BAXR SystemQ7全自动病原微生物快速检测系统在食品致病菌检测中的运用

□ 张丽琴 安艳苏 肖植国 曲靖市食品药品检验检测中心

食品安全问题是关系到千千万万人民群众切身利益的社会问题，受到人们的广泛关注，其中，致病菌的污染是导致食品安全问题的重要原因之一，在食物中毒案例中，由致病菌所致的细菌性食物中毒爆发起数和发病人数多年来位居我国首位[1]。常见的食源性致病菌主要是沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H 7、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌等。《食品安全国家标准食品中致病菌限量》（GB29921-2013）[2]对各类食品中的致病菌限量进行了严格的规定。现阶段食品检验逐渐成为保证食品安全的关键手段，是食品流向市场交易前的必经重要环节[3]，而致病菌的检验是一项系统而又复杂的工作。传统的检测方法，主要包括形态检查和生化方法，完全依靠人工操作，需要投入大量的人力、物力，且耗时长[4]，难以满足目前检验任务重、批量大的形势。本文对BAXRSystemQ7全自动病原微生物快速检测法与传统检测方法进行对比讨论，对BAXRSystemQ7全自动病原微生物快速检测方法在食品致病菌检测中的优势进行了探讨，以期为提高食品中致病菌的检测效率提供参考。

BAXRSystemQ7全自动病原微生物快速检测系统建立在分子生物学基础上，采用实时荧光定量PCR方法对各类致病菌进行快速检测，其原理是：使用荧光染料标记特异性探针，DNA双链通过一系列连续的变性、退火和延伸的过程，使待检病原菌的特异性DNA片段以指数方式扩增，在此期间，荧光信号实时自动地被检测和分析，从而使结果以“有或无”的形式在1个小时内显示。BAXRSystemQ7全自动病原微生物快速检测系统的各类检测试剂盒都采用了杜邦专利的PCR试剂药片化技术，所有PCR试剂都被整合在一片药片中，包含高度特异性的探针以及其他PCR反应所需试剂，例如：DNA聚合酶、引物、dNTP、缓冲液等，大大简化了操作步骤，减少了人为误差。相比传统微生物培养分离鉴定方法，实时荧光定量PCR技术具有更快的速度，更高的特异性和灵敏度。

1 检测方法分析

1.1 待测样品的制备

以无菌操作取样25 g（mL），加入225 mL相应灭菌稀释液，根据不同致病菌要求进行增菌培养或直接检测，如沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌（第一法）、单核细胞增生李斯特菌（第一法）、副溶血性弧菌定性等，一般需增菌培养18～24 h。同时，接种相应标准菌株于225 mL已灭菌的稀释液中，与上述样品统一条件下培养，作为阳性对照。

1.2 致病菌的检测

1.2.1 传统方法检测（国家标准法）

（1）分离培养。按照相应的标准，对以上样品溶液及对照溶液进行下一步的稀释、分离，最终接种到相应的选择性平板中进行培养，这几个环节至少需要18～24 h（大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌（第一法）、副溶血性弧菌），沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌需要48 h才能完成。

（2）观察菌落形态。观察上述选择性平板中菌落形态，确定可疑菌落。

（3）生化鉴定。根据致病菌标准要求对可疑菌落进行进一步的分离或通过氧化酶实验、革兰氏染色、血清学实验、三糖铁琼脂实验、嗜盐性实验等进行最终鉴定。

1.2.2 BAXRSystemQ7方法检测

根据所需要进行的反应个数取适量的裂解液,按每1 mL裂解液中加入12.5 μL蛋白酶比例添加蛋白酶试剂，充分混匀后吸取200 μL上述混匀后的裂解液加入各裂解管；取上述1.1中的样品溶液及对照溶液各5 μL，分别加至对应裂解管，将上述裂解管放置于设置好的裂解仪加热模块上，进行裂解，将裂解后的裂解管插入冷却模块，冷却5 min。量取30 μL处理好的样品液及对照溶液至试剂盒配套的PCR管中（含有PCR反应需要的所有试剂），上机检测。整个过程只需3.5～5 h。

2 结果

传统检测方法通过一系列的分离鉴定，可确定结果是否为致病菌阳性，同时可对致病菌进行计数，得出含量；BAXRSystemQ7检测方法可通过上机后直接得出致病菌阳性或阴性，但不能得出致病菌的含量。

3 讨论

（1）传统检测方法是通过长期大量实验验证的，其准确性、灵敏性均较高，是在食品致病菌检测工作中主要采用的方法，但该方法步骤多，操作繁琐，完全依靠人工操作，一般需要数天才能完成[5]。且致病菌种类繁多，完全根据细菌形态、生化或血清分型，不仅费时费力，且结果受试剂质量差异、实验人员经验丰富程度等因素影响较大，实验过程容易相互污染，导致错误。

（2）BAXRSystemQ7 方法优点在于特异性强，假阳性低，耗时短， 灵敏度是传统平板培养法的100～1 000倍，无需免疫富集即可检出。这样的灵敏度可以保证绝大多数病原体不到24 h得到结果。该方法已被美国农业部食品安全检测机构采纳作为标准检测方法，也得到AOAC 认证，作为突发食源性致病菌污染事件应急反应的标准检测方法[6]。但该方法目前只能对致病菌进行快速定性，在定量方面有待进一步研究，且无法培养、不能够生化检定且不能够观察微生物产物[7]。

4 结论

BAXRSystemQ7全自动病原微生物快速检测系统自动化程度高，操作简易，检验快捷，精准性高[8]，可作为食源性致病菌爆发时的紧急检测方法，也可在日常检测工作中用于致病菌的快速定性检测。对于需要定量检测的致病菌，如金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌等，可优先选用BAXRSystemQ7全自动病原微生物快速检测系统进行初筛，再根据筛选结果结合传统检测方法进行定量分析，这样可大大提高检测的效率。检验检测技术人员在选择这一检测技术方法时要根据实际情况科学决策，确保检测结果的准确性。