LRRFIP1在妊娠期高血压疾病患者血清中的表达及临床意义

吴 怡，代维栋，符乔珊

(西安市第四医院妇产科，陕西 西安 710038)

妊娠期高血压疾病(hypertensive disorders of pregnancy, HDP)是妊娠期特有而又常见的一种并发症，主要包括妊娠期高血压、子痫前期、子痫、原发高血压并妊娠、继发高血压并妊娠等[1]。HDP以妊娠20周后出现高血压、水肿及蛋白尿为主要特征，且伴有全身多器官功能损害，严重者可出现抽搐、昏迷、脑出血、心肾功能衰竭，甚至造成母婴死亡[2]。研究表明凝血与纤溶系统平衡紊乱在HDP的发生发展中扮演着重要角色，且与产妇预后密切相关[3]。富亮氨酸重复序列相互作用蛋白1(leucine-rich repeat flightless-interacting protein 1, LRRFIP1)能与血小板细胞膜上的相关蛋白相互作用，进而改变血小板细胞的骨架结构，影响血小板的凝血功能[4]。本文通过检测HDP患者和健康孕妇妊娠晚期血小板参数、凝血相关指标、血浆LRRFIP1、α-颗粒膜蛋白(alpha-granule membrane protein, GMP-140)和D-二聚体(D-dimer)的改变，探讨LRRFIP1表达与HDP患者凝血功能及血栓前状态的相关性，以期为HDP的诊断、评估和治疗提供新的科学依据和思路。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2014年5月至2016年5月西安市第四医院妇产科收治的妊娠晚期HDP患者70例作为观察组，正常孕妇30例作为对照组。按照第八版《妇产科学》诊断及分类标准[5]，将HDP患者分为妊娠高血压组26例，平均(27.14±2.74)岁，孕(37.19±2.11)周；轻度子痫前期组24例，平均(27.33±2.91)岁，孕(36.33±1.99)周；重度子痫前期组20例，平均(27.45±2.65)岁，孕(35.25±1.87)周。正常妊娠组孕妇平均(26.30±2.31)岁，孕(37.60 ±1.63)周。各组孕妇年龄、孕周等一般资料的差异均无统计学意义(均P>0.05)，有可比性。所有研究对象均为单胎妊娠，均无其他合并症，近期未使用影响凝血/纤溶系统及血小板功能的药物。所有研究对象及家属均知情同意。

1.2血小板参数及凝血指标的检测

抽取空腹安静状态下各组受试者的静脉全血，部分注入柠檬酸钠抗凝管，3000r/min离心10min，取血浆，采用STAGO全自动血凝分析仪检测凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)等凝血指标；另一部分注入乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)血常规专用抗凝管，采用希森美康XS800i全自动血细胞分析仪检测血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)等血小板参数。

1.3血浆LRRFIP1、GMP-140和D-dimer的检测

取各组受试者的新鲜抗凝静脉全血，3 000r/min离心10min，分离血浆，采用 ELISA 法对检测血浆LRRFIP1、GMP-140和D-dimer水平。ELISA试剂盒购自上海康朗生物科技有限公司，所有操作均按照试剂盒说明书规范进行。

1.4统计学方法

2结果

2.1 HDP患者与正常妊娠孕妇凝血指标比较

如表1所示，妊娠晚期HDP患者PT、APTT、TT值均低于正常妊娠妇女，4组PT、APTT、FIB比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。与正常妊娠组相比，轻度子痫前期组PT、APTT均显著减少(t值分别为-2.264、-2.458，均P<0.05)；与轻度子痫前期组相比，重度子痫前期组PT、APTT亦显著减少(t值分别为-2.026、-2.020，均P<0.05)；各组间TT值比较差异无统计学意义(均P>0.05)。妊娠晚期HDP患者FIB水平随病情加重呈递增趋势，轻度子痫前期组较正常妊娠组FIB值显著增加(t=2.031，P<0.05)，而重度子痫前期组较轻度子痫前期组FIB值亦显著增加(t=2.196，P<0.05)。

表1 HDP患者与正常孕妇凝血指标的比较

注：*与正常妊娠组比较，P<0.05；#与轻度子痫前期组比较，P<0.05。

2.2 HDP患者与正常妊娠孕妇血小板参数比较

如表2所示，与正常妊娠组相比，轻度子痫前期组PLT显著减少(t=-2.206，P<0.05)，重度子痫前期组PLT值较轻度子痫前期组亦显著减少(t=-2.037，P<0.05)。轻度子痫前期组MPV、PDW均较正常妊娠组显著增加(t值分别为2.413、2.017，均P<0.05)，重度子痫前期组MPV、PDW较轻度子痫前期组亦显著增加(t值分别为2.488、2.192，均P<0.05)。

Table 2 Comparison of platelet parameters in HDP patients and normal pregnant

注：*与正常妊娠组比较，P<0.05；#与轻度子痫前期组比较，P<0.05。

2.3 HDP患者与正常妊娠晚期孕妇血清LRRFIP1、GMP-140、D-dimer的表达

与正常妊娠组相比，妊娠晚期HDP患者血浆LRRFIP1、GMP-140、D-dimer表达水平均随病情加重呈递增趋势，见表3。轻度子痫前期组LRRFIP1、GMP-140、D-dimer值较正常妊娠组显著增加(t值分别为3.965、3.759、4.364，均P<0.05)，而重度子痫前期组LRRFIP1、GMP-140、D-dimer值较轻度子痫前期组亦显著增加(t值分别为2.220、3.496、3.309，均P<0.05)。

Table 3 Expressions of LRRFIP1, GMP-140 and D-dimer in HDP patients and normal pregnant

注：*与正常妊娠组比较，P<0.05；#与轻度子痫前期组比较，P<0.05。

2.4 LRRFIP1表达与HDP患者凝血功能的相关分析

为探讨LRRFIP1的表达上调是否与HDP患者凝血功能异常相关，分别对LRRFIP1表达与PLT 、FIB、GMP-140、D-dimer水平作相关性分析，结果显示LRRFIP1的表达与PLT呈显著负相关(r=-0.28，P<0.05)，与FIB呈显著正相关(r=0.25，P<0.05)，与D-dimer呈显著正相关(r=0.42，P<0.01)，与GMP-140呈显著正相关(r=0.44，P<0.01)，见表4。

表4 HDP患者LRRFIP1表达与PLT 、FIB、GMP-140、D-dimer的相关性

Table 4 Correlation between LRRFIP1 expression and PLT, FIB, GMP-140 and D-dimer in HDP patients

3讨论

3.1 LRRFIP1在HDP患者血清中的表达及其意义

LRRFIP1蛋白能与富含亮氨酸重复序列的蛋白相互作用，参与调控NF-κB活性，Wnt/β-catenin信号通路及细胞骨架重排等多种生物学过程[6]。作为血小板细胞骨架的组成部分，LRRFIP1可与肌动蛋白重塑蛋白Flightless-1相互作用，影响血小板活化进程，进而影响血小板凝血功能，且敲除LRRFIP1可显著减少血栓区域[4]。此外，干扰LRRFIP1基因的表达被证实能够抑制小鼠下肢深静脉血栓的形成[7]。这些研究提示LRRFIP1可能通过影响血小板的结构与功能进而影响机体凝血功能及血栓形成。

妊娠期间，尤其是妊娠晚期，孕妇体内的凝血、抗凝和纤溶功能均会发生明显的生理变化，以适应胎儿的健康生长和顺利娩出[3]。因此，在正常孕妇妊娠晚期，其体内的凝血与纤溶系统往往处于一种高水平的动态平衡。当患上HDP时，患者体内的凝血因子及凝血系统活性增加，而抗凝因子活性减少，致使凝血和纤溶系统失衡，纤溶亢进，使其与正常孕妇相比更具血栓形成或产后出血倾向[8]。在本研究中，与正常晚期妊娠孕妇相比，HDP患者，尤其是重度子痫前期患者的PT、APTT、PLT值均显著低于正常孕妇，而表明其体内凝血因子含量显著增加，血小板显著减少，凝血纤溶系统处于紊乱状态。此外，HDP患者的FIB、MPV、PDW值均随病情加重呈递增趋势，且轻度子痫和重度子痫前期患者FIB、MPV、PDW值均显著高于正常孕妇，表明HDP患者凝血酶活性升高，血小板聚集加快，纤溶亢进，血液处于高凝和血栓前状态，并且机体内存在血小板的异常活化和增生。

进一步研究显示，与正常孕妇相比，HDP患者血浆LRRFIP1水平随病情加重呈递增趋势，且轻度子痫和重度子痫前期患者LRRFIP1值较正常孕妇显著增加，表明HDP患者体内存在LRRFIP1的异常表达，提示LRRFIP1可能通过影响HDP患者的血小板结构和功能破坏其凝血与纤溶系统的平衡，进而导致其凝血功能障碍。

3.2 LRRFIP1与HDP患者凝血指标的相关性

有效的血小板质量和数量在人体生理性和病理性凝血、止血过程中均发挥着至关重要的作用[3]。FIB是凝血途径的重要环节之一，它能与活化的血小板相互作用，介导血栓的形成[8]。在本研究中，HDP患者PLT值显著低于正常妊娠妇女，而FIB显著高于正常孕妇，且相关性分析表明HDP患者血浆LRRFIP1水平与PLT呈显著负相关，而与FIB显著正相关。这些结果提示LRRFIP1可能参与HDP患者血小板的数量与功能的改变，进而影响机体凝血与纤溶系统的平衡。

特异性纤维蛋白降解产物D-dimer表达增加，提示机体纤溶功能亢进[9]；血小板α颗粒膜蛋白GMP-140表达增加，标志着血小板的活化[10]。本研究中，HDP患者血浆D-dimer和GMP-140均表达上调，且随病情加重呈递增趋势，进一步表明HDP患者机体中存在血小板的异常活化，血液高凝和纤溶亢进现象。相关性分析表明，HDP患者血浆LRRFIP1水平与GMP-140、D-dimer显著正相关，提示LRRFIP1可能通过影响血小板活化参与了HDP患者凝血纤溶系统的生理变化，致使HDP患者处于血液高凝状态，血栓形成危险增加。

综上所述，LRRFIP1在妊娠高血压疾病中存在表达上调，可能通过促进血小板的异常活化使患者处于血液高凝和血栓前状态。因此，本研究将为临床检测和预防血栓形成提供新的监测指标和判断、治疗依据。然而，LRRFIP1影响妊娠高血压疾病患者凝血功能的具体靶标和机制尚不清楚，还需要后续探讨。

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