鲜红天麻化学成分研究△

郑秀花，刘伟，陈龙，王晓，郭兰萍，董红敬*

[1.山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355；2.齐鲁工业大学(山东省科学院) 山东省分析测试中心 山东省中药质量控制技术重点实验室，山东 济南 250014；3.中国中医科学院 中药资源中心，北京 100700]

多数中药需炮制后才能供临床使用，经过炮制后其药性、化学成分等均发生了一定程度的变化[1-5]。天麻为兰科植物天麻GastrodiaelataBl.的干燥块茎，具有息风止痉、平抑肝阳、祛风通络的功能，常用于头痛、肢体麻木等症状的治疗[6-7]。历代本草记载天麻的炮制方法主要有酒制、姜制等，现多用其蒸制品[8-12]。目前关于天麻干品化学成分的研究颇多，发现其主要含有天麻素、巴利森苷等酚类化合物[13-16]。然而对新鲜天麻化学成分的研究确鲜有报道，目前多采用LC-UV/MS等分析方法对其炮制前后的成分变化进行推测，并不能对其变化后的成分进行结构确认[17]。对鲜红天麻的化学成分进行系统分离，可为红天麻炮制前后化学成分变化研究提供良好的物质基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Waters 2695高效液相色谱仪(美国Waters公司)；RIGOL-3000系列高效液相色谱仪(北京普源精电科技有限公司)；CHEETAHTMMP系列中压制备液相色谱仪(天津博纳艾杰尔科技有限公司)；分析型色谱柱为Waters-Symmetry®C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(沃特世公司)；半制备型色谱柱为YMC Pack ODS-A(250 mm×10.0 mm，5 μm)(日本YMC公司)；Bruker-400核磁共振波谱仪(瑞士布鲁克公司)；Agilent 6520四级杆飞行时间质谱仪(美国安捷伦科技有限公司)。

1.2 材料

色谱级甲酸(天津市科密欧化学试剂有限公司)；色谱级甲醇(山东禹王实业有限公司化工分公司)；色谱乙腈(美国Tedia公司)。

实验所用红天麻采集于云南省昭通市彝良县小草坝天麻种植基地，经云南省农业科学院药用植物研究所刘大会研究员鉴定为兰科天麻属植物红天麻GastrodiaelataBl.f.elata的新鲜块茎。

2 提取与分离

鲜红天麻36 kg，洗净，切块，榨汁，过滤，滤液采用D101大孔树脂进行分离纯化，分别用纯水(25 L)，10%(25 L)、30%(25 L)、50%(25 L)、70%(25 L)、95%乙醇(25 L)水梯度洗脱，合并70%乙醇水部位，浓缩得浸膏19.695 g。取70%乙醇水部位浸膏，采用50%甲醇水溶解后过0.45 μm有机滤膜，采用中压制备色谱(C18反相柱，40 mm×400 mm)，分别以甲醇-0.1%甲酸水(30%、50%、100%)进行梯度洗脱，共分离得到10个流分(Fr.1～10))。分别取 Fr.3～5(1.283 g)、Fr.7(108 mg)，采用甲醇-0.1%甲酸水(50∶50，V/V)进行等度洗脱，得到化合物1(22 mg)、2(15 mg)、3(156 mg)、4(72.3 mg)；Fr.8(160 mg)用甲醇-0.1%甲酸水(69∶31，V/V)进行等度洗脱，得化合物5(10 mg)、6(9 mg)；Fr.10(89 mg)用甲醇-0.1%甲酸水(70∶30，V/V)等度洗脱，得到化合物7(19 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色针晶，ESI-MS：m/z243.10[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：6.99(2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，6′)，6.95(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6)，6.92(1H，br d，H-2)，6.78(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.65(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，4.20(2H，s，H-7)，3.73(2H，s，H-7′)，3.19(3H，s，-OCH3)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.8(C-4′)，154.9(C-4)，131.7(C-1′)，130.5(C-2)，129.5(C-1)，128.3(C-3)，128.8(C-2′，6′)，127.3(C-6)，115.4(C-3′，5′)，115.2(C-5)，74.2(C-7)，57.5(-OCH3)，34.8(C-7′)。该化合物数据与文献报道一致[18]，化合物1鉴定为4-羟基-3-(4-羟基苄基)苄基甲基醚。

化合物2：白色结晶，ESI-MS：m/z205.06[M+H]+；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.20(2H，s，4，4′-OH)，6.96(4H，d，J=8.4 Hz，H-2，2′，6，6′)，6.66(4H，d，J=8.4 Hz，H-3，3′，5，5′)，3.68(2H，s，H-7)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.9(C-4，4′)，132.6(C-1，1′)，129.9(C-2，2′，6，6′)，115.6(C-3，3′，5，5′)，39.4(C-7)。该化合物数据与文献报道一致[19]，化合物2鉴定为4，4′-二羟基二苯甲烷。

化合物3：淡黄色粉末，ESI-MS：m/z175.07[M+Na]+，151.08[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.35(1H，br s，4-OH)，7.11(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.72(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，4.30(2H，s，H-7)，3.41(3H，q，J=7.2 Hz，H-1′)，1.11(3H，t，J=7.2 Hz，H-2′)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：157.2(C-4)，129.7(C-2，6)，129.3(C-1)，115.4(C-3，5)，72.0(C-7)，64.9(C-1′)，15.6(C-2′)。以上数据与文献报道一致[20]，化合物3鉴定为对羟苄基乙基醚。

化合物4：白色粉末，ESI-MS：m/z253.09[M+H]+，229.09[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.50(2H，-OH)，7.11(4H，d，J=8.4 Hz，H-2，2′，6，6′)，6.73(4H，d，J=8.4 Hz，H-3，3′，5，5′)，4.33(4H，s，H-7，7′)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：157.3(C-4，4′)，129.7(C-2，2′，6，6′)，129.1(C-1，1′)，115.5(C-3，3′，5，5′)，71.4(C-7，7′)。以上数据与文献报道一致[21]，化合物4鉴定为4，4′-二羟基二苄基醚。

化合物5：白色粉末，ESI-MS：m/z307.15[M+H]+，305.12[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：9.16(3H，-OH)，6.97(2H，d，J=8.0 Hz，H-2′，6′)，6.92(2H，d，J=8.0 Hz，H-2″，6″)，6.84(1H，d，J=2.4 Hz，H-3)，6.77(1H，dd，J=8.0，2.4 Hz，H-5)，6.68，(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.64(2H，d，J=8.0 Hz，H-3″，5″)，6.62(2H，d，J=8.0 Hz，H-3′，5′)，3.68(2H，s，H-7′)，3.63(2H，s，H-7″)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.8(C-3″)，155.7(C-4″)，153.4(C-1)，132.6(C-4)，132.5(C-1″)，131.9(C-2)，130.9(C-3)，129.9(C-2′，6′)，129.8(C-2″，6″)，128.3(C-1′)，127.4(C-5)115.5(C-3′，5′)，115.4(C-6，3″，5″)，39.8(C-7″)，34.9(C-7′)。以上数据与文献报道一致[22]，化合物5鉴定为2，4-二对羟基苄基苯酚。

化合物6：白色粉末，ESI-MS：m/z353.23[M+NH4]+，335.13[M-H]-；1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：8.32(2H，-OH)，7.24(2H，d，J=8.4 Hz，H-2″，6″)，7.23(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，7.13(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，6.96(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，6.77(2H，d，J=8.0 Hz，H-3″，5″)，6.73(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，4.93(2H，s，H-7′)，4.38(2H，s，H-7)，4.35(2H，s，H-7″)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：158.4(C-4)，157.7(C-4″)，157.3(C-4′)，135.0(C-1)，131.0(C-1′)，130.1(C-2′，6′)，129.8(C-2″，6″)，129.0(C-2，6)，127.6(C-1″)，115.6(C-3″，5″)，115.5(C-3″，5″)，115.0(C-3，5)，71.5(C-7′)，71.1(C-7)，69.7(C-7″)。以上数据与文献报道一致[23]，化合物6鉴定为天麻酚A(Gastrol A)。

化合物7：白色粉末，UV λmax(nm)：201.3，230.8，274.7。ESI-MS：m/z281.1147[M+Na]+(理论值281.114 8，化合物分子式为C16H18O3)；1H-NMR数据7.24(2H，d，J=8.4 Hz)，7.22(2H，d，J=8.4 Hz)，6.94(2H，d，J=8.4 Hz)，6.76(2H，d，J=8.4 Hz)可归属于二组 AA′BB′偶合的苯环质子信号，显示化合物中含有两个对位取代的苯环；δH4.93(2H，s)、4.35(2H，s)显示有两个亚甲基信号，HMBC显示，δH4.93与δC127.6、130.0、158.3有远程相关，δH4.35与δC129.5、65.1有远程相关，说明两个亚甲基信号连接在苯环上，推断化合物为4，4′-二羟基二苄基醚的衍生物[21]。1H-NMR数据δH3.43(2H，q)、1.12(3H，t)及1H-1H COSY数据显示化合物中含有-OCH2CH3基团；HMBC显示δH3.43(2H，q)与71.7有远程相关。故确定-OCH2CH3连在苄基上。因此，化合物7鉴定为4-乙氧甲基苯基-4′-羟基苄醚[24]，化合物7的主要HMBC及1H-1HCOSY关系如图1所示，具体碳氢信号归属见表1。

图1 化合物7的主要HMBC及1H-1H COSY关系

表1 化合物7的1H-NMR(400 MHz)和13C-NMR(100 MHz)数据(DMSO-d6)

4 结论

文献报道，干天麻中主要含有巴利森苷类、天麻素、对羟基苯甲醇的多聚体等化合物，本研究对鲜红天麻70%乙醇水的大孔树脂部位进行了分离，得到的主要是分子量较小的苯基取代衍生物，可为红天麻炮制前后化学成分变化研究提供一定的物质基础。

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