Quechers方法测定动物源性食品中兽药残留氯霉素的不确定度评定

□ 张虹艳 王小乔 吴福祥 兰州市食品药品检验所

1 材料与方法

1.1 试验仪器与设备

液相色谱-质谱联用仪（安捷伦6460）、天平（梅特勒MS105DU）。

氯霉素对照品（Dr纯度98.5%）、Quechers（ EMR-Lipid萃取管、EMRLipid Polish反萃取管）。

1.2 试验方法

1.2.1 供试样

称取2 g均质样品于50 mL离心管中，加入 5mL酸化乙腈（含有5%甲酸），盖紧瓶盖在机械振荡器中剧烈振摇2 min，4 000转离心10 min，加入5 mL缓冲液（5 mmol/L乙酸铵）至15 mL EMR-Lipid dspE管中摇匀，再移取样品上清液至15 mL EMRLipid dspE管中，立即混合使样液分散，在涡旋仪上涡旋1 min， 4 000转离心10 min，移取上清液至EMRLipid Polish反萃管中，漩涡混合后离心，取上层ACN层浓缩至近干，用20%甲醇水定容至1.00 mL，过0.22 μm的滤膜，待测。

1.2.2 标准溶液测定

精密称取氯霉素对照品13.42 mg至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到132.2 μg/mL的标准溶液。再精密移取上述溶液1.00 mL至100 mL容量瓶中，得到1.322 μg/mL的标准溶液，精密吸取上述标准溶液0.10、0.20、0.40、0.60、1.60、3.00 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀静置，配制成系列标准曲线溶液。

2 数学模型和不确定度来源分析

2.1 测量模型

其中：X——试样中氯霉素的含量（μg/kg）；c——样品浓度（ng/mL）；V——试样定容体积（mL)；m——试样称样量 (g)；f——稀释倍数；1000——换算系数。

2.2 检测结果

重复测定样品中氯霉素含量6次，称样2.003 g，测定结果为71.22、77.84、74.07、77.41、79.66、74.84 μg/kg。

3 不确定度的来源识别和分析

3.1 不确定度的A类评定

按贝塞尔公式计算得标准偏差：

S(x)=U(x)=3.051 μg/kg

测定结果的标准不确定度值为：

相对标准不确定度：

3.2 不确定度的B类评定

3.2.1 样品称重m引入的相对标准不确定度

（1）试样质量m称量引入的标准不确定度评定。天平经检定合格，根据检定证书提供的数据，天平的扩展不确定度为U=0.1 mg，k=2。则标准不确定度u1(m)=U/K=0.1 mg/2=0.05 mg。本实验中称样量为2 g，样品质量引入的相对不确定度：

3.2.2 样品定容体积V的相对标准不确定度评定

（1）移液枪的校准：1 000 μL微量移液器移取1 000 μL液体时，系统相对误差为0.01%，偶然误差为0.18%，相对标准不确定度为：

（2）温度引起的不确定度 假设定容在（20+3）℃条件下进行，甲醇体积膨胀系数为1.1×10-3/℃，假定为平均分布，则不确定度为：

则：测定用样液V的相对不确定度为：

3.3 由标准溶液引入的不确定度

由标准曲线求得结果A引入的不确定度，包括氯霉素标准溶液的配制和拟合标准曲线非线性所引入的不确定度。

3.3.1 氯霉素标准溶液引入的不确定度

（1）对照品引入的不确定度

氯霉素对照品由Dr.Ehrenstorfer提供，纯度为99.3%，标准证书给出的相对扩展不确定度为0.5%，包含因子为2，则其引入的相对标准不确定度为：

（2）称量产生的不确定度

用天平准确称取对照品13.42 mg，并用甲醇定容至100 mL，根据3.2.1，天平引入的不确定度为：

urel（s2）=0.05 mg/13.42 mg=0.003 73

（3）对照品溶液稀释引入的不确定度

第一次定容：（100±0.1）mL容量瓶服从三角分布，标准不确定度为：

甲醇的体积膨胀系数为1.1×10-3，故温度引起的不确定度为：

则第一次定容产生的不确定度为：

第一次移液：（1±0.015）mL移液管服从三角分布，计算同上，产生的不确定度为：

第二次定容同第一次：则第二次定容产生的不确定度为：

标曲第一、第二、第三、第四个点分别用（1±0.015）mL移液管移取，不确定度同：

标曲第五、第六个点使用5 mL移液管，（5±0.030）mL移液管服从三角分布，产生的不确定度为：

标曲第五、六个点定容引入的不确定度为：

故配制标准曲线引入的不确定度计算如下：

（4）合成标准溶液配置引入的不确定度。

3.4 由标准曲线拟合引入的不确定度

由标准曲线拟合引入的标准偏差可由下式标示：

则标准曲线拟合引入的不确定度为：

根据A类不确定度评定，因重复性引入的相对不确定度为：

3.5 合成不确定度

U=x×urel=0.075 8×0.065 6=0.004 97 mg/kg扩展不确定度U=ku，置信概率为95%，k=2。则U=2×0.004 97=0.009 94 mg/kg 。即称样量约为2 g时，氯霉素测定结果为（0.075 8+0.009 94）mg/kg。

4 结论与讨论

从试验方法和计算公式可知，氯霉素含量的不确定度来源于以下几个因素：①重复测量引入的不确定度，属于A类不确定度；②称样质量引入的不确定度；③样品定容体积引入的不确定度，受移液枪校正以及温度对操作过程的影响；④对照品溶液配制引入的不确定度，受容量瓶校正和稀释因子的影响；⑤标准曲线引入的不确定度。