口腔溃疡系列制剂中冰片的定量检测和挥发性成分分析

2018-05-23罗定强樊宝娟刘海静陕西省食品药品监督检验研究院陕西西安710061

中国药业 2018年9期

吴芳，罗定强，樊宝娟，李霞，刘海静（陕西省食品药品监督检验研究院，陕西西安 710061）

口腔溃疡散（含片）由青黛、枯矾（白矾）、冰片3味中药组方，具有清热、消肿、止痛功效，常用于火热内蕴所致的口舌生疮、黏膜破溃、红肿灼痛及复发性口疮和急性口炎等。口腔溃疡散标准收载于2015年版《中国药典（一部）》，口腔溃疡含片收载于《国家药品标准·新药转正标准(第80册)》。口腔溃疡散（含片）组方中的冰片，气清香，味辛、凉，具挥发性。现行质量标准中，口腔溃疡散有冰片的薄层色谱鉴别，口腔溃疡含片有冰片的理化鉴别和薄层色谱鉴别，但均未控制冰片的含量。有文献报道了散剂中冰片或其他药材的含量测定和薄层色谱鉴别方法[1-3]，含片中其他组分的含量测定及薄层色谱鉴别方法[4-5]，但未见对2个剂型中冰片质量进行系统对比研究的报道。由于冰片具有易挥发性以及掺伪的现象，且质量标准亟待统一和提高，故本研究中建立了该系列制剂中冰片的含量测定方法，同时为揭示挥发性物质的化学成分组成，使用气相色谱-质谱（GC-MS）联用仪和顶空进样器对样品进行了分析。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

AE 240型电子分析天平（梅特勒公司）；AG ME 235S型电子分析天平（赛多利斯公司）；Agilent 7890A型气相色谱仪(安捷伦公司)；QP2010型气相色谱质谱联用仪（日本岛津公司）。

1．2 试药

龙脑对照品（批号为 110881-200504），异龙脑对照品（批号为1512-200201），水杨酸甲酯对照品（批号为110707-200710），均由中国食品药品检定研究院提供；无水乙醇为色谱纯；试验用样品购自市场，分别来企业Ⅰ～Ⅳ），每家企业各3批样品；阴性样品(自制)。

2 方法与结果

2．1 冰片含量测定

2．1．1 色谱条件[6-7]

色谱柱：HP-FFAP毛细管气相色谱柱（30 m×0．25 mm，0．25 μm）；柱温：程序升温，初始温度为 65 ℃，保持1 min，以5℃ ／min升温至230℃，保持5 min；柱温：250 ℃；分流比：5 ∶1；载气：氮气；流速为 1．2 mL ／min。

2．1．2 溶液制备

内标溶液：取水杨酸甲酯对照品79．76 mg，精密称定，加无水乙醇 100 mL，溶解，即得(质量浓度为0．797 6 g ／L)。

对照品溶液：取龙脑对照品16．51 mg，异龙脑对照品10．64 mg，精密称定，置同一锥形瓶中，精密加入内标溶液15 mL使溶解即得，质量浓度分别为1．101 g／L，0．709 g ／L，0．466 g ／L。

供试品溶液：取口腔溃疡含片适量，研细，取约2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入内标溶液15 mL，振摇10 min，静置，取上清液用微孔滤膜滤过，即得。取口腔溃疡散适量，混匀，取约0．2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入内标溶液15 mL，振摇10 min，静置，取上清液用微孔滤膜滤过，即得。

2．1．3 方法学考察

干扰试验：按处方的比例制备缺冰片的阴性样品，按照2．1．2项下方法制备阴性对照品溶液。取阴性对照品溶液、对照品溶液和供试品溶液进行测定，结果阴性样品溶液对测定冰片的含量无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察：取异龙脑、龙脑对照品适量，精密称定，加内标溶液配置成异龙脑含量为 0．709 0，0．354 5，0．177 25，0．088 625，0．044 3，0．022 2，0．011 1，0．005 54 g ／L 的溶液，龙脑含量为 1．101 0，0．55 05，0．275 25，0．137 6，0．068 8，0．034 4，0．017 2，0．008 602 g ／L 的溶液，进样测定峰面积，以异龙脑和龙脑的质量浓度（X）为横坐标、峰面积与内标物质的峰面积比值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y＝1．967 X+0．002（r＝1．000，n＝8）， Y＝1．992 X+0．004（r＝1．000， n＝8）。结果表明，异龙脑进样量在 0．011 1 ～ 1．418 0 μg范围内，龙脑进样量在 0．017 2 ～2．202 0 μg范围内与峰面积线性关系均良好。

精密度试验：取线性关系考察项下第3份对照品溶液，连续进样7次，测定峰面积。结果异龙脑、龙脑与内标溶液峰面积比值的 RSD值分别为0．28%和0．25%（n＝7），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取口腔溃疡散（批号为3100002），按照供试品溶液制备方法制备溶液，自制备后每隔3 h进样1次，测定24 h内异龙脑和龙脑峰面积与内标峰面积的比。结果的平均值为 0．535（RSD＝1．7% ）和 0．980（RSD＝1．9%），表明供试品溶液制备后24 h内基本稳定。

重复性试验：取口腔溃疡散（批号为3100002），称取6份，按照供试品溶液制备方法制备溶液。结果样品中异龙脑和龙脑的含量平均值分别为15．272 mg／g和28．018 mg／g，RSD 分别为 0．96% 和 0．69% （n ＝ 6），表明方法重复性较好。

图1 龙脑含量测定气相色谱图

加样回收试验：取异龙脑对照品13．78 mg和龙脑对照品23．06 mg，加无水乙醇溶解并定容至10 mL容量瓶中（质量浓度分别为 1．378 g ／L，2．306 g ／L）。精密量取1 mL，置锥形瓶中，挥干溶剂。取口腔溃疡散（批号为 3100002）0．1 g，称取 6 份，精密称定，分别置上述同一锥形瓶中，照供试品溶液处理方法制备供试液。结果见表1。

表1 龙脑含量测定加样回收试验结果（n＝6）

2．1．4 样品含量测定

取水杨酸甲酯、龙脑对照品、异龙脑对照品及不同企业生产的3批样品适量，按照2．1．2项下的方法制备供试品溶液，分别吸取2 μL注入气相色谱仪，测定峰面积，按内标法计算。以龙脑和异龙脑含量之和作为冰片的含量。企业Ⅰ生产的3批口腔溃疡散冰片含量分别占处方量的96．0%，96．2%和97．5%，企业Ⅱ生产的3批口腔溃疡散冰片含量为82．8%，83．1%和86．8%，企业Ⅲ生产的3批口腔溃疡含片冰片含量为 75．9%，59．2%和49．8%，企业Ⅳ生产的3批口腔溃疡散冰片含量为 42．0% ，33．5% 和 43．4% 。

2．2 挥发性成分分析

2．2．1 色谱条件[8]

MS条件：电子轰击离子源（EI）离子源，离子源温度230℃；扫描质量范围50～540 amu；接口温度280℃；开始时间2．0 min。GC条件：HP-5MS毛细管气相色谱柱（30 m × 0．25 mm，0．25 μm）；柱温为程序升温，初始温度40℃，保持5 min后，以5℃ ／min升温至220℃，保持 3 min；进样口温度 210℃；柱流量为 1．0 mL／min；分流比为10∶1；顶空瓶加热温度85℃，定量环温度90℃，传输线温度105℃[9]。

2．2．2 溶液制备

取样品适量，研匀，精密称取1 g，置25 mL顶空进样瓶中，精密加水10 mL，摇匀，即得。

2．2．3 分析结果

对来自不同生产企业的4批供试品溶液进行检测。以面积归一化法计算各化学成分的相对百分含量，通过NIST11谱库进行检索。

企业Ⅰ：口腔溃疡散离子流图见图2 A。通过鉴定，确定了6个色谱峰，相对百分含量占总挥发性成分的99．1%。挥发性物质化学成分及相对百分含量见表2。

企业Ⅱ：口腔溃疡散离子流图见图2 B。通过鉴定，确定了7个色谱峰，相对百分含量占总挥发性成分的97．8%。挥发性物质化学成分及相对百分含量见表3。

企业Ⅲ：口腔溃疡含片离子流图见图2 C。通过鉴定，确定了18个色谱峰，相对百分含量占总挥发性成分的97．1%。挥发性物质化学成分及相对百分含量见表4。

表2 企业Ⅰ的口腔溃疡散化学成分相对含量

图2 企业Ⅰ～Ⅳ生产的口腔溃疡系列离子流图

企业Ⅳ：口腔溃疡含片离子流图见图2 D。通过鉴定，确定了5个色谱峰，相对百分含量占总挥发性成分的99．0%。挥发性物质化学成分及相对百分含量见表5。

表3 企业Ⅱ的口腔溃疡散化学成分相对含量

表4 企业Ⅲ的口腔溃疡含片化学成分相对含量

3 讨论

由表2至表5可见，散剂的冰片含量明显高于含片的含量，不同企业生产样品的冰片含量差异较大，故该系列制剂的标准应增加冰片的含量测定项以进行标准的完善和提高。口腔溃疡含片和口腔溃疡散的处方量及工艺不同，规格及服用量不同，为进行标准统一和对比研究，可规定样品每1 g中冰片的含量不得少于处方量的 80．0% 。

分别鉴定了4家生产企业样品中的了6，7，18，5个化学成分，其中龙脑和异龙脑的相对含量分别为97%，93%，53%和98%。异龙脑、龙脑、葑醇及樟脑为4批样品的共有成分，除此之外，与其他3批样品不同的是，企业Ⅲ生产的口腔溃疡含片样品鉴定出胡薄荷酮（相对含量为 6．22% ）、薄荷醇（相对含量 14．62%）、[1 R-(1α，2β，5α)]-乙酸 -5-甲基 -2-(1-甲基乙基)环己酯（相对含量为 2．96% ）、α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯等成分，这些化学成分在薄荷挥发油的相关研究中有报道[10-13]。但制剂处方中不含有薄荷挥发油或提取物，国家食品药品监督管理总局网站未查询到该药品注册补充申请更改有关处方制法等的备案情况。

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