰前期、LH峰期、LH峰后期、排卵前半期、排卵后半期的格力犬距离适配期的平均时间分别为 2.08、3.26、4.88、7.16 h和 10.00 h,其时间范围分别是 1 ～3 d、2 ～5 d、3～7 d、4～13 d和7～14 d。 LH 峰期距离排卵前半期的平均时间为 3.90 d(7.16 ～3.26=3.90),距离排卵后半期的平均时间则为5.08 d(7.16～2.08=5.08)。

表1　至适配期(20～30 ng/mL)所需的平均时间和范围

2.3冻精过子宫颈人工授精的产仔率 见表2。

表2　适配期格力犬冻精过子宫颈人工授精的产仔率

本试验对64只处在适配期的母格力犬进行了冻精的过子宫颈人工授精,结果有56只犬怀孕产仔,产仔率达87.5%。血清孕酮水平20～25 ng/mL和26～30 ng/mL相比,孕酮水平为26～30 ng/mL时产仔率更高,达90.0%,见表2。

3　讨论

3.1犬卵泡的孕酮产生 在家畜,排卵后的卵泡组织黄体化后转变成为黄体组织,并形成黄体,才开始产生孕酮。但犬则不同,犬的卵泡在雌激素分泌达到最大前的发情前期,就开始了缓慢的黄体化,之后在LH峰期的作用下,才开始广泛而快速的黄体化[1-2],因此,犬在发情前期,血清孕酮水平就开始增加,LH峰后期孕酮水平则开始较快的增加,排卵完成后,血清孕酮水平则以更快的速度增加。与此相似,从本研究的血清孕酮水平来看,格力犬孕酮的产生也是在LH峰后期加快,排卵后更快的方式进行的。综上所述,LH峰期和排卵与孕酮水平是紧密相关的,这也正是孕酮水平测定能够准确预测发情母犬排卵的科学依据。

3.2犬血清孕酮水平和配种时间的关系 大多数人认为,在犬LH峰后期48小时出现排卵,排出的卵子在输卵管继续发育48～72 h才能够成熟[1、3],另外成熟的卵子维持受精能力的时间可达2～3 d[1],因此配种的时间应该是LH峰后期的4～6 d,或排卵后的2～4 d。至于孕酮与LH峰期和排卵的关系,不同的报道有一些差异。LH峰期时,Concannon P W等的报道认为血清孕酮水平为1～2.5 ng/mL[2],赵兴绪认为血清孕酮水平为2～4 ng/mL[1],Hase M则认为血清孕酮浓度大于2 ng/mL[4];而排卵时,Janice L C认为血清孕酮浓度为4～10 ng/mL[3],Lee B C等则认为为4 ～7.5 ng/mL[5]。

3.3犬冻精过子宫颈人工授精的产仔率 许多研究显示,无论是新鲜精液还是低温保存精液,子宫内输精明显优于阴道内输精[7-11]。在冷冻精液,子宫内人工授精的产仔率明显优于阴道内输精。Thomassen R等和Linde-Forsberg C的试验表明,冷冻精液人工授精的产子率可达80% ～85%[7-8]。Wilson M S的结果则显示,在发情母犬来源不详的情况下,非手术法宫内人工授精的受胎率可达83.3%和平均7.5只的产仔数[12]。本试验的产仔率则略高,平均达87.5%。